植物生理指標(biāo)測定的試驗(yàn)方法簡介

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1.材料與方法1.1材料處理

生菜，選取整齊、質(zhì)地脆嫩、顏色翠綠或深綠，且無腐爛、無蟲食的作為試驗(yàn)試材。適當(dāng)剝?nèi)ネ獠恳恍┦軗p苞葉，使其大小整齊一致，將生菜用0.02%次氯酸鈉浸泡3min,晾干水分后，五棵作為一個試驗(yàn)組，用塑料袋包裝，分別在-4℃，0℃，4℃以及室溫下貯藏。每隔2d測定一次貯藏生菜的生理指標(biāo)，貯藏期間相對濕度為70%。1.2試驗(yàn)使用的化學(xué)試劑碳酸鈣粉（石英砂），80%的丙酮；1mg.ml-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，3，5-二硝基水楊酸試劑；去離子水；0.6%的硫代巴比妥蒜（TBA），10%的三氯乙酸（TCA）;0.2mol/LPH=7.0的磷酸緩沖液,0.1mol/LH202溶液;0.05mol/LPH=7.8磷酸緩沖液,提取介質(zhì)（0.05mol/LPH=7.8磷酸緩沖液，內(nèi)含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的聚乙烯吡咯烷酮）,130mmol/LMet溶液,750umo1/LNBT溶液,100umol/LEDTA溶液，20umo1/L核黃素，蒸餾水；質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%H202溶液，pH5.5磷酸緩沖液，0.05mol/L愈創(chuàng)木酚，20%的三氯乙酸（TCA）；pH5.5磷酸緩沖液，20%的三氯乙酸（TCA）,PVP，0.1mol/L兒茶酚；1.3試驗(yàn)的儀器設(shè)備

天平，分光光度計，水浴鍋，離心機(jī)，研缽，打孔器，燒杯，容量瓶，移液管，試管，漏斗，濾紙，光照箱，培養(yǎng)箱，冰箱，電導(dǎo)儀，1.4試驗(yàn)方法1.4.1失重率

采用差量法計算。失重率（%）=(入貯前重量一貯藏后重量)/入貯前重量×100%1.4.2葉綠素含量

葉綠素含量的測定采用分光光度比色法[1]。取0.5g生菜葉片研磨，加少量的碳酸鈣粉及80%丙酮進(jìn)行研磨，勻漿過濾后用80%的丙酮定容至15ml，以80%的丙酮作對照，在分光光度計上測定665nm,649nm,470nm處的光密度值。以Amon法公式計算葉綠素的含量。

色素的濃度(C)?提取液體積?稀釋倍數(shù)樣品鮮重(或干重)葉綠素總量（mg/g）=

1.4.3還原糖含量

采用3,5一二硝基水楊酸(DNS)比色法。稱取生菜葉片樣品1g，加8mL蒸餾水勻漿，10000rpm離心20min，吸取上清液2.0mL，加1.5mL的DNS試劑，沸水中煮5min,冷卻后蒸餾水用定容到25.0mL,測A540。以葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算還原糖含量。1.4.4電導(dǎo)率測定

用打孔器取10片6~8mm的生菜葉片，用自來水沖洗數(shù)次，再用去離子水沖洗，然后用50ml的去離子水加蓋浸泡1h,測電導(dǎo)率S1，（以蒸餾水為空白對照組。煮沸1~2min，靜置1h，再測電導(dǎo)率S2。相對電導(dǎo)率L=S1/S2.）。1．4.5丙二醛(MDA)含量

采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法。取生菜葉片樣品1g參與2mL10%TCA和少量石英砂,研磨，再加8mlTCA進(jìn)一步研磨，勻漿液4000r/min離心10min。取2mL上清液，加2ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%TBA溶液，沸水中煮15min，冷卻后離心，取上清液測定450，532和600nm波長下的吸光度值，以TCA溶液取代酶液作為空白。根據(jù)公式MDA質(zhì)量摩爾濃度(umol.L-1)=c.N.W-1計算出MDA濃度及生菜樣品中的含量1.4.6超氧化物歧化酶(SOD)活性

取生菜樣品0.5g，參與6mL提取介質(zhì)（0.05mol/LPH=7.8磷酸緩沖液，內(nèi)含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%

的聚乙烯吡咯烷酮），冰浴研磨，參與提取介質(zhì)使得終體積為10ml。4℃下10500r/min離心20min，上清液為SOD粗酶液。酶活力測定：反應(yīng)體系中順次參與0.05mol/LpH7.8磷酸緩沖溶液3mL,130mmol/LMet溶液0.6mL,750umo1/LNBT溶液0.6mL,100umol/LEDTA溶液0.6mL,粗酶液0.2mL,20umo1/L核黃素0.6mL，蒸餾水0.4ml振蕩搖勻，以緩沖液作空白對照，不加酶液(以PBS代替)的反應(yīng)管作為最大光化還原管，在40001ux下照光20min后馬上

-1

避光迅速測定A560的值。SOD活性=（A0-AS）.VT.(0.5AO.WF.V1)

-1

SOD比活力=SOD總活性.C

1.4.7過氧化物酶POD活力測定

愈創(chuàng)木酚比色法測定過氧化物酶活性，取生菜葉片樣品0.5g，參與pH5.5磷酸緩沖液6mL，冰浴研磨勻漿，勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管中，4000r/min離心10min，上清液轉(zhuǎn)入25ml容量瓶，沉淀物用5mlpH5.5磷酸緩沖液再提取兩次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度。酶活性測定反應(yīng)體系：2.9mL磷酸緩沖液(pH5.5),1.0mL0.05mol/L愈創(chuàng)木酚,0.1mL粗酶液，最終參與0.1mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%H202溶液，迅速顛倒混勻,于37℃水浴中15min,轉(zhuǎn)入冰浴中，并加2.0ml20%三氯乙酸終止反應(yīng)，過濾，稀釋，以煮沸5min酶液代替粗酶液作為對照，測D470。以每分鐘內(nèi)D470變化0.01為1個過氧化物酶活性單位（U）過氧化物酶活性=

1.4.8多酚氧化酶PPO活力測定比色法測定多酚氧化酶活性，

1.4.9過氧化氫酶CAT活性測定紫外吸收法測定過氧化氫酶活性，稱取0.5克生菜葉片參與2~3ml4℃預(yù)冷的PH=