不同藥用鉤藤中總黃酮的含量變化測定,藥學(xué)論文

不同藥用鉤藤中總黃酮的含量變化測定,藥學(xué)論文藥用鉤藤有五個種，分布在貴州省內(nèi)的主要是毛鉤藤和鉤藤居多，在臨床上通常用于降血壓。因黃酮類成分具有一定降壓作用，本實驗采用紫外可見分光光度法，三氯化鋁顯色后于425nm波長處測定吸光度［1］，考察研究不同采收期、不同產(chǎn)地和不同種的藥用鉤藤中總黃酮的含量變化，為今后對鉤藤的深切進入研究提供根據(jù)。1材料與儀器紫外可見分光光度計(島津UV－2501PC);AE－240雙量程電子分析天平，量程:萬分之一和十萬分之一兩檔(梅特勒－托利多上海有限公司);超聲波清洗器;蘆丁對照品(批號:100080－200707)，購于中國藥品生物制品檢定所;無水乙醇、三氯化鋁均為分析純，水為蒸餾水。藥材樣品采自貴州省開陽縣翁昭村鉤藤種植基地毛鉤藤和貴州省劍河縣鉤藤種植基地鉤藤，樣品藥材均為人工種植五年或五年以上。經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院講師付志明、副教授魏升華鑒定為茜草科植物毛鉤藤(UncariahirsuteHavil)，鉤藤(Uncariarhyn-chophylla(Miq．)Miq．exHavil．)，藥材樣品在室內(nèi)陰干經(jīng)粉碎后于45℃烘至恒重并置于枯燥器中備用。2方式方法與結(jié)果2．1溶液的制備2．1．1對照品溶液的制備精致細(xì)密稱取蘆丁對照品3.04mg，置于50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度為60.80g/ml的對照品溶液。2．1．2三氯化鋁溶液的制備精致細(xì)密稱取三氯化鋁12.0717g，置于500ml量瓶中，加無水乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為0.10mol/L的三氯化鋁溶液，備用。2．1．3供試品溶液的制備取鉤藤粉末1g，精致細(xì)密稱定，置于50ml具塞的錐形瓶中，精致細(xì)密參加無水乙醇20ml，稱定重量，超聲(功率為60%)提取30min，取出，放冷，用提取液補足減失的重量，過濾，精致細(xì)密量取續(xù)濾液2ml，置10ml容量瓶中，精致細(xì)密參加濃度為0．10mol/L的三氯化鋁溶液1ml，混勻，加無水乙醇至刻度，搖勻，靜置15min，即得供試品溶液。2．2檢測波長確實定取供試品溶液和對照品溶液，按2．1．3供試品溶液的制備項，從精致細(xì)密參加濃度為0.10mol/L的三氯化鋁溶液1ml起同法操作，進行顯色，且同法作試劑空白，用紫外可見分光光度計進行掃描，分別根據(jù)其光譜圖知:樣品及對照品在425nm處均有最大吸收峰，故本實驗選擇425nm作為鉤藤總黃酮的測定波長。2．3線性關(guān)系考察精致細(xì)密汲取濃度為60.80g/ml的蘆丁對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0ml，分別置于7個10ml的容量瓶中，各精致細(xì)密參加濃度為0.10mol/L三氯化鋁溶液1ml，并加無水乙醇至刻度，搖勻，靜置15min，同法作試劑空白，用紫外可見分光光度計在425nm的波長處測定吸光度，以對照品的濃度(g/ml)為橫坐標(biāo)(X)，吸光度為縱坐標(biāo)(Y)進行回歸計算，得到總黃酮的回歸方程為:Y=0.0392X+0.0104，r=0.9998。結(jié)果表示清楚總黃酮在3.04～24.32g/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2．4精致細(xì)密度試驗精致細(xì)密汲取濃度為60.80g/ml的蘆丁對照品溶液2ml，按2．1．3供試品溶液的制備項，從精致細(xì)密參加濃度為0.10mol/L的三氯化鋁溶液1ml起同法操作，顯色后，分別進行吸光度測定，以6次測得的吸光度計算ＲSD為2.59%，表示清楚儀器精致細(xì)密度良好。2．5穩(wěn)定性試驗精致細(xì)密汲取按2．1．3項下制備的供試品溶液，分別在0、30、45、60、75、90min進行吸光度測定，以測得的吸光度計算ＲSD為2.98%，表示清楚供試品溶液在90min內(nèi)穩(wěn)定性良好。2．6重復(fù)性試驗取6份2020年3月采收開陽翁昭人工種植毛鉤藤樣品粉末，每份1g，精致細(xì)密稱定，分別置于6個50ml具塞錐形瓶中，按2．1．3項下供試品溶液的制備方式方法制備供試液，同法作試劑空白，用紫外可見分光光度計在425nm處測定吸光度，計算出該鉤藤藥材中總黃酮(按蘆丁計)的平均含量為0.08%，ＲSD為2.95%。2．7加樣回收率試驗稱取已經(jīng)知道總黃酮(按蘆丁計)的平均含量為0．08%的鉤藤粉末6份，每份0.5g，精致細(xì)密稱定，分別置于50ml具塞錐形瓶中，每份分別精致細(xì)密參加濃度為20.00g/ml的蘆丁對照品溶液20.0ml，按2．1．3項下供試品溶液的制備方式方法制備供試液，同法作試劑空白，用紫外可見分光光度計在425nm處測定吸光度，計算出總黃酮的平均回收率為100.75%，ＲSD為2.94%，表示清楚本法能夠準(zhǔn)確的測定中藥鉤藤中總黃酮的含量。結(jié)果見表1。2．8樣品含量測定按2．1．3項下供試品溶液的制備方式方法制備各供試液，每樣平行3份，同法作試劑空白，用紫外可見分光光度計在425nm處測定吸光度，計算出總黃酮(按蘆丁計)的含量，結(jié)果見表2。3討論根據(jù)實驗數(shù)據(jù)看出，開陽毛鉤藤在深秋至早春氣溫相對較低時鉤藤中總黃酮含量相對較高且含量較穩(wěn)定，而氣溫較高的8、9月份時鉤藤中的黃酮含量相對較低，這與鉤藤中生物堿含量隨氣溫變化存在類似規(guī)律(鉤藤中生物堿含量隨氣溫變化研究已另文報道)。開陽毛鉤藤和劍河鉤藤雖不同種且產(chǎn)地不同，但兩者總黃酮含量卻沒有較大差異。本實驗在考察提取溶劑時，根據(jù)相關(guān)文獻的報道及黃酮類物質(zhì)的性質(zhì)，分別考察了不同濃度的乙醇［3，4］、先用乙醇提取再用乙酸乙酯萃取、甲醇及無水乙醇作為提取溶劑，只要無水乙醇提取出的供試液顯色后在與蘆丁對照品顯色后在一樣波長下有最大吸收峰，所以提取溶劑優(yōu)選為無水乙醇。以下為參考文獻:［1］辛文波，王崢濤．毛鉤藤葉的化學(xué)成分［J］．中國天然藥物，2008，6(4)