重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座

試驗二主要功效微生物篩選及生物學(xué)特征重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第1頁主要功效微生物農(nóng)業(yè)微生物（磷細(xì)菌）環(huán)境微生物（重金屬抗性細(xì)菌）工業(yè)微生物（生物表面活性劑產(chǎn)生菌）醫(yī)藥微生物（放線菌）篩選系列稀釋，平板培養(yǎng)，選擇性培養(yǎng)基生物學(xué)特征菌落特征，菌體特征，革蘭氏反應(yīng)，功效大小等重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第2頁1、磷細(xì)菌篩選磷細(xì)菌(也稱溶磷細(xì)菌或解磷細(xì)菌)：主要是指土壤中一類溶解磷酸化合物能力較強(qiáng)細(xì)菌總稱，能夠分為無機(jī)磷細(xì)菌和有機(jī)磷細(xì)菌。本試驗利用無機(jī)磷培養(yǎng)基直接從土壤中篩選無機(jī)磷細(xì)菌，培養(yǎng)出目標(biāo)菌菌落周圍會產(chǎn)生透明溶磷圈。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第3頁材料和器具樣品：土壤培養(yǎng)基：無機(jī)磷培養(yǎng)基培養(yǎng)基配方：去離子水1000ml、葡萄糖10克、(NH4)2SO40.1克、KCl0.2克、MgCl2?6H2O5克、Ca3(PO4)25克、MgSO4?7H2O0.25克；pH7.0，115℃滅菌25min。其它器具：500ml燒杯、250ml三角瓶、試管、酒精燈、涂布棒、1ml和100μl移液槍及槍頭、滅菌鍋、顯微鏡、載玻片等。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第4頁試驗步驟配制無機(jī)磷培養(yǎng)基100ml，取250ml三角瓶，向其中加入100ml去離子水和幾顆小玻璃珠，再取三只試管各加9mL去離子水，將準(zhǔn)備好上述材料在115℃下滅菌25分鐘。滅完菌好待培養(yǎng)基冷卻到60℃左右倒平板6塊。稱取土壤樣品1g，加入到加有玻璃珠100ml無菌水中，震蕩30分鐘，配成10-2菌懸液。吸收1mL菌液加入到裝有9mL無菌水試管中，震蕩均勻，配成10-3菌懸液。如法依次制成10-4、10-5菌懸液。吸收各稀釋度菌懸液100μL加入到冷卻平板中，稀釋涂布，倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待菌體長出，觀察細(xì)菌菌落形態(tài)和溶磷菌溶磷圈。并測量溶磷菌菌落直徑和溶磷圈直徑，計算比值，定性比較各溶磷菌落溶磷能力。制片，革蘭氏染色，鏡檢，觀察菌體形態(tài)等特征。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第5頁2、重金屬Cu抗性細(xì)菌篩選樣品：土壤培養(yǎng)基：1/10LB(1000ml)酵母膏0.5g蛋白胨1g氯化鈉1gpH7.0

瓊脂2%，配制600ml，分裝至3個250ml三角瓶，滅菌待用無菌水準(zhǔn)備100ml無菌水置于250ml三角瓶中，內(nèi)加5顆玻璃珠，滅菌待用。準(zhǔn)備3根試管，每根加入9ml無菌水，加塞，滅菌待用。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第6頁抗性平板制備將滅菌后1/10LB培養(yǎng)基融化，待溫度適宜后，與CuSO4溶液混勻，制成終濃度為2mg/L、5mg/L、10mg/L含銅篩選平板，待用。Cu2:200ml培養(yǎng)基+40ulCuSO4Cu5:200ml培養(yǎng)基+100ulCuSO4Cu10:200ml培養(yǎng)基+200ulCuSO4土壤懸液制備，系列稀釋，涂布平板培養(yǎng)選擇10-3、10-4、10-5稀釋度，分別吸收100ul土壤稀釋液，分別加入Cu2、Cu5、Cu10抗性平板中，每個稀釋度設(shè)置三個重復(fù)，用涂布棒涂布均勻。(3x3x3=27)觀察抗性平板上長出菌落，比較三種濃度抗性平板，將外觀形態(tài)一致視為同一個菌以確定抗性范圍。挑取菌落，進(jìn)行革蘭氏染色，并進(jìn)行鏡檢，對所觀察到細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)描述。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第7頁3、生物表面活性劑產(chǎn)生菌篩選生物表面活性劑（Biosurfactants)）是一類由微生物合成、結(jié)構(gòu)不一樣表面活性分子，含有一定表/界面活性，集親水基和疏水基結(jié)構(gòu)于一分子內(nèi)部兩親化合物。在工業(yè)領(lǐng)域如采油和能源工業(yè)、藥品和化裝品、食品、環(huán)境工程等中廣泛應(yīng)用。一些生物表面活性劑含有抗生性和溶解紅血球特征，這些特征被用于建立血平板篩選模型。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第8頁樣品：土壤培養(yǎng)基：血平板無菌水土壤懸液制備，系列稀釋，涂布平板培養(yǎng)觀察血平板上長出菌落，比較溶血圈大小。挑取菌落，進(jìn)行革蘭氏染色，并進(jìn)行鏡檢，對所觀察到細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)描述。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第9頁4、放線菌篩選及其對金黃色葡萄球菌抑制作用放線菌產(chǎn)生抗生素對細(xì)菌含有抑制作用，能夠?qū)⒎啪€菌菌液涂布在混有金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間，觀察放線菌周圍產(chǎn)生抑菌圈。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第10頁樣品：土壤培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基，高氏1號培養(yǎng)基雙層平板制備：將滅菌后LB培養(yǎng)基融化，待溫度適宜后，與金葡菌液混勻，倒入培養(yǎng)皿，制成底層含菌培養(yǎng)基。凝固后，在上層倒入高氏1號。土壤懸液制備，系列稀釋，涂布平板培養(yǎng)觀察平板上長出菌落，比較抑菌圈大小。挑取菌落，進(jìn)行革蘭氏染色，并進(jìn)行鏡檢，對所觀察到細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)描述。重要功能微生物的篩選和生物學(xué)特性專家講座第11頁試驗結(jié)果

1.觀察菌落并將試驗結(jié)果統(tǒng)計下表不一樣溶磷菌落菌落形態(tài)溶磷能力形狀大小顏色透明粘稠邊緣形狀菌落直徑(mm)溶磷圈直徑(mm)圈徑/菌徑123……菌革染特征形態(tài)有沒有芽孢122.選?。ú灰粯有螒B(tài)）菌落1-2個