顯微鏡的使用及維護(hù)

實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的使用與維護(hù)ALEX4/24/2023前言顯微鏡是一種高精密的儀器,目前已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、材料科學(xué)、醫(yī)學(xué)等學(xué)科領(lǐng)域。第一代為光學(xué)顯微鏡，第二代為電子顯微鏡，第三代為掃描隧道顯微鏡。4/24/2023光學(xué)顯微鏡電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡4/24/2023一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握顯微鏡的正確使用2.熟悉顯微鏡的工作原理、基本結(jié)構(gòu)、性能參數(shù)3.了解顯微鏡的拆裝技術(shù)和主要性能參數(shù)的設(shè)定4/24/2023二、顯微鏡1.光學(xué)顯微鏡的成像原理

要獲得清晰的像，被觀察標(biāo)本AB應(yīng)位于物鏡前焦點(diǎn)外至兩倍焦距之間。標(biāo)本AB經(jīng)兩級(jí)放大，在眼的明視范圍內(nèi)看到放大的A``B``像。

4/24/20232、普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)普通顯微鏡在結(jié)構(gòu)上分：光學(xué)系統(tǒng)，機(jī)械系統(tǒng)。光學(xué)系統(tǒng)包括物鏡、目鏡、聚光鏡、反光鏡等。機(jī)械系統(tǒng)包括底座、鏡臂粗調(diào)手輪、微調(diào)手輪、載物臺(tái)、轉(zhuǎn)換器等。4/24/20231.物鏡顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)最核心的部件，其性能直接關(guān)系到顯微鏡的性能和成像質(zhì)量。

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)4/24/20232.目鏡也稱接目鏡，實(shí)質(zhì)上是放大鏡，其作用是把物鏡分辨和放大的實(shí)像再放大并映入觀察者眼中。

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)4/24/2023聚光鏡光源(燈在底座內(nèi))3.光源4.聚光鏡

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)4/24/2023聚光鏡孔徑光闌4/24/2023物鏡轉(zhuǎn)換器載物臺(tái)調(diào)節(jié)手輪單目鏡鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器顯微鏡的機(jī)械系統(tǒng)4/24/2023聚光器升降螺旋玻片夾調(diào)焦螺旋調(diào)焦螺旋鎖顯微鏡的機(jī)械系統(tǒng)4/24/20233、普通光學(xué)顯微鏡的正確使用（1）.顯微鏡取鏡放置：①移取時(shí)右手握住鏡臂，左手托住鏡座，保持顯微鏡平直②顯微鏡放置在穩(wěn)定的臺(tái)面上，離臺(tái)邊一定距離（6cm以上）③正確連接接地良好的電源。4/24/2023將主開(kāi)關(guān)打開(kāi)，調(diào)節(jié)亮度將樣品置于載物臺(tái)，移入光路以轉(zhuǎn)換器使低倍物鏡入光路轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦旋鈕，對(duì)樣本聚焦調(diào)節(jié)目鏡瞳間距和屈光度調(diào)節(jié)孔徑光闌和視場(chǎng)光闌將觀察物鏡轉(zhuǎn)入光路，再聚焦再次調(diào)節(jié)亮度，開(kāi)始觀察（2）.普通光學(xué)顯微鏡的基本觀察步驟3、普通光學(xué)顯微鏡的正確使用4/24/20233、普通光學(xué)顯微鏡的正確使用（3）.清潔收鏡：①觀察完畢，移去標(biāo)本，扭轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，使兩低倍物鏡鏡頭呈V字形于載物臺(tái)上方②用擦鏡紙擦凈油鏡鏡頭，綢布擦拭鏡身③是有張力的部件處于松弛狀態(tài)（聚光鏡、載物臺(tái)）④調(diào)節(jié)光亮度旋鈕將光亮度調(diào)至最暗，關(guān)閉電源。4/24/2023（1）.數(shù)值孔徑

4、顯微鏡的性能參數(shù)又稱鏡口率，是物體與物鏡間媒質(zhì)的折射率n與物鏡孔徑角的一半（β）正弦值的乘積，用NA表示。即：NA＝n×sinβ數(shù)值孔徑與分辨率成正比，與放大率成正比，NA增大，視場(chǎng)寬度與工作距離都會(huì)相應(yīng)地變小。4/24/2023（2）.放大倍數(shù)又稱為放大率，指顯微鏡經(jīng)多次成像后最終所觀察到的物像大小相對(duì)于原物體大小的比值，常記作M。即：M＝maq

m是物鏡的放大倍數(shù)

a為目鏡的放大倍率

q是在雙目顯微鏡中所增設(shè)的棱鏡產(chǎn)生的放大倍數(shù)（雙目顯微鏡取值為1.6倍，單目顯微鏡q值為1）。4/24/2023物鏡一般刻有放大倍數(shù)×NA（數(shù)值孔徑）如：4×0.1（1組鏡片）10×0.25（2組鏡片）40×0.65（3組鏡片）100×1.25（4組鏡片）160/0.17（機(jī)械鏡筒長(zhǎng)/蓋玻片的厚度）4/24/2023（3）.工作距離指顯微鏡正常觀察物像時(shí)物鏡表面到被觀察標(biāo)本間的距離顯微鏡使用過(guò)程中習(xí)慣所說(shuō)的“調(diào)焦”指的就是調(diào)整物鏡的工作距離它與物鏡的數(shù)值孔徑成反比，一般情況下，物鏡的數(shù)值孔徑越大，其工作距離越小。4/24/2023（4）.視野視野又稱視場(chǎng)，是指通過(guò)顯微鏡所能看到的標(biāo)本范圍。視野成圓形視野大小決定于物鏡的倍數(shù)及目鏡光闌的大小，小的放大倍數(shù)和大光闌可獲得較大的視野，反之則視野較小因?yàn)橐曇暗木窒?，一般均要通過(guò)機(jī)械裝置移動(dòng)、分區(qū)觀察標(biāo)本。4/24/2023（5）.景深又稱焦點(diǎn)深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像平面不變，景物沿光軸前后移動(dòng)的距離顯微鏡觀察時(shí)，不僅位于聚焦平面上的點(diǎn)是清楚的，而且在景深范圍內(nèi)的各點(diǎn)也是清楚的景深與總放大倍數(shù)及物鏡的分辨率成反比（垂直鑒別能力）4/24/2023三、實(shí)驗(yàn)器材1.普通光學(xué)顯微鏡一臺(tái)2.紅細(xì)胞懸液3.骨髓片4.微量吸管、一次性塑料吸管等4/24/2023四、操作步驟1、顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)的拆卸和組裝（僅示教）拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光源、后拆聚光鏡、物鏡、目鏡組裝：裝的次序是由上而下，即先目鏡、后物鏡、聚光鏡、光源2、普通光學(xué)顯微鏡的調(diào)試3、顯微鏡光學(xué)性能參數(shù)的設(shè)定4、正確使用光學(xué)顯微鏡觀察不染色標(biāo)本和染色標(biāo)本，并總結(jié)其不同之處（不染色標(biāo)本制備：用微量吸管吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理鹽水中，混勻，用一次性塑料吸管滴加3-5滴與潔凈玻片上）4/24/2023五、注意事項(xiàng)1.轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)須旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，勿轉(zhuǎn)物鏡，否則易損壞光軸。2.目鏡不要輕易拿下，否則灰塵會(huì)落入物鏡中。3.不用時(shí)，使載物臺(tái)落下，呈放松狀態(tài)。4.光源燈不用時(shí)關(guān)到最小，保護(hù)燈泡。

4/24/2023六、維護(hù)與保養(yǎng)1.保證良好的使用環(huán)境臺(tái)面穩(wěn)固、環(huán)境良好。2.保持正確的使用方法操作輕巧、舒緩，正確旋轉(zhuǎn)各類螺旋，合理使用照明光源和油鏡。3.定期進(jìn)行清潔維護(hù)正確清潔，定期維護(hù)。4.擦鏡：1）擦鏡液的配制：乙醇：乙醚=7：3或80%：20%2）先用洗耳球吹去浮塵。3）用長(zhǎng)絮棉簽沾檫鏡液由中心向外擦。4/24/2023常見(jiàn)故障原因排除方法視場(chǎng)模糊、視場(chǎng)亮度不均、不能看到完整視場(chǎng)1．物鏡轉(zhuǎn)換器未能正確定位（物鏡未與光路同軸）1．旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器直至選用物鏡完全對(duì)中2．聚光器位置太低2．調(diào)整（升高）聚光器位置得到良好物像3．視場(chǎng)光闌未對(duì)中3．調(diào)整視場(chǎng)光闌使其良好對(duì)中4．視場(chǎng)光闌開(kāi)得太小4．適當(dāng)開(kāi)大光闌七、常見(jiàn)故障與處理4/24/2023常見(jiàn)故障原因排除方法視場(chǎng)內(nèi)有污跡或灰塵1．目鏡、物鏡、聚光鏡等其它光學(xué)部件上有污跡和灰塵（旋動(dòng)目鏡時(shí)污物轉(zhuǎn)動(dòng)說(shuō)明目鏡上有污物，否則污物在物鏡或聚光鏡上）1．正確擦拭顯微鏡的光學(xué)部件。擦拭目鏡和物鏡時(shí)必須使用合格的拭鏡紙、蘸取無(wú)水乙醇擦拭。要避免二次污染2．標(biāo)本片上有污跡和灰塵2．正確擦拭標(biāo)本片七、常見(jiàn)故障與處理4/24/2023常見(jiàn)故障原因排除方法觀察效果差、看不清細(xì)節(jié)、視場(chǎng)不均勻（反差過(guò)大）1．標(biāo)本片正反面錯(cuò)放1．翻轉(zhuǎn)，使蓋玻片向上2．