紅細胞血型檢測專家講座

第二章紅細胞血型檢測江西醫(yī)學高等專科學校11級檢驗班01

李金輝1紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第1頁目錄第一節(jié)輸血前免疫學檢驗第二節(jié)鹽水介質試驗技術第三節(jié)酶處理試驗技術第四節(jié)抗球蛋白試驗技術第五節(jié)聚凝胺介質試驗技術第六節(jié)微柱凝集試驗技術第七節(jié)吸收放散技術第八節(jié)凝集試驗技術第九節(jié)紅細胞血型分子生物學檢測技術2紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第2頁學習要求：1.輸血前主要包含哪些內容？2.受血標本接收時注意事項有哪些？3.ABO血型和RhD血型判定時注意事項有哪些？4.交叉配血試驗影響原因有哪些？5.抗球蛋白試驗臨床應用有哪些方面？6.紅細胞血型分子生物學檢測技術主要有哪些？3紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第3頁第一節(jié)輸血前免疫學檢驗目標：是輸入血液成份在受血者體內發(fā)揮其有效作用.

在正常情況下，輸入紅細胞在受血者體內不溶血，輸入血漿成份不破壞受血者紅細胞。主要程序：患者病史和標本等檢驗、查對及處理;ABO血型和RhD血型定型；紅細胞同種抗體篩查和堅定；交叉配血試驗；血小板輸注前抗體檢驗和配合試驗；不規(guī)則抗體篩選和判定；交叉配血結果匯報和發(fā)血等。4紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第4頁一、受血者標本處理（一）標本采集輸血除了需要到達預期治療效果外，必須確保輸血安全。血樣由臨床護士完成，因嚴格恪守一次只能為一位受血抽取標本，標本不得從輸液管或輸液側筋脈中抽取。（二）標本接收

輸血科技師接收血樣標本時，應認真查對受血者相關信息，盡可能了解受血者有沒有輸血史、藥品史、妊娠史等情況。假如有輸血史，這有必要深入了解最終一次輸血日期，若3個月內輸過血，那么供血者紅細胞沒有完全代謝消失，可能依然存在于血液循環(huán)中，造成血型定型試驗中出現(xiàn)混合凝集結果。5紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第5頁（三）標本要求1.對輸血前檢驗血液標本應嚴格要求能代表受血者當前免疫學情況，標本還需經判定和標識，確保其準確無誤地來自受血者和供血者，應和血液申請單上內容一致。2.預防受血者血液標本稀釋和（或）溶血，若采集過程中發(fā)生溶血則不能使用。3.受血者配血試驗正確血液標本必須是輸血前3天采集。4.若受血者使用右旋糖酐、PVP等治療，應注意洗滌被檢紅細胞。5.每次輸血后，受血者和供血者標本必須保留于2~8℃最少7天。6紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第6頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型

（一）、原理

依據(jù)紅細胞膜表面上有沒有A抗原或B抗原，將血型分為A型、B型、AB型、O型4種。A型人血清中含有抗-B抗體，B型人血清中含有抗-A抗體，O型人血清中含有抗-A抗體和抗-B抗體，AB型人血清中不含ABO抗體。正定型：用抗-A及抗-B試劑與被檢紅細胞反應，檢測紅細胞表面是否存在A抗原或B抗原。反定型：用標準A細胞及B細胞與被檢血清反應，檢測血清中是否存在抗體。因為ABO血型系統(tǒng)抗體多數(shù)為IgM類，在室溫鹽水介質中就能出現(xiàn)顯著凝集反應。7紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第7頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型8紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第8頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型

1.ABO定型最適反應溫度為4℃，但在室溫反應良好，所以常規(guī)ABO定型試驗僅在室溫進行。(1)定型方法：正、反定型試管離心方法當前仍被認為是最可信賴ABO定型方法。1)定型試劑：有些ABO血型診療試劑是以人血清匯聚而制成，但必須具備以下條件：第一，高效價(1：128)IgM抗A或抗B。第二，具很好親和性并不含冷凝集素。第三，必需含有檢測A2，A2B血型能力。第四，血清必須經過HIV，HCV，HBV等檢驗或經病毒滅活。另外一些ABO定型試劑是由來自培養(yǎng)細胞株單克隆抗體所制成。9紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第9頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型2)ABO亞型判定：ABO亞型判定通常使用以下試劑：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AIA1紅細胞、A2紅細胞、B型紅細胞和O型紅細胞。有些工作者在定型試驗中，常規(guī)地選擇應用抗AB抗血清，以防止錯誤地把弱反應性A或B型紅細胞分類為O型。普通抗AB試劑對Ax型紅細胞可增加凝集反應強度。10紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第10頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型(一)ABO定型試驗中常見問題：造成這種正反定型不一致原因主要有：1)技術和管理錯誤：這是ABO定型中產生異常結果主要原因，包含：標本或試劑搞錯；器材不潔；試劑污染或失效；離心過分或不足；陽性反應產生溶血現(xiàn)象未能識別；漏加試劑；結果統(tǒng)計或判斷錯誤；細胞與血清間百分比不適當。2)血清異常：血清蛋白引發(fā)緡錢狀形成，影響反定型結果。3)紅細胞致敏：受免疫球蛋白致敏紅細胞，在含高蛋白介質試劑中，可發(fā)生凝集。4)異?；蛐停篈BO亞型檢驗中，A、B抗原可能為弱抗原，難以檢出。11紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第11頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型5)近期輸血：試驗前曾輸入過其它ABO血型不一致血液，使血液標本成為混合血型紅細胞懸液，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。6)嵌合體血型：這種血型者體內有兩類血型紅細胞群體，定型時能夠出現(xiàn)“混合外觀凝集”現(xiàn)象。7)疾病原因造成抗原減弱：一些白血病患者和難治性貧血患者中，ABO血型系統(tǒng)抗原性可受到抑制，檢出困難。8)紅細胞多凝集現(xiàn)象：紅細胞因遺傳或取得性表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。9)取得性B：因為革蘭陰性桿菌作用，紅細胞可取得“類B”活性。12紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第12頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型10)血型特異性物質過高：一些卵巢囊腫病例，血型物質濃度很高，可中和抗A和抗B定型試劑，要得到正確正定型結果，必須洗滌紅細胞屢次。11)近期內進行大量血漿置換治療：因為使用大量非同型血漿作置換治療，標本血清中含有所輸供體提供抗A或抗B抗體，造成反定型錯誤。12)異常血漿蛋白：受檢者血漿中異常白蛋白、球蛋白百分比和高濃度纖維蛋白原等造成緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。13)不規(guī)則抗體存在：受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外不規(guī)則抗體，與試劑紅細胞上其它血型抗原系統(tǒng)抗原起反應。13紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第13頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型14)低丙種球蛋白血癥：低丙種球蛋白血癥(丙種球蛋白量減低)病例，可能會因免疫球蛋白水平下降而使血清定型時不凝集或弱凝集反應。15)藥品等原因：藥品、右旋糖醉及靜脈注射一些造影劑可引發(fā)紅細胞凝集或類似凝集。16)年紀原因：免疫系統(tǒng)還未健全嬰兒、由母親被動取得抗體嬰兒，或抗體水平下降老人，試驗時可出現(xiàn)異常結果。17)防腐劑原因：患者體內可能含有對防腐劑中成份或對混懸介質抗體，造成ABO定型差錯。14紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第14頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型（二）Rh(D)定型和定型試驗中應注意問題：Rh定型主要判定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。Rh系統(tǒng)是最為復雜得多一個系統(tǒng)，包括臨床主要有D、C、c、E、e五個抗原，其中D抗原免疫原性最強，僅次于A或B抗原。Rh血型判定方法有：玻片法、試管法、微量板法、微柱凝膠法等，試管法最為經典。當前大部分醫(yī)院都使用微柱凝膠卡式血型判定，方法簡便快捷，準確度較高。15紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第15頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型16紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第16頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型(1)造成Rh血型判定可能出現(xiàn)假陽性原因：1)受檢細胞已被免疫球蛋白致敏，或標本血清中含有引發(fā)紅細胞凝集因子。2)受檢細胞與抗血清孵育時間過長，含高蛋白定型試劑會引發(fā)緡錢狀形成。3)標本抗凝不妥，受檢過程中出現(xiàn)凝血或小纖維蛋白凝塊，誤判為陽性。4)定型血清中含有事先未被檢測其它特異性抗體，造成假陽性定型結果。5)多凝集細胞造成定型假陽性。6)判定用器材或抗血清被污染，造成假陽性。17紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第17頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型(2)可能出現(xiàn)假陰性原因1)受檢細胞懸液濃度太高，與抗血清百分比失調。2)漏加或錯加定型血清。3)定型血清使用方法錯誤，沒有按說明書進行。4)離心后重懸細胞扣時，搖動用力過分，搖散微弱凝集。5)抗血清保留不妥，造成失效。18紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第18頁二、受血者和供血者ABO和Rh定型(三)弱D型(Du型)血型及其判定：Du型抗原是RhO(D)弱抗原，這種抗原通常與大部分鹽水抗D試劑不產生直接凝集反應，而與部分IgG抗D血型用間接抗球蛋白試驗反應陽性。所以當我們首次得到Rh陰性結果時，必須進行作Rh陰性確認試驗，即用三種不一樣批號IgG抗D定型，假如全部陰性方可認為該被檢者為Rh陰性，不然，只要有一批為陽性，則可認為是Du型。若D人群作為獻血者按照RhD陽性對待，其血液只能給Rh陽性受血者輸注；作為受血者按照RhD陰性對待，只能接收RhD陰性血液。19紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第19頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定一、

概念：不規(guī)則抗體是指血清中抗-A、抗-B以外其它血型抗體，也稱意外抗體。不規(guī)則抗體包含同種抗體和本身抗體。本身抗體：受血者體內產生抗體，針對自己本身紅細胞抗原。同種抗體：不只針對本身抗原，也會同種異型抗原發(fā)生反應。

20紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第20頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定二、不規(guī)則抗體篩查方法抗體篩選試驗標準是讓受檢血清與已知血型試劑紅細胞即篩選紅細胞起反應，以發(fā)覺在37℃中有反應抗體1.鹽水介質法：主要用于IgM類抗體篩查。優(yōu)點是：方法簡單、操作簡單、成本低廉。缺點是：靈敏度低2.聚凝胺法優(yōu)點：與水鹽介質法比靈敏度有所提升。3.抗球蛋白試驗：缺點：操作繁瑣、工作量大、耗時等。4.酶法：能暴露隱蔽抗原，增強一些稀有抗原檢測。但可能會破壞有些抗原，影響檢測。當前臨床是已不用。21紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第21頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定5.微柱凝膠卡式檢測法三、不規(guī)則抗體判定抗體篩選試驗用試劑篩選紅細胞，通常是2或3個人份O型紅細胞成為一套試劑，每套試劑篩選紅細胞中最少有以下常見抗原：D、C、E、c、e、M、N，條件不足試驗室不一定具備Lua、V、Cw、Kpa、Jsa類抗原。一旦抗體被檢出，應作抗體判定試驗，以確定其特異性?？贵w判定試驗包含以下主要內容：(1)本身細胞檢驗：觀察患者(受者)血清與患者(受者)本身細胞反應情況，確定血清內是否有本身抗體或本身抗體和同種抗體二者同時存在。 (2)普紅細胞：使用試劑細胞中譜細胞，應用各種抗體檢驗技術，檢測患者血清，確定其抗體特異性。22紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第22頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定抗體判定試驗結果解釋及處理：1.與譜細胞反應顯著，確定為單一抗體或無法確定為單一抗體，應加以判別。2.與譜細胞呈弱反應，結果不明確（1）分析結果：①是否符合劑量效應②譜細胞是否新鮮（2）改變試驗方法：①使用高靈敏度方法重復試驗②添加試劑后重復試驗③帶抗體增強后重復試驗

23紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第23頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定3.與全部譜細胞反應，本身細胞陰性（1）強度不一致：可能存在混合抗體（2）強度一致：抗體可能為專于O細胞反應抗體（如：抗-I、抗-H、抗-HI）可能針對高頻抗原抗體可能針對譜細胞抗體4.與全部譜細胞反應，本身細胞陽性（1）存在本身抗體（2）同種和本身抗體同時存在（3）冷凝集：在冷凝集素作用下存在凝集紅細胞24紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第24頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定（4）假凝劑：在干擾因子作用下一可造成紅細胞假凝集（5）酶引發(fā)多凝集（6）補體影響6.與譜細胞不反應，本身細胞陽性可能是本身抗體或C?陽性25紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第25頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定四、抗體篩查和判定影響原因1.抗體篩查和判定細胞質量

篩查細胞不包含低頻率抗原，不能檢出低頻率抗原。譜細胞：用于抗體判定試劑紅細胞。在選擇不規(guī)則抗體篩查或判定細胞時，應符合當?shù)貐^(qū)不規(guī)則抗體分布特點。2.試驗方法法IgM抗體在4℃，凝集強度顯著大于室溫，37℃會有減弱3.抗體特異性抗體篩查試驗為陰性，并不意味著被檢血清中一定沒有抗體篩查細胞漏檢ABO亞型抗體（如抗-A?）26紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第26頁三、不規(guī)則抗體篩選和判定五不規(guī)則抗體判定時遇見問題1.不規(guī)則抗體篩查陰性，輸血后發(fā)覺溶血（1）交叉配血假陰性（2）抗球蛋白試驗不規(guī)則抗體篩查假陰性試劑保留不妥洗滌不充分試驗操作④紅細胞濃度過高造成凝集減弱或紅細胞濃度過低造成凝集不易被觀察到2.不規(guī)則抗體篩查陽性，抗體特異性難以判定（1）抗體篩查假陽性：①離心不妥②試管污染③硅膠管引發(fā)凝集（2）譜細胞單一：應采取3個以上不一樣供給商譜細胞系，排查抗體特異性。

27紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第27頁四、交叉配血試驗（一）要求和內容交叉配血要求：主側配血要求：絕對不能夠有凝集或溶血現(xiàn)象。次測配血要求：供血者血清加受血者紅細胞在允許范圍內，能夠有凝集現(xiàn)象，但不能夠有溶血。凝集不凝集28紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第28頁四、交叉配血試驗交叉配血試驗內容患者獻血者主側次側主側配血用患者血清與供者紅細胞進行試驗次測配血供血者血清與患者紅細胞進行試驗29紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第29頁四、交叉配血試驗交叉配血目標交叉配血試驗是輸血前必要步驟，主要是檢驗受血者血清中有沒有能破壞供血者紅細胞抗體。主要目標是為了預防輸血后產生溶血性反應。盡可能確保對人和一個病人來說，輸了供血者血不會引發(fā)有害反應，而且使紅細胞在輸注后能保持最長存活時間。30紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第30頁四、交叉配血試驗（二）結果解釋及處理1.抗體篩查陰性，交叉配血相容：絕大部分標本抗體篩查陰性，交叉配血也是相容。2.抗體篩查陰性，主側交叉配合試驗陽性（1）復查血型（2）主側凝集類B抗原（3）血清中可能含有一個ABO抗體，必要時能夠做ABO亞型判定31紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第31頁四、交叉配血試驗3.抗體篩查試驗陽性，主側交叉配合試驗陽性（1）本身對照試驗陰性：受血者體內有同種不規(guī)則抗體。（2）本身對照試驗陽性：受血者血清內可能有本身抗體或同時存在不規(guī)則抗體。（三）影響原因

①離子干擾②溫度③操作不規(guī)范④離心不妥32紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第32頁第二節(jié)鹽水介質試驗技術鹽水介質試驗技術慣用于血型判定、血清中IgM類抗體篩查和判定、鹽水介質交叉配血等。

基本方法1.平板法用于ABO血型和RhD抗原定型特點：簡單、快速，但易污染環(huán)境。2.試管法為定型試驗方法，也可于半定量試驗。是輸血前檢驗最慣用試驗方法。特點：簡單、快速、易學，結果準確、可靠。3.微孔板法為定性試驗方法。33紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第33頁第二節(jié)鹽水介質試驗技術鹽水介質配血方法患者獻血者主側次側離心看結果陽性陰性34紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第34頁第二節(jié)鹽水介質試驗技術35紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第35頁第三節(jié)酶處理試驗技術原理：在酶作用下切斷帶有負電荷羧基基團唾液酸，降低Zeta電位，縮短紅細胞之間距離。增強IgG抗體對紅細胞凝集。慣用正確酶：菠蘿酶，無花果酶，木瓜酶36紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第36頁第三節(jié)酶處理試驗技術酶介質配血方法患者獻血者主側次側主次側均加酶酶上海市血液中心血37紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第37頁第三節(jié)酶處理試驗技術37℃水浴30分鐘37℃離心看結果陽性陰性38紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第38頁第三節(jié)酶處理試驗技術結果判斷（1）陽性對照管凝集，陰性對照管凝集，被檢管凝集為陽性，不出現(xiàn)凝集判定為陰性。（2）陽性對照管不凝集和（或）陰性對照管凝集，試驗失敗分析原因，重新試驗。39紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第39頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術一、基本原理抗球蛋白試驗（Coombs試驗）主要用于檢測血清中不完全抗體如：IgG、IgA和（或）補體如：C3、C4。在鹽水介質中，不完全抗體只能致敏紅細胞，而不能使紅細胞出現(xiàn)可見凝集反應，加入抗球蛋白試劑后，抗球蛋白分子Fab片段與紅細胞表面受體結合，而產生紅細胞凝集，所以采取此方法能夠檢測出血清中是否存在不完全抗體。40紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第40頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術抗球蛋白試驗原理圖41紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第41頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術

二、分類及應用

抗球蛋白試驗直接間接致敏紅細胞不完全抗體、補體血清中不完全抗體應用HDN診療、AIHADE診療、藥品誘發(fā)型溶血病診療交叉配血及血型判定、器官移植、等42紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第42頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術抗球蛋白配血方法患者獻血者主側次側37℃37℃水浴30分鐘三洗

43紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第43頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白抗球蛋白試劑上海市血液中心血離心看結果陽性陰性44紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第44頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術

三、結果判斷直接抗球蛋白試驗：（1）陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽性。（2）陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管不凝集，須做陰性確認后判定結果。（3）陽性對照管不凝集和（或）陰性對照管凝集，結果不可信不能發(fā)出匯報，分析原因后重做試驗。45紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第45頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術間接抗球蛋白試驗：（1）陽性對照管展現(xiàn)凝集反應，陰性對照管不展現(xiàn)凝集反應，被檢管展現(xiàn)凝集反應為陽性結果，表示被檢者血清中含有抗體。（2）陽性對照管不凝集和（或）陰性對照管出現(xiàn)凝集，試驗失敗，分析原因重做試驗。46紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第46頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術

四、注意事項（一）直接抗球蛋白試驗1.抗球蛋白血清應按說明書使用最適稀釋度，防止出現(xiàn)前帶現(xiàn)象而誤判為陰性。2.結果判讀時應轉動拖拉，細胞扣搖散后，如肉眼未見凝集，應將反應物涂于玻片上，在在顯微鏡下觀察確認陰性。3.被檢標本需用EDTA抗凝，防止出現(xiàn)假陽性；標本不宜久置，預防紅細胞上已致敏抗體游離到血漿中，造成假陰性或陽性程度降低。4.紅細胞表面存在蛋白質就會與抗球蛋白結合。所以受檢紅細胞一定要充分洗滌，除去血清蛋白，防止假陰性產生。5.如需深入分析體內致敏紅細胞免疫球蛋白類型，能夠分別以抗IgG、抗C3單價抗球蛋白血清進行試驗。47紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第47頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術（二）間接抗球蛋白試驗1.紅細胞洗滌過程中不宜中途停頓，每次加生理鹽水前要是紅細胞完全懸??；洗滌過程中預防交叉污染；應充分洗滌，防止殘留抗體部分中和抗球蛋白試劑而產生假陰性。2.振搖試管不宜用力過大，防止將渙散紅細胞凝塊搖散，使強陽性結果誤判為弱陽性結果，弱陽性結果誤判為陰性，對于弱陽性結果觀察細胞扣是否出現(xiàn)缺口來判讀。3.離心后應馬上看結果，不宜久置。4.致敏時間：30-60分鐘，不超出90分鐘

48紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第48頁第四節(jié)抗球蛋白試驗技術

三、抗球蛋白試驗影響原因一、親和力親和力常數(shù)越高，抗原抗體反應致敏階段抗體水平越高二、孵育時間和溫度37℃孵育30-60分鐘三、離子強度在單純離子強度溶液中，可增強抗體結合作用，孵育時間將縮短到15～30分鐘四、抗原、抗體百分比2滴血清對1滴2％～5％紅細胞懸液五、洗滌應盡可能去除上清液，降低未結合免球蛋白。六、體外補體致敏七、紅細胞本身凝集49紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第49頁第五節(jié)聚凝胺介質試驗技術聚凝胺試驗技術是一個快速、簡便檢測紅細胞不完全抗體方法，可用來檢測IgG抗體，但IgG抗體抗-K抗體除外。一、試驗原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低離子介質降低溶液離子強度，降低紅細胞周圍陽離子云，促進血清（漿）中抗體與紅細胞對應抗原結合，再加入帶亞電荷高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細胞表面負電荷，縮短細胞間距，形成可逆非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引發(fā)非特異性聚集，會因電荷中和而分散，而由抗體介導特異性凝集則不會分散50紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第50頁第五節(jié)聚凝胺介質試驗技術聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻血者主側次側室溫放置1分鐘主次側均加聚凝胺Polybrene上海市血液中心血51紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第51頁第五節(jié)聚凝胺介質試驗技術聚凝胺(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引發(fā)紅細胞非特異性凝集重懸液上海市血液中心血主次側均加重懸液看結果陽性陰性52紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第52頁第五節(jié)聚凝胺介質試驗技術二、應用范圍血型判定、抗體篩查及交叉配血試驗三、特點靈敏、速度快、準確、操作要求高。四、注意事項1.不能用含有枸櫞酸鈉和肝素抗凝標本2.用聚凝胺試驗技術交叉配血，出現(xiàn)不配合時，要用抗球蛋白試驗重做，結果不一致時，以抗球蛋白試驗為主。3.聚凝胺只能是正常紅細胞發(fā)生凝集，對缺乏唾液酸細胞（如：T細胞及B細胞）無作用。53紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第53頁第六節(jié)微柱凝集試驗技術一、試驗原理

凝膠含有分子篩效應和親和效應，在微柱凝膠介質中紅細胞抗原與對應抗體結合，利用凝膠空間位阻經低速離心，凝集紅細胞懸浮在凝膠上層，而未和抗體結合紅細胞則沉于凝膠底部（管底尖部）。54紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第54頁第六節(jié)微柱凝集試驗技術一、微柱凝膠試驗原理

將紅細胞和抗血清加在凝膠上部反應，離心后觀察凝集紅細胞，被阻擋在小柱中凝膠上部或中央，證實發(fā)生凝集反應，判斷凝集反應陽性,游離紅細胞，被擠過裝有過濾介質小柱，而抵達小柱底部，證實未發(fā)生凝集判斷陰性.

操作及結果判定55紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第55頁第六節(jié)微柱凝集試驗技術二、應用1.抗球蛋白試驗直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗。2.ABO血型判定可做單純粹定型，也可同時做正反定型。3.其它血型系統(tǒng)檢測如Rh其它抗原（CcEe）定型三、特征及優(yōu)點1.簡便2.準確結果清楚明確，可重復性強。3.敏感4.結果保留時間長5.標本用量少6.標準化7.安全56紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第56頁第六節(jié)微柱凝集試驗技術四、微柱凝集試驗中可能存在問題1.抗凝劑不足或不含抗凝劑血漿標本常出現(xiàn)假陽性。2.試驗室溫度較低時，易出現(xiàn)假陽性結果。3.抗原、抗體過少、過弱；抗原、抗體百分比不妥時易出現(xiàn)假陰性。4.離心力過大時，輕易使弱陽性成為陰性格局。5.溶血反應：①反應液是低滲溶液②溫度過冷或過熱③紅細胞或抗體被污染

④其它可使紅細胞破壞理化原因57紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第57頁第六節(jié)微柱凝集試驗技術五、不足與發(fā)展前景微柱凝集抗人球蛋白試驗及微柱膠免疫檢測技術本質是血凝試驗，這理論上位制備抗原抗體包被紅細胞為指示紅細胞，以間接血凝試驗來檢測紅細胞抗原抗體以外其它血液紅細胞、中路標志、病原微生物，以及人體中其它可溶性抗體，如對藥品抗體、本身抗體檢測等提供了比傳統(tǒng)血凝檢驗更為敏感、準確、簡單易行方法。微柱凝集試驗技術獎在臨床各個領域有更為遼闊發(fā)展。58紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第58頁第七節(jié)吸收放射試驗一、概念1.吸收試驗:抗原與抗體結合是特異性，所以含有抗體活性血清加入對應抗原后，抗體活性下降或消失，這種作用稱為吸收試驗。2.放散試驗是抗原與抗體結合是可逆，在物理條件改變時，抗體又會從抗原抗體復合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復合物上分離下來試驗稱為放散試驗59紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第59頁第七節(jié)吸收放射試驗（一）相關概念抗體可與對應抗原在適當條件下可發(fā)生凝集或致敏，這種結合是可逆，如改變一些試驗條件，抗體可從紅細胞解離下來，然后檢測解離下來抗體。這種試驗稱為吸收放散試驗?！浔旧砜贵w

：理論上講凡是37℃與本身紅細胞不反應，而只有在低于37℃環(huán)境下才能和本身紅細胞反應抗體均可稱為冷本身抗體。實際上，冷本身抗體大多數(shù)只能在很低溫度下(比如4℃)與本身細胞反應。※溫本身抗體：溫本身抗體是指在37℃條件下能和本身紅細胞反應抗體。當患者血清中含有溫本身抗體時，患者普通都有些貧血或溶血癥狀。溫本身抗體可分為兩類:大多數(shù)情況下為lgG類溫本身抗體，極少數(shù)情況下也會存在IgM性質溫本身抗體。60紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第60頁第七節(jié)吸收放射試驗（二）吸收試驗冷抗體在4℃反應最強，通慣用冷吸收技術（本身抗體用本身紅細胞吸收；同種抗體用對應紅細胞吸收）。IgM抗體通常在4℃條件下比22℃或37℃更輕易吸收，且輕易完全吸收。IgG抗體通常在37℃吸收效果最好，但難以完全吸收。1.冷抗體吸收試驗應用范圍：①本身冷抗體吸收②其它冷抗體吸收2.溫抗體吸收試驗應用范圍：①本身冷抗體吸收②其它冷抗體吸收61紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第61頁第七節(jié)吸收放射試驗（三）放散試驗放散試驗是把結合到紅細胞膜上抗體解離下來，用于其它目標。經過放散試驗得到含有或不含有抗體溶液稱為放散液?！派⒛繕耍旱玫郊t細胞上致敏抗體或沒有抗體吸附紅細胞，前者得到是本身抗體，用于本身吸收；后者得到是紅細胞，用于血型判定和交叉配血?！派⒎椒ǎ簾岱派⒓夹g、乙醚放散技術、磷酸氯喹放散技術、凍融放散技術、檸檬酸放散技術、二甲苯放散技術等。62紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第62頁第七節(jié)吸收放射試驗1.熱放散技術§應用范圍ABO抗體放散（新生兒溶血病試驗）§注意事項溫度過高，抗體可能變性；溫度過低，輕易使

抗體從紅細胞上解離不完全2.乙醚放散技術§乙醚為有機溶劑，能夠破壞紅細胞膜，解離IgG抗體，該方法制備放散液，抗體回收率高?！爝m用范圍主要用于紅細胞上各種IgG抗體擴散。3.磷酸氯喹放散技術§主要用于得到沒有任何抗體附著紅細胞。此方法不能將補體從紅細胞膜上解離下來。63紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第63頁第七節(jié)吸收放射試驗4.凍融放散技術§適用范圍ABO抗體放散，如新生兒溶血病相關檢測試驗。5.檸檬酸放散技術§適用范圍用于解離紅細胞膜上致敏IgG抗體對紅細胞進行抗原判定，但Kell系統(tǒng)判定除外?！熳⒁馐马椩摲椒善茐腒ell系統(tǒng)抗原，尤其是K抗原，所以本方法放散后細胞不能進行Kll系統(tǒng)定型試驗。64紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第64頁第七節(jié)吸收放射試驗（四）吸收放散試驗應用☆證實存在于紅細胞上若抗原☆分離、判定混合液體☆除去血清中不需要抗體☆濃縮低效價抗體☆核實抗體特異性☆利用吸收放散技術判定引發(fā)新生溶血病和免疫性輸血反應抗體☆研究判別免疫性溶血性貧血抗體65紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第65頁第八節(jié)凝集抑制試驗

一、概述：

抗體能與有對應抗原紅細胞發(fā)生特異性凝集，體液中可溶性抗原物質能與該抗體發(fā)生特異中和，抑制了抗體凝集紅細胞作用。用這種可溶性物質來抑制抗體與紅細胞凝集試驗，稱為凝集抑制試驗。慣用于ABH或Lewis分泌狀態(tài)檢驗，幫助ABO亞型確實認以及特殊情況下（紅細胞標本完全溶血）ABO血型判定。66紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測第66頁第八節(jié)凝集抑制試驗二、抑制物處理及抗體標化☆搜集液體唾液標本作為抑制物，煮沸使酶