生化大實(shí)驗(yàn)雙向瓊脂免疫擴(kuò)散

生化大實(shí)驗(yàn)雙向瓊脂免疫擴(kuò)散第1頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)原理掌握雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)操作方法第2頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六基本概念抗原：抗原（antigenicity）是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生（特異性）免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)（特異性反應(yīng)）的物質(zhì)?？贵w：抗體(antibody)指機(jī)體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B淋巴細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。第3頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)原理

雙向免疫擴(kuò)散是一種定性試驗(yàn)。將抗原、抗體分別加入瓊脂板相對應(yīng)的小孔中，使兩者互相擴(kuò)散，在比例適當(dāng)處形成可見的沉淀線。觀察沉淀線的位置、數(shù)量、形狀，以及對比關(guān)系，可對抗原或抗體進(jìn)行定性分析，常用于:（1）抗原或抗體的純度鑒定。也可對抗體效價(jià)進(jìn)行初步估算。（2）用已知抗血清（或抗原）檢測未知抗原（或抗體）（3）抗原或抗體相對分子量的估計(jì)雙向免疫擴(kuò)散常見孔型有三孔型、雙孔型、雙排孔型、梅花孔型（見圖1）第4頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六圖1雙向免疫瓊脂擴(kuò)散孔型○○○○

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○○○○○三孔型雙孔型梅花孔型雙排孔型第5頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六三試劑與器材1.緩沖液：4.65gTris加水溶解，加115ml0.1MHCl，最后補(bǔ)水至1000ml，pH為8.2。2.凝膠液：5g瓊脂糖加500ml上述緩沖液，微波爐加熱煮沸溶解。注意用中小火，以免暴沸。3.待測樣品：I號峰、II號峰、III號峰4.羊抗人IgG抗體、羊抗人LDL抗體、羊抗人apoA-I抗體。5.生化培養(yǎng)箱、微波爐、刻度吸管、培養(yǎng)皿、下口徑2mm滴管等第6頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六四操作步驟

1.制板：用移液管吸取熱瓊脂20ml，平鋪于直徑9cm培養(yǎng)皿中。2.打孔：待瓊脂凝固后，按圖1梅花孔型打孔，孔徑2mm,孔與孔距離3-4mm。用針挑去孔內(nèi)瓊脂。3.用微量加樣器將羊抗人IgG抗體、羊抗人LDL抗體及羊抗人apoA-I抗體各5-10ul加入周邊孔中，中間孔加不同峰的液體。4.將培養(yǎng)皿置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)，于37℃溫育，隔天觀察結(jié)果。第7頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六五注意事項(xiàng)1.用瓊脂澆培養(yǎng)皿時(shí)，培養(yǎng)皿必須保持水平位置。2.每個(gè)孔的加樣量應(yīng)保持一致，既使每個(gè)孔都被加滿，又必須不使樣品溢出孔外。3.打孔時(shí)注意不要將孔弄破。第8頁，共10頁，2023年，2月20日，星期六六復(fù)習(xí)題1.什么是抗原？2.什么是抗體？3