VERO細(xì)胞培養(yǎng)課件

細(xì)胞培養(yǎng)1cellcultureVERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)從生物體內(nèi)取出組織或細(xì)胞，在體外(invitro)模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定營(yíng)養(yǎng)條件下，對(duì)這些組織或細(xì)胞進(jìn)行孵育培養(yǎng)，使之保持一定的結(jié)構(gòu)和功能，以便于我們觀察研究，這種方法就是細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）。有時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)也稱為組織培養(yǎng)（tissueculture)。VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)目的和用途

1、科學(xué)研究

（1）藥物研究開發(fā)，如新藥篩選，疫苗、基因工程藥物、細(xì)胞工程、藥物研究與開發(fā)、單克隆抗體制備等（2）基礎(chǔ)研究，如藥物作用機(jī)理、基因功能、疾病發(fā)生機(jī)理等研究2、生物制藥（1）疫苗生產(chǎn)：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)，多肽疫苗（腫瘤疫苗)等（2）基因工程藥物生產(chǎn)：如EPO等（3）抗體藥物、基因治療藥物生產(chǎn)（4）細(xì)胞工程藥物生產(chǎn)：生物細(xì)胞內(nèi)的一些生物活性多肽，生物活性物質(zhì)等（5）利用細(xì)胞法體外測(cè)定生物活性物質(zhì)的活性；并預(yù)測(cè)其在體內(nèi)的藥效和替代體內(nèi)法檢測(cè)其成品的生物活性VERO細(xì)胞培養(yǎng)主要內(nèi)容基本概念準(zhǔn)備工作培養(yǎng)用液基本技術(shù)污染及防治腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)參考資源VERO細(xì)胞培養(yǎng)基本概念VERO細(xì)胞培養(yǎng)初代培養(yǎng)（primaryculture）

又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)物，一般持續(xù)1-4周。

一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)（Subculture）的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。傳代培養(yǎng)（subculture/passage）

細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中,一般情況下可傳代10-50次。也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程?？寺。╟lone）從一個(gè)細(xì)胞靠有絲分裂獲得的一個(gè)細(xì)胞群體（population）從一個(gè)經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株（strain）再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群，稱為亞株（Substrain）VERO細(xì)胞培養(yǎng)cellline:

原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即成為細(xì)胞系。如果不斷繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系（finitecellline）如果可以連續(xù)傳代，則可稱為連續(xù)細(xì)胞系（continouscellline）或無限細(xì)胞系（InfiniteCellLine）有惡性的無限細(xì)胞系：“惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系”只具永生性而無惡性的細(xì)胞系：無限細(xì)胞系或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系:NIH3T3、Rat-1細(xì)胞系VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞株cellstrain:

由原代培養(yǎng)中，用選擇或克隆，選出具有特征標(biāo)記的細(xì)胞，經(jīng)傳代形成細(xì)胞株。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細(xì)胞株（finitecellstrain）如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuouscellstrain）。VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期反應(yīng)細(xì)胞增殖速度VERO細(xì)胞培養(yǎng)體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名

腫瘤細(xì)胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細(xì)胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。細(xì)胞的命名無嚴(yán)格統(tǒng)一規(guī)定，多采用有一定意義縮寫字或代號(hào)表示幾種代表性的細(xì)胞名稱：

HeLa：供體患者的姓名（來源于宮頸癌）

CHO：中國(guó)地鼠卵巢細(xì)胞（ChineseHamsterOvary）

宮-743：宮頸癌上皮細(xì)胞，1974年3月建立

NIH3T3：美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究所（NationalInstituteofHealth）建立；每3天傳代，每次接種3×105細(xì)胞／ml

VERO細(xì)胞培養(yǎng)建立細(xì)胞系（或株）的要求原代培養(yǎng)的細(xì)胞只要供體均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可傳代的細(xì)胞，需做如下說明：1、組織來源：細(xì)胞供體所屬物種，來自人體或者動(dòng)物；個(gè)體性別、年齡；取材的器官或組織。如系腫瘤組織，應(yīng)說明臨床和病理診斷，以及病歷號(hào)等。2、細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)：了解細(xì)胞一般和特殊的生物學(xué)性狀，如細(xì)胞一般形態(tài)，特異結(jié)構(gòu)，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和分裂指數(shù)，倍增時(shí)間，接種率等。如為腫瘤細(xì)胞，為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性，須做軟瓊脂培養(yǎng)，異體接種致瘤和對(duì)正常組織侵潤(rùn)力等實(shí)驗(yàn)。3、培養(yǎng)條件和方法：

應(yīng)說明細(xì)胞系（或株）適應(yīng)的生存環(huán)境，即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及適宜PH值。

VERO細(xì)胞培養(yǎng)國(guó)內(nèi)外相關(guān)細(xì)胞庫

國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫

武漢細(xì)胞庫

上海細(xì)胞庫

昆明細(xì)胞庫

成都基因治療腫瘤藥物工程技術(shù)研究中心細(xì)胞及載體服務(wù)

南京中醫(yī)藥大學(xué)新藥及海洋藥物研究中心藥理毒理研究室細(xì)胞庫目錄

湖南遠(yuǎn)泰生物技術(shù)有限公司生物資源庫

上海午立生物技術(shù)有限公司細(xì)胞株

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心保藏細(xì)胞目錄

上海華大天源生物科技有限公司提供高表達(dá)GPCR細(xì)胞株和報(bào)告基因分析細(xì)胞系：

中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心

臺(tái)灣快興科技股份有限公司Cambrex產(chǎn)品

臺(tái)灣國(guó)家衛(wèi)生研究院

美國(guó)和歐洲細(xì)胞庫

ATCC（細(xì)胞株及胚胎干細(xì)胞庫）

1）下載細(xì)胞庫目錄：2）查詢細(xì)胞株：3）胚胎干細(xì)胞庫：

CABRI(包括ECACC、DSMZ)

CAMBREX

意大利I.A.Z.

歐洲細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室列表（大全）

意大利IZSLER細(xì)胞庫

ABi病毒

德國(guó)PromoCell原代細(xì)胞

VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞庫ATCC:AmericanTypeCultureCollection(美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物收集所)ECACC:EuropeanCollectionofCellCultures(歐洲動(dòng)物細(xì)胞庫)JCRB:JapaneseCollectionofResearchBioresources(日本細(xì)胞庫)CCTCC:ChinaCenterforTypeCultureCollection(中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心)VERO細(xì)胞培養(yǎng)ATCCWHO的國(guó)際培養(yǎng)細(xì)胞文獻(xiàn)中心ATCC液氮凍存有3200個(gè)已經(jīng)過鑒定的細(xì)胞系來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系來自不同物種的近75個(gè)雜交瘤細(xì)胞株ATCC接納入庫細(xì)胞時(shí)，必須符合其入庫標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)項(xiàng)目如下：培養(yǎng)簡(jiǎn)歷凍存液細(xì)胞活力培養(yǎng)液細(xì)胞形態(tài)核型無污染檢測(cè)物種檢測(cè)免疫檢測(cè)細(xì)胞建立者VERO細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)細(xì)胞的類型及其特點(diǎn)

培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式貼附生長(zhǎng)：必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。見于各種實(shí)體瘤細(xì)胞。懸浮生長(zhǎng)：于懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)，不需要貼附于支持物表面。包括一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是血液白細(xì)胞，以及一些腫瘤細(xì)胞，如白血病細(xì)胞。VERO細(xì)胞培養(yǎng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)

每代貼附生長(zhǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過程游離期貼壁期潛伏期對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期停止期（平臺(tái)期）VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)此時(shí)細(xì)胞回縮，胞體呈圓球形10分鐘～4小時(shí)游離期（懸浮期）VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞附著于底物上，游離期結(jié)束。底物：膠原、玻璃、塑料、其它細(xì)胞等血清中有促使細(xì)胞貼壁的糖蛋白（生長(zhǎng)基質(zhì)），這些促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮細(xì)胞再與吸附有促貼壁因子的附著。貼壁期VERO細(xì)胞培養(yǎng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)此時(shí)細(xì)胞有生長(zhǎng)活動(dòng)，而無細(xì)胞分裂潛伏期：6～24小時(shí)潛伏期VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間變化成倍增長(zhǎng)，活力最佳，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂機(jī)制：接觸抑制、密度依賴性相互接觸后，如培養(yǎng)的是正常細(xì)胞，由于細(xì)胞的相互接觸能抑制細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，這種現(xiàn)象稱接觸抑制（ContactInhibition）。當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大，培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多時(shí)，細(xì)胞因營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制（DensityInhibition），導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止

腫瘤細(xì)胞的接觸抑制及密度抑制往往減弱或消失，因此細(xì)胞可向三維空間發(fā)展，導(dǎo)致細(xì)胞堆積，并可生長(zhǎng)至較高的終末細(xì)胞密度。可作為區(qū)別正常與癌細(xì)胞標(biāo)志之一。平臺(tái)期VERO細(xì)胞培養(yǎng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)1、無污染環(huán)境：保證細(xì)胞生存的首要條件

2、恒定的溫度：36.5℃±0.5℃

3、氣體環(huán)境：95%空氣，5%二氧化碳混合氣體4、細(xì)胞培養(yǎng)基：基礎(chǔ)物質(zhì)、生存環(huán)境(pH7.2-7.4、滲透壓)

培養(yǎng)細(xì)胞生存條件VERO細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)細(xì)胞的生存條件培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶

溫度、濕度和氣體由CO2恒溫孵育箱提供

生長(zhǎng)培養(yǎng)液10～20％血清

維持培養(yǎng)液2～5％血清

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)糖、氨基酸、維生素、無機(jī)離子、微量元素等

VERO細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備器材實(shí)驗(yàn)器材處理細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制VERO細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)準(zhǔn)備室（包括配液室）無菌室：緩沖間、操作間VERO細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備器材大型工具類超凈工作臺(tái)CO2培養(yǎng)箱倒置顯微鏡液氮罐酶標(biāo)儀、微孔板震蕩器消毒滅菌類紫外燈、壓力蒸汽消毒器，電熱干燥箱，濾器，酸缸配液用具自動(dòng)雙重純水蒸餾器，純水儀制備細(xì)胞用品耗材：培養(yǎng)瓶，吸管，培養(yǎng)板，凍存管VERO細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備室的設(shè)備：蒸餾器酸缸烤箱高壓鍋儲(chǔ)品柜（放未消毒物品）儲(chǔ)品柜（放消毒過的物品）包裝臺(tái)配液室的設(shè)備：扭力天平和電子天平PH計(jì)磁力攪拌器VERO細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)室的設(shè)備：液氮罐低溫冰箱（-80℃）CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）二氧化碳缸瓶4℃冰箱（放serum和培養(yǎng)用液）日光燈和紫外燈儲(chǔ)品柜（存放雜物）水浴鍋邊臺(tái)（書寫實(shí)驗(yàn)記錄）空氣凈化器系統(tǒng)三氧消毒殺菌機(jī)空調(diào)必須放在無菌間的設(shè)備：離心機(jī)超凈工作臺(tái)倒置顯微鏡VERO細(xì)胞培養(yǎng)壓力蒸汽消毒器：濕熱消毒，用途廣電熱干燥箱：用干玻璃器皿消毒（160℃，2h）濾器：過濾法除菌：大多數(shù)培養(yǎng)用液(人工合成培養(yǎng)基、血清、酶液等)超凈工作臺(tái)：為細(xì)胞操作提供無菌環(huán)境紫外燈：用于培養(yǎng)室空氣、操作臺(tái)、塑料培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等表面消毒

VERO細(xì)胞培養(yǎng)超凈工作臺(tái)工作原理利用鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺(tái)面，使工作臺(tái)內(nèi)構(gòu)成無菌環(huán)境。VERO細(xì)胞培養(yǎng)濾器VERO細(xì)胞培養(yǎng)CO2培養(yǎng)箱設(shè)定條件為37℃，5％CO2

使用時(shí)應(yīng)注意：①用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，需將瓶蓋微松，以保證通氣②保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。定期消毒③箱內(nèi)滅菌蒸餾水3L蒸餾水槽中以保持箱內(nèi)濕度，避免培養(yǎng)液蒸發(fā)VERO細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)碼型倒置熒光顯微鏡CFM-550Z

VERO細(xì)胞培養(yǎng)自動(dòng)雙重純水蒸餾器純水儀VERO細(xì)胞培養(yǎng)

酶標(biāo)儀微孔板震蕩器VERO細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)板VERO細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)瓶VERO細(xì)胞培養(yǎng)器械的清洗和消毒

VERO細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)器材處理刷洗→包裝→消毒滅菌VERO細(xì)胞培養(yǎng)玻璃器械洗消浸泡、刷洗、浸酸、和清洗一、舊的玻璃器皿的洗消1、刷洗、烘干2、泡酸、清洗3、烘干、包裝4、高壓消毒5、烘干備用VERO細(xì)胞培養(yǎng)玻璃器械洗消二、新的玻璃器皿的洗消1、自來水刷洗2、烘干、泡鹽酸3、刷洗、烘干4、泡酸、清洗5、烘干、包裝6、高壓消毒7、烘干備用VERO細(xì)胞培養(yǎng)金屬器械洗消不能泡酸洗滌劑刷洗自來水沖凈75％酒精擦拭自來水、蒸餾水沖洗晾干高壓烘干備用VERO細(xì)胞培養(yǎng)橡膠和塑料制品洗消洗滌劑洗刷

用自來水和蒸餾水沖凈

烤箱烘干新的橡膠制品洗滌方法：

0.5mol/LNaOH煮沸30分鐘，流水沖洗，0.5mol/LHCl煮沸15分鐘，流水沖洗，自來水煮沸2次，蒸餾水煮沸20分鐘，50℃烤干備用。

塑料制品特點(diǎn)：質(zhì)軟、易出現(xiàn)劃痕；耐腐蝕能力強(qiáng)、但不耐熱。

1、針式濾器帽不能泡酸液,用2％氫氧化鈉泡6-12小時(shí),或者煮沸20分鐘,在包裝之前要裝好濾膜兩張，安裝濾膜時(shí)注意光面朝上(凹向上)，然后將螺旋稍微擰松一些，放入鋁盒中在高壓鍋內(nèi)15磅30分鐘消毒，再烘干備用。2、膠塞烘干后用2％氫氧化鈉溶液煮沸30分鐘（用過的膠塞只要用沸水處理30分鐘），自來水洗凈，烘干。然后再泡入稀鹽酸液30分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。3、膠帽，離心管帽烘干后只能在2％氫氧化鈉溶液中浸泡6-12小時(shí)（切記時(shí)間不能過長(zhǎng)），自來水洗凈，烘干。然后再泡入稀鹽酸液30分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用4、膠頭可用75％酒精浸泡5分鐘，然后紫外照射后使用即可。5、其他消毒方法：可用70％酒精浸泡消毒。塑料培養(yǎng)皿打開蓋子，放在超凈臺(tái)臺(tái)面上，直接暴露在紫外線下消毒。VERO細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：1、嚴(yán)格執(zhí)行高壓鍋的操作規(guī)程：水：防高壓時(shí)燒干，水不能過多因?yàn)槠鋵⑹箍諝饬鲿呈茏?，?huì)降低高壓消毒效果檢查安全閥是否通暢，以防高壓時(shí)爆炸2、安裝濾膜時(shí)注意光面朝上：否則起不到過濾的作用3、注意人體的防護(hù)和器皿的完全浸泡：A.泡酸時(shí)要戴耐酸手套，防止酸液濺起傷害人體B.從酸缸內(nèi)撈取器皿時(shí)防止酸液濺到地面，會(huì)腐蝕地面C.器皿浸入酸液中要完全，不能留有氣泡，以防止泡酸不徹底VERO細(xì)胞培養(yǎng)甲醛薰蒸：40％甲醛溶液，15-30ml／m3，室溫21～24℃，相對(duì)濕度75％～85％每個(gè)房間是7個(gè)平方，約20個(gè)立方。要甲醛300-600ml，高錳酸鉀100-200g高錳酸鉀放入甲醛液體中后，在開始的3秒鐘內(nèi)沒有反映，3秒鐘以后，會(huì)產(chǎn)生大量煙氣。所以一旦在甲醛中加了高錳酸鉀請(qǐng)馬上離開滅菌室，并關(guān)上門。高錳酸鉀放入甲醛液體中會(huì)使液體沸騰，所以反應(yīng)要在比較大的大口徑容器進(jìn)行。甲醛氣體毒性非常強(qiáng)，所以操作時(shí)一定要帶上防毒面具。VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)用液VERO細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)用液水：新鮮配置的三蒸水或去離子水平衡鹽溶液：無Ca2+、Mg2+的緩沖液消化液：胰蛋白酶pH調(diào)整液抗生素培養(yǎng)液VERO細(xì)胞培養(yǎng)平衡鹽溶液（BSS）VERO細(xì)胞培養(yǎng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)作用----使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為8.0、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+

的BSS，如：D-Hanks液終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用（血清中含有抗蛋白酶成分）消化液：胰蛋白酶VERO細(xì)胞培養(yǎng)pH調(diào)整液1、NaHCO3溶液2、HEPES液是一種弱酸—羥乙基哌嗪乙硫磺酸。HEPES對(duì)細(xì)胞無毒性，可防止pH值迅速變動(dòng)VERO細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基（1）合成培養(yǎng)基：是根據(jù)細(xì)胞所需物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配制而成的。內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機(jī)鹽、維生素、微量無素和細(xì)胞生長(zhǎng)因子等單獨(dú)使用細(xì)胞雖有生存但不能很好的生長(zhǎng)增殖（2）天然培養(yǎng)基：使用最普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清最普遍血清由于含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)與合成培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞順利增殖生長(zhǎng)常見使用最為5-20%VERO細(xì)胞培養(yǎng)天然培養(yǎng)基：指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：來源受限、成分復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析、易發(fā)生支原體污染

VERO細(xì)胞培養(yǎng)合成培養(yǎng)基:

是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。有一定的配方，是一種理想的培養(yǎng)基。

主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽等在目前常用的培養(yǎng)基中，葡萄糖和谷胺酰胺是體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的主要能源

優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定、成本低缺點(diǎn)：缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）

VERO細(xì)胞培養(yǎng)血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子③激素④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等⑤各種生長(zhǎng)因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分支持細(xì)胞生長(zhǎng)需加10％血清VERO細(xì)胞培養(yǎng)

血清質(zhì)量好壞是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵

常用血清有胎牛、新生牛、小牛、兔、馬血清等優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染血清的滅活（消除補(bǔ)體活性）：56℃，30分鐘血清的消毒：過濾除菌VERO細(xì)胞培養(yǎng)無血清培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補(bǔ)充成分組成。1975年，Sato首次成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株近20多年來已報(bào)道了幾十種細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中成功地生長(zhǎng)和增殖無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。

目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加血清VERO細(xì)胞培養(yǎng)常用細(xì)胞培養(yǎng)基

1.MEM(minimumessentialmedia)2.DMEM（Dulbecco’smodifiedEaglemedium)3.IMDM（Iscove’smodifiedDulbecco’smedium）4.RPMI-16405.199細(xì)胞培養(yǎng)基系列6.歐氏平衡鹽7.F-10,F-12細(xì)胞培養(yǎng)基系列8.水解乳蛋白細(xì)胞培養(yǎng)基9.其它類型細(xì)胞培養(yǎng)基VERO細(xì)胞培養(yǎng)抗生素的使用