金免疫技術(shù)課件

人民衛(wèi)生出版社第二十章

金免疫技術(shù)人民衛(wèi)生出版社本章要點1.

膠體金免疫滲濾技術(shù)的檢測原理、方法類型和關(guān)鍵技術(shù)。2.

膠體金免疫層析技術(shù)的檢測原理、方法類型和關(guān)鍵技術(shù)。3.

金免疫技術(shù)的方法學(xué)評價及臨床意義。人民衛(wèi)生出版社目錄1

膠體金免疫滲濾技術(shù)2

膠體金免疫層析技術(shù)人民衛(wèi)生出版社前

言?

金免疫技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原/抗體檢測的一種免疫標(biāo)記技術(shù)。?

該類試驗的最大特點是不需要大型設(shè)備，對檢測人員稍加培訓(xùn)即能掌握操作要求和判定標(biāo)準(zhǔn)。人民衛(wèi)生出版社?

膠體金也稱金溶膠，是由金鹽被還原成原金后形成的金顆粒懸液。?

膠體金顆粒大小多在1nm～100nm，微小金顆粒穩(wěn)定、均勻、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中，成為膠體金溶液。人民衛(wèi)生出版社膠

體

金優(yōu)

質(zhì)劣

質(zhì)人民衛(wèi)生出版社第一節(jié)

膠體金免疫滲濾技術(shù)?

免疫滲濾試驗始創(chuàng)于1985年，最初以酶作為標(biāo)記物。?

20世紀(jì)90年代初金免疫滲濾技術(shù)得到了快速發(fā)展，用于檢測各種傳染病的抗體和腫瘤標(biāo)志物等。?

目前臨床中用于檢測尿液HCG的“金標(biāo)”早孕診斷試劑就是應(yīng)用這種方法。人民衛(wèi)生出版社一、檢測原理?

將抗原或抗體點加在固相載體硝酸纖維素膜上，制成抗原或抗體包被的微孔濾膜并貼置于吸水材料上，依次在膜上滴加標(biāo)本、免疫金及洗滌液等，液體很快滲入吸水材料中，陽性反應(yīng)即在膜上呈現(xiàn)紅色斑點。人民衛(wèi)生出版社二、方法類型?

雙抗體夾心法測抗原?

間接法測抗體

人民衛(wèi)生出版社三、關(guān)鍵技術(shù)（一）試劑盒組成?

膠體金反應(yīng)板?

膠體金標(biāo)記物?

洗滌液?

抗原參照品或抗體陽性對照品人民衛(wèi)生出版社（二）技術(shù)要點1

將反應(yīng)板平放于實驗臺面上，于小孔內(nèi)滴加含待測抗原的標(biāo)本1～2滴，待完全滲入，待測抗原與膜上的抗體反應(yīng)而結(jié)合在膜上。2

于小孔內(nèi)滴加膠體金標(biāo)記抗體試劑1～2滴，待完全滲入，使膠體金標(biāo)記抗體與結(jié)合在膜上的待測抗原反應(yīng)。人民衛(wèi)生出版社3

于小孔內(nèi)滴加洗滌液2～3滴，待完全滲入，洗去未結(jié)合的膠體金標(biāo)記抗體。4

在膜中央有清晰的淡紅色或紅色斑點顯示者判定為陽性反應(yīng)；反之則為陰性反應(yīng)。斑點呈色的深淺相應(yīng)地提示陽性強度。人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社雙抗體夾心法測抗原待測標(biāo)本

金標(biāo)抗體AB人民衛(wèi)生出版社。人民衛(wèi)生出版社第二節(jié)

膠體金免疫層析技術(shù)?

免疫層析技術(shù)的原理與滲濾技術(shù)相同，不同點在于液體的移動是基于層析作用的橫流，而不是通過直向的穿流。?

該方法的試劑為試紙條形式，結(jié)構(gòu)簡單。?

測定項目包括HCG等激素、腫瘤標(biāo)志物、心血管病標(biāo)志物、傳染病的抗原和抗體等。人民衛(wèi)生出版社一、檢測原理將各種反應(yīng)試劑分點固定在試紙條上，檢測標(biāo)本滴加在試紙條的一端，通過層析作用使樣品在層析材料上泳動，樣本中的待測物與試紙條上的試劑發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，形成的復(fù)合物被富集或固定在層析條上的特定區(qū)域（檢測線），無關(guān)物則越過該區(qū)域而被分離，通過膠體金的呈色條帶判讀實驗結(jié)果。人民衛(wèi)生出版社二、方法類型?

雙抗體夾心法測抗原AGTCB人民衛(wèi)生出版社?

競爭法測抗原AGTCB人民衛(wèi)生出版社三、關(guān)鍵技術(shù)（一）試劑盒組成A、B兩端分別粘貼吸水材料，G處為干燥固定在玻璃纖維膜等材料上的膠體金結(jié)合物，T處粘附有已知的抗體或抗原，C處為粘附的質(zhì)控品（抗免疫金抗體），T、C點物質(zhì)往往以直線的形式包被在膜上。AGTCB人民衛(wèi)生出版社（二）技術(shù)要點以雙抗體夾心法為例：1

將試紙條標(biāo)記線一端浸入待測標(biāo)本中2秒～5秒或在標(biāo)本加樣處加一定量的待檢標(biāo)本，平放于水平桌面。2

5min～20min內(nèi)觀察結(jié)果。3

結(jié)果判斷。人民衛(wèi)生出版社雙抗體夾心法測抗原層析待測標(biāo)本包金標(biāo)抗體包被抗體被抗金標(biāo)抗體NC膜觀察窗結(jié)吸水墊吸水墊合物墊人民衛(wèi)生出版社結(jié)果觀察陽性陰性無效T

C人民衛(wèi)生出版社?

金免疫技術(shù)具有操作簡便、快速以及操作人員不需技術(shù)培訓(xùn)，除試劑外無需特殊儀器設(shè)備，且試劑穩(wěn)定，便于保存等優(yōu)點，因此特別適用于急診檢驗。?

目前臨床檢驗中已開展的項目有：HCG、HBV等。新項目正在不斷發(fā)展中。人民衛(wèi)生出版社小

結(jié)?

金免疫技術(shù)是以膠體金作為標(biāo)記物的免