生物堿介紹的學(xué)習(xí)課件

生物堿介紹的學(xué)習(xí)課件第1頁/共33頁第五章中藥制劑中各類化學(xué)成分分析

第一節(jié)含生物堿（alkaloid）類成分的分析第2頁/共33頁生物堿的分布

含生物堿量多的科有罌粟科、防已科、茄科、小檗科、毛茛科、蕓香科、夾竹桃科、馬錢科及茜草科等，中藥有三尖杉、麻黃、黃連、黃柏、烏頭、延胡索、粉防已、顛茄、洋金花、貝母、百部等。第3頁/共33頁二、生物堿的理化性質(zhì)第4頁/共33頁溶解度多數(shù)極性較小，屬于親脂性堿，游離狀態(tài)下幾乎不溶于水。成鹽后則水溶性增加，易溶于水及醇中，不溶或難溶于苯、氯仿、乙醚等。生物堿和其鹽這一相反的溶解性質(zhì)可以用于它的提取、分離和精制。第5頁/共33頁酸堿性生物堿結(jié)構(gòu)中含氮，多呈堿性。能與無機(jī)酸、有機(jī)酸成鹽N：+H+X-[N：H]+X-堿性強(qiáng)弱為：季胺>叔胺>仲胺>伯胺>酰胺沉淀反應(yīng)第6頁/共33頁三、含生物堿類成分中藥制劑的定性鑒別第7頁/共33頁常用的提取溶劑系統(tǒng)

非極性溶劑系統(tǒng)：一般先用10%的氫氧化銨、碳酸氫鈉或氫氧化鈉堿化，使生物鹽游離，后用氯仿或乙醚提取，缺點(diǎn)是不能提出水溶性生物堿。第8頁/共33頁極性溶劑系統(tǒng)：極性較大的生物堿可用中性甲醇、乙醇、酸水（常用0.1%--1%的鹽酸、硫酸等）以及緩沖液提取，但提出的雜質(zhì)較多，需凈化。

第9頁/共33頁混合溶劑系統(tǒng)：用不同極性的溶劑按不同比例混合，可較好地進(jìn)行提取。

第10頁/共33頁（一）一般理化鑒別第11頁/共33頁（二）色譜鑒別

1、薄層色譜法

吸附劑的選擇：硅膠本身有弱酸性，與生物堿成鹽，使吸附力增強(qiáng)，若用中性展開系統(tǒng)，其Rf值小，易拖尾。一般用堿性展開系統(tǒng)或在中性中加少量堿性溶劑，如二乙胺、氫氧化銨或用氨水飽和（展開缸中放一小杯氨水）或制備堿板（在硅膠板中加稀堿溶液）。堿性氧化鋁因本身帶有堿性，故用中性展開劑即可使生物堿得到很好的分離。第12頁/共33頁脂溶性生物堿----用吸附薄層法，用活度較大的吸附劑如硅膠、氧化鋁。水溶性生物堿----用硅藻土、纖維素作為支持劑，硅膠板也可以第13頁/共33頁展開劑的選擇脂溶性生物堿采取極性小的溶劑水溶性用極性大的溶劑但一般用混合溶劑較多，單一溶劑少第14頁/共33頁顯色劑的選擇某些生物堿本身有顏色，可直接于可見光下觀察。有紫外吸收的可用紫外檢測(cè)。但大部分生物堿無色且無熒光，則需噴顯色劑，最常用的顯色劑有改良碘化鉍鉀、碘蒸氣、氨蒸氣第15頁/共33頁2、紙色譜法3、高效液相色譜法4、氣相色譜法

第16頁/共33頁四、含生物堿類成分中藥制劑的含量測(cè)定（一）總生物堿的含量測(cè)定第17頁/共33頁1、化學(xué)分析法第18頁/共33頁2、

分光光度法（1）直接測(cè)定法第19頁/共33頁（2）離子對(duì)萃取比色法酸性染料比色法在一定pH介質(zhì)中，生物堿B可與氫離子H+結(jié)合生成生物堿鹽的陽離子BH+，而酸性染料在此條件下解離為陰離子In-,則陰陽離子能定量結(jié)合生成有色化合物（離子對(duì)）。再用合適的有機(jī)溶劑將該離子對(duì)提取，測(cè)定其吸收度值，進(jìn)而對(duì)生物堿定量。第20頁/共33頁注意事項(xiàng)：1、選擇適當(dāng)?shù)膒H

則生物堿成鹽，成為陽離子BH+而酸性染料成為陰離子In-，陰陽離子可結(jié)合。如pH太低，則水相酸性強(qiáng)，雖然生物堿成鹽，但酸性染料亦以酸的形式存在；pH太高則水相堿性強(qiáng)，生物堿以游離狀態(tài)存在，酸性染料以離子形式存在。都不能使陰陽離子定量地結(jié)合。2、酸性染料的選擇

常用的有溴酚藍(lán)、溴甲酚綠、溴麝香草酚藍(lán)等3、合適的有機(jī)溶劑要求對(duì)生物堿與酸性染料的結(jié)合物有很好的溶解度。氯仿、二氯甲烷P117第21頁/共33頁苦味酸鹽法第22頁/共33頁雷氏鹽比色法

第23頁/共33頁（三）色譜法1、高效液相色譜法離子對(duì)色譜、正相色譜、反相色譜。第24頁/共33頁（1）、流動(dòng)相方面的改進(jìn)A：加入硅醇基抑制劑，可在流動(dòng)相中抑制或掩蔽固定相表面的游離硅醇基的活性，使生物堿易出峰，峰形好。最常用的有二乙胺、三乙胺；B：加入離子對(duì)試劑，使其與生物堿生成離子對(duì)而掩蔽其堿性基團(tuán)，從而不會(huì)與固定相表面的硅醇基作用；常用辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉表面活性劑。

反相HPLC的改進(jìn)：第25頁/共33頁C：也可以加入季銨鹽試劑，

[R3SioH]+[A]≒[R3SioH.A]硅醇基

季銨鹽

復(fù)合物連續(xù)添加季銨鹽時(shí)，平衡向右，因而被分離的生物堿和硅醇基之間的作用被阻礙，從而使生物堿得到很好的分離。

常用有溴化四甲基胺第26頁/共33頁D：在流動(dòng)相中加入一定濃度電解質(zhì)緩沖鹽，可改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度，穩(wěn)定pH值及促進(jìn)離子對(duì)作用，從而改善峰形及分離效果。通常用磷酸鹽緩沖液，但操作時(shí)由于存在鹽，做過后應(yīng)充分洗柱，以免腐蝕柱子。第27頁/共33頁（2）、固定相方面的改進(jìn)A：選擇C鏈較短的鍵合相硅膠為固定相，如C8比C18好，原因是由于硅烷的C鏈較短則覆蓋硅膠的表面較好，只有較少的游離硅醇基。B：封尾技術(shù)可使填料的鍵合更徹底，常用三甲基氯硅烷（TMCS）處理，可減少殘余羥基，增加單體覆蓋度。（3）、增加流動(dòng)相的脂溶性（4）、升高柱溫第28頁/共33頁2、薄層色譜法第29頁/共33頁3、氣相色譜法適用于有揮發(fā)性的、遇熱不分解的生物堿類，如麻黃堿、檳榔堿、苦參堿和顛茄類生物堿。第30頁/共33頁思考題：烏頭（注1）的容量法測(cè)定的操作程序是：取樣品精密稱定，加無水乙醇溶液并放置24小時(shí)，過濾，減壓回收乙醇，至殘留液至小量時(shí)加2%鹽酸溶液（注2），移入分液漏斗中，用乙醚萃取3次（注3），在樣品液中滴加氨試液調(diào)PH9

10（注4），再用乙醚-氯仿（3:1）混合液提取３次（注5），合并萃取液，蒸干，加無水乙醇溶解．精密加入硫酸液（0.01mol/l）與甲基紅指示劑３滴，用氫氧化鈉液（0.02mol/l）滴定，并計(jì)算含量．回答：注１處，生烏頭的主要有效成分是什么？注2處，加鹽酸溶液的目的是什么？注3處，用乙醚萃取的目的是什么？注4處，滴加氨試液的目的是什么？滴于什么樣品液中？注5處，用此混合液能提取出待測(cè)成分嗎？為什么？第31頁/共33頁人有了知識(shí)，就會(huì)具備各種分析能力，明辨是非的能力。所以我們要勤懇讀書，廣泛閱讀，古人說“書中自有黃金屋。