實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色

實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色第1頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色二、實驗原理1、高溫對微生物具有致死效應(yīng)，因此在微生物的轉(zhuǎn)接過程中，一般在酒精燈火焰旁進行，并用火焰直接灼燒接種環(huán)（針、鏟），以達到滅菌的目的。2、簡單染色：利用單一染料對菌體進行染色的方法。第2頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色二、實驗原理發(fā)色集團：色原，賦予染料顏色特征染料助色集團：能夠形成鹽，與細菌細胞結(jié)合使著色。堿性染料：包括美藍（亞甲基）、結(jié)晶紫、染料堿性復(fù)紅、沙黃（番紅）及孔雀綠等酸性染料：酸性復(fù)紅、伊紅和剛果紅等。第3頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色二、實驗原理微生物細胞在堿性、中性及弱酸性溶液中通常帶負電荷，而堿性染料電離后部分帶正電荷，很容易與細胞結(jié)合使其著色；當(dāng)微生物細胞處于酸性條件下所帶正電荷增加時，可采用酸性染料著色。第4頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色三、實驗儀器與用具超凈工作臺、接種環(huán)、酒精燈、火柴、試管架、顯微鏡、擦鏡紙、雙層瓶、裝有蒸餾水的滴瓶等四、實驗材料與試劑大腸桿菌（E.coli）營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基枯草芽孢桿菌（B.subtilis）營養(yǎng)瓊脂斜面金黃色葡萄球菌（S.aureus）營養(yǎng)瓊脂斜面第5頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色五、實驗操作（一）無菌操作技術(shù)（用接種環(huán)轉(zhuǎn)接菌種）1、手持試管左手：拿細菌斜面培養(yǎng)物和營養(yǎng)斜面右手：持接種環(huán)2、拔棉塞在火焰旁打開斜面培養(yǎng)物的試管棉塞，注意不能放在桌面上，并將試管口在火焰上灼燒一下。第6頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色（一）無菌操作技術(shù)（用接種環(huán)轉(zhuǎn)接菌種）3、取菌使用灼燒并冷卻的接種環(huán)在細菌的瓊脂斜面上輕輕刮取。4、劃線從下到上劃一直線，然后再從其底部開始向上做蛇形劃線（或“之”字形）第7頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色（一）無菌操作技術(shù)（用接種環(huán)轉(zhuǎn)接菌種）5、塞棉塞6、灼燒接種環(huán)7、作標(biāo)記使用記號筆在試管口部注明菌種名稱、接種日期和接種人姓名。第8頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色五、實驗操作（二）細菌的簡單染色1、涂片在載玻片的中央滴一小滴蒸餾水，用接種環(huán)以無菌操作從大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中，混勻并涂成薄膜（直徑約1cm）。注意事項：1）載玻片要潔凈無油跡；

2）滴生理鹽水或取菌不宜過多；

3）涂片要涂抹均勻，不宜過厚。第9頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色（二）細菌的簡單染色2、干燥自然干燥3、固定涂面朝上，通過火焰2~3次。固定的目的：1）使細胞質(zhì)凝固變性，固定細胞形狀；2）使菌體牢固附著在載玻片上。注意：熱固定溫度不宜過高（以玻片背面不燙手為宜），否則會改變甚至破壞細胞形態(tài)。第10頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色（二）細菌的簡單染色4、染色滴加染液覆蓋涂菌部位即可。染色時間：呂氏堿性美藍1.5min；草酸銨結(jié)晶紫或齊氏石炭酸復(fù)紅1min5、水洗倒去染液，用自來水沖洗，直至圖片上留下的水無色為止。注意：水洗時，不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端留下，水流不宜過急、過大，以免涂片薄膜脫落。第11頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色五、實驗操作（二）細菌的簡單染色6、干燥用吸水紙吸取多余的水分，自然干燥或電吹風(fēng)吹干。7、鏡檢涂片必須完全干燥后才能用油鏡觀察。第12頁，共13頁，2023年，2月20日，星期六實驗四無菌操作技術(shù)與細菌的簡單染色六、實驗作業(yè)1、根據(jù)觀察結(jié)果，繪出兩種細菌的形態(tài)圖。2、在進行細菌涂片時應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？