修改蛋白質(zhì)重點

本文格式為Word版，下載可任意編輯——修改蛋白質(zhì)重點1、蛋白工程之父ULmer

2、概念(PPT)蛋白質(zhì)工程(ProteinEngineering)是以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)規(guī)律與生物功能的關(guān)系為基礎(chǔ)，利用基因工程技術(shù)對現(xiàn)存蛋白質(zhì)加以定向改造，設(shè)計、構(gòu)建并最終獲得新型蛋白質(zhì)的現(xiàn)代生物技術(shù)。

3、蛋白質(zhì)工程原理基因指導蛋白質(zhì)的合成,設(shè)計和改造基因獲取新蛋白質(zhì)。4、蛋白質(zhì)工程設(shè)計原理基因水平，蛋白質(zhì)水平5、設(shè)計的三種類型小改：幾個殘基的替換中改：肽鏈或結(jié)構(gòu)域替換，不同來源結(jié)構(gòu)域拼接組裝大改：設(shè)計全新蛋白質(zhì)

6、程序①篩選純化目的蛋白，研究其特性；

②制備晶體，氨基酸測序，X射線晶體衍射分析、核磁共振分析等研究，獲得蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)數(shù)據(jù)；

③結(jié)合生物信息學的方法對蛋白質(zhì)的改造進行分析；

④由氨基酸序列及其化學結(jié)構(gòu)預計蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，確定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，進而從中找出可以修飾的位點和可能的途徑；

⑤根據(jù)氨基酸序列設(shè)計核酸引物或探針，并從cDNA文庫或基因文庫中獲取編碼該蛋白的基因序列；

⑥在基因改造方案設(shè)計的基礎(chǔ)上，對編碼蛋白的基因序列進行改造，并在不同的表達系統(tǒng)中表達；

⑦分開純化表達產(chǎn)物，并對表達產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能進行檢測。7、肽單位的概念

肽鍵具有部分雙鍵性質(zhì)，其連接的酰胺基(-CO-NH-)處于同一平面，稱為肽單位。8、分子伴侶概念

是進化上十分保守的蛋白質(zhì)家族，廣泛存在于多種生物體內(nèi)，其主要作用是與新生肽或部分折疊的蛋白質(zhì)的疏水表面結(jié)合，加速其折疊或組裝成自然構(gòu)象的進程，并防止其相互聚集和錯誤折疊。

9、中心法則Crick提出

10、其次遺傳密碼特性（1）簡并性（2）多義性（3）全局性和繁雜性

11、蛋白質(zhì)分子設(shè)計原理計算機模擬，基因構(gòu)建，獲得突變蛋白產(chǎn)品，功能分析

12、目的一是為有目的的蛋白質(zhì)工程改造提供設(shè)計方案和指導性信息，二是摸索蛋白質(zhì)的折疊機理

13、層次一是在蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)已知的基礎(chǔ)上的分子設(shè)計，二是在三維結(jié)構(gòu)未知的狀況下，借助一級結(jié)構(gòu)序列信息及生化性質(zhì)進行分子設(shè)計工作（兩個，P46）

14、分類1、定點突變或化學修飾法，2、拼接組裝設(shè)計法，3、重頭設(shè)計全新蛋白質(zhì)15、設(shè)計程序

1.收集相關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)信息2、建立結(jié)構(gòu)模型3.生物信息分析4、選擇設(shè)計目標5.序列設(shè)計6.預計結(jié)果7.獲得新蛋白質(zhì)8.新蛋白質(zhì)的檢驗9.完成新蛋白質(zhì)設(shè)計16、定位突變

基于自然蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)分子“小改〞是指對已知結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)進行少數(shù)幾個殘基的修飾、替換或刪除等，這是目前蛋白質(zhì)工程中最廣泛使用的方法，主要可分為蛋白質(zhì)修飾和基因定位突變兩類17、蛋白質(zhì)分子拼接

蛋白質(zhì)由結(jié)構(gòu)元件組裝而成，可以將不同蛋白質(zhì)的特定結(jié)構(gòu)元件剪裁拼接起來，從而將不同蛋白的功能結(jié)合在一起創(chuàng)造出新的蛋白。

18、linker設(shè)計原理

長度：過長對蛋白裂解敏感，免疫原性增加；過短影響蛋白折疊

常用非極性的疏水氨基酸：構(gòu)象廣泛，有利于運動；體積小有利于堆積19、全新蛋白質(zhì)設(shè)計概念

蛋白質(zhì)分子從頭設(shè)計：基于蛋白質(zhì)折疊規(guī)律，從一級結(jié)構(gòu)出發(fā)，設(shè)計制造自然界中不存在的具有特定結(jié)構(gòu)和功能的全新蛋白質(zhì)。(P59)20、蛋白質(zhì)的幾種修飾方法

側(cè)鏈基團的化學修飾法（氨基、羧基、巰基等等）、位點專一性修飾（親和標記、光親和標記）、聚乙二醇修飾、化學交聯(lián)和化學偶聯(lián)（戊二醛法、重氮化法等等）21、體外定向進化

是在尚不知道蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，或者根據(jù)現(xiàn)有的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)知識尚不能進行有效的定點突變時，借鑒試驗室手段在體外模擬自然進化的過程，使基因發(fā)生大量變異，并定向選擇出所需性質(zhì)或功能。22、易錯PCR

是一種相對簡單、快速、廉價的隨機突變方法。它通過改變PCR反應條件，如降低一種dNTP的量（降至5%-10%）、以dITP來代替被減少的dNTP、增加Mn++和改變Mg++的濃度或使用低保真度的DNA聚合酶等，使堿基在一定程度上隨機錯配而引入多點突變。23、DNA重組

指DNA分子內(nèi)或分子間發(fā)生的遺傳信息的重新共價組合過程

24、噬菌體展示概念

概念：是將外源肽或蛋白質(zhì)與特定噬菌體衣殼蛋白融合并展示于噬菌體表面的技術(shù)。原理：外源DNA片段能被插入到絲狀噬菌體基因組的一個外被蛋白的基因中，這個外源DNA片段所編碼的序列可與此外被蛋白一起與融合蛋白的形式表達，并顯示在噬菌體表面。

25、報告分子必需具備的特點：

①報告分子應不存在與宿主或易于與內(nèi)源基因區(qū)別；②有簡單、快速、靈敏、經(jīng)濟的分析方法檢測報告分子；③報告分子的分析結(jié)果應具有很寬的線性范圍；④報告基因的表達不改變受體細胞或生物的生理活動26、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的解析方法

X-射線晶體衍射法，核磁共振波譜，電鏡三維重構(gòu)、各種光譜技術(shù)、顯微技術(shù)和計算機模擬（選擇題，倫琴射線）27、粗分開與細分開有哪些方法

粗分開：硫酸銨分級沉淀、有機溶劑分級沉淀、超速離心、等電點沉淀、透析、超過濾、蛋白質(zhì)結(jié)晶

細分開：分子篩層析、離子交換層析、吸附層析、親和層析、電泳28、蛋白質(zhì)的鑒定

蛋白質(zhì)純度鑒定、蛋白質(zhì)分子量及等電點測定、蛋白質(zhì)氨基酸組成及順序分析蛋白質(zhì)結(jié)晶與結(jié)構(gòu)分析、蛋白質(zhì)免疫印跡（Western-blo