醫(yī)學(xué)實驗室生物安全

醫(yī)學(xué)試驗室生物安全醫(yī)學(xué)實驗室生物安全1/56本標準要求了微生物和生物醫(yī)學(xué)試驗室生物安全防護基本標準、試驗室分級、各級試驗室基本要求。本標準為最低要求。本標準適合用于疾病預(yù)防控制機構(gòu)、醫(yī)療保健、科研機構(gòu)?？倓t醫(yī)學(xué)實驗室生物安全2/56定義試驗室生物安全防護：試驗室工作人員所處理試驗對象含有致病微生物及其毒素時，經(jīng)過在試驗室設(shè)計建造、使用個體防護裝置、嚴格遵從標準化工作及操作程序和規(guī)程等方面采取綜合辦法，確保試驗室工作人員不受試驗對象侵染，確保周圍環(huán)境不受其污染。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全3/56當建設(shè)使用傳染性或有潛在傳染性材料試驗室前，必須進行微生物危害評定。應(yīng)依據(jù)傳染性微生物致病能力程度、傳輸路徑、穩(wěn)定性、感染劑量、操作時濃度和規(guī)模、試驗對象起源、是否有動物試驗數(shù)據(jù)、是否有有效預(yù)防和治療方法等諸原因進行微生物危害評定。經(jīng)過微生物危害評定確定對象微生物應(yīng)在哪一級生物安全防護試驗室中進行操作依據(jù)危害評定結(jié)果，制訂對應(yīng)操作規(guī)程、試驗室管理制度和緊急事故處理方法，必須形成書面文件并嚴格恪守執(zhí)行。微生物危害評定醫(yī)學(xué)實驗室生物安全4/56第一類，不引發(fā)健康成年人疾病第二類，可經(jīng)過破損皮膚、消化道及粘膜暴露等方式引發(fā)人類疾病第三類，本土或外來微生物，經(jīng)過吸入路徑暴露時能夠造成嚴重或潛在致死性疾病第四類，能夠引發(fā)嚴重且威脅生命人類疾病，可經(jīng)過氣溶膠傳輸，或相關(guān)傳輸危險性不明微生物生物安全防護試驗室依據(jù)不一樣微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別。美國CDC/NIH對微生物指導(dǎo)性分類

BiosafetyinMicrobiologicalandBiomedicalLaboratories

4thEdition,May1999

醫(yī)學(xué)實驗室生物安全5/56試驗室生物安全防護基本標準

試驗室生物安全防護內(nèi)容包含安全設(shè)備、個體防護裝置和辦法（一級屏障），試驗室特殊設(shè)計和建設(shè)要求（二級屏障），嚴格管理制度和標準化操作程序及規(guī)程。應(yīng)將每一特定試驗室從立項、建設(shè)到使用維護全過程中相關(guān)生物安全防護綜合辦法內(nèi)容編入各試驗室生物安全手冊中。必須設(shè)有專職生物安全責(zé)任人。生物安全防護試驗室依據(jù)不一樣微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全6/56安全設(shè)備和個體防護是確保試驗室工作人員不與致病微生物及其毒素直接接觸一級屏障。生物安全柜是最主要安全設(shè)備，形成最主要防護屏障。試驗室應(yīng)按要求分別配置Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級生物安全柜。全部可能使致病微生物及其毒素濺出或產(chǎn)生氣溶膠操作，除實際上不可實施外，都必須在生物安全柜內(nèi)進行。不得用超凈工作臺代替生物安全柜。安全設(shè)備和個體防護（一級屏障）醫(yī)學(xué)實驗室生物安全7/56必要時試驗室應(yīng)配置其它安全設(shè)備，如設(shè)置配有排風(fēng)凈化裝置排氣罩等，或采取其它不使致病微生物逸出確保安全設(shè)備。試驗室所配置離心機應(yīng)在生物安全柜或其它安全設(shè)備中使用，不然必須使用安全密封專用離心杯。必須給試驗室工作人員配置必要個體防護用具，如個人防護服、防毒面具、安全眼鏡或眼罩。安全設(shè)備和個體防護（一級屏障）醫(yī)學(xué)實驗室生物安全8/56生物安全柜（biosafetycabinet）處理危險性微生物時所用箱型空氣凈化安全裝置。I類生物安全柜（classIbiosafetycabinet）

最少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作時柜正面玻璃推拉窗打開二分之一，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)時確保工作人員不受侵害，但不確保試驗對象不受污染。生物安全柜醫(yī)學(xué)實驗室生物安全9/56Ⅱ類生物安全柜（classⅡbiosafetycabinet）

最少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化無渦流單向流空氣。工作時柜正面玻璃推拉窗打開二分之一，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)下恪守操作規(guī)程時既確保工作人員不受侵害，又確保試驗對象不受污染。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全10/56三、CLASSII二級生物安全柜CLASSII級生物安全柜依據(jù)結(jié)構(gòu)以及氣流分配不一樣主要是外排氣流不一樣分為：

A型:（30%排在室內(nèi)）

B型:B1（70%接管道外排）

B2（100%接管道外排）

B3（30%接管道外排）醫(yī)學(xué)實驗室生物安全11/56

CLASSIIA生物安全柜

由向下氣流和從開口處向內(nèi)進入氣流混合后部分經(jīng)HEPA高效過濾形成向下氣流進入工作區(qū)，部分（30%氣流）經(jīng)HEPA過濾后外排在室內(nèi)；

允許經(jīng)HEPA過濾外排氣流在試驗室內(nèi)排放；醫(yī)學(xué)實驗室生物安全12/56CLASSIIB1生物安全柜

經(jīng)過HEPA高效過濾向下氣流大部分由未經(jīng)污染向內(nèi)進入氣流和循環(huán)氣流組成

大部分被污染向下氣流（70%）經(jīng)過專用管道經(jīng)HEPA過濾后接管道外排至室外；醫(yī)學(xué)實驗室生物安全13/56CLASSIIB2生物安全柜來自試驗室內(nèi)或室外經(jīng)過HEPA過濾向下氣流（即：向下氣流中沒有在安全柜內(nèi)循環(huán)氣流）；

全部向內(nèi)進入氣流和向下氣流均經(jīng)過HEPA過濾后排到室外而不在柜內(nèi)循環(huán)，也不能排入試驗室；100%接管道外排。全部被污染管道和氣流通道都在負壓狀態(tài)下或被直接外排負

壓管道或氣流管道所包圍。。

醫(yī)學(xué)實驗室生物安全14/563.3CLASSIIB3生物安全柜

經(jīng)過HEPA過濾后向下氣流是由共用外排風(fēng)道中向下氣流和內(nèi)向氣流組成；

全部外排到室外氣流（30%）均經(jīng)過HEPA高效過濾它與CLASSIIA型氣流方向相同，但與CLASSA型不一樣是，它30%外排氣是接管道排到室外。

醫(yī)學(xué)實驗室生物安全15/56Ⅲ類生物安全柜（classⅢbiosafetycabinet）

最少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化無渦流單向流空氣。正面上部為觀察窗，下部手套箱式操作口。箱內(nèi)對外界保持負壓可確保人體與柜內(nèi)物品完全隔絕。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全16/56CLASSIII生物安全柜全封閉、氣密結(jié)構(gòu)通風(fēng)柜經(jīng)過與柜體聯(lián)結(jié)橡膠手套進行操作；柜內(nèi)保持最少120Pa負壓(0.50wg)；供氣經(jīng)過HEPA抽入內(nèi)；外排氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)HEPA后再經(jīng)燃燒處理。

醫(yī)學(xué)實驗室生物安全17/56管理制度試驗室內(nèi)設(shè)置和準入在主試驗室內(nèi)應(yīng)合理設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)非試驗相關(guān)人員和物品不得進入試驗室試驗室工作人員、外來合作者、進修和學(xué)習(xí)人員在進入試驗室及其崗位之前必須經(jīng)過試驗室主任同意醫(yī)學(xué)實驗室生物安全18/56試驗室工作人員資格和培訓(xùn)試驗室工作人員必須是受過專業(yè)教育技術(shù)人員。在獨立工作前須在中高級試驗技術(shù)人員指導(dǎo)下進行上崗培訓(xùn)，到達合格標準，方可開始工作試驗室工作人員必須被通知試驗室工作潛在危險并接收試驗室安全教育，自愿從事試驗室工作試驗室工作人員必須恪守試驗室全部制度、要求和操作規(guī)程醫(yī)學(xué)實驗室生物安全19/56試驗室特殊管理對可能危險原因，制訂確保安全工作程序事前進行有效培訓(xùn)和模擬訓(xùn)練對于意外事故要能夠提供包含緊搶救助或?qū)I(yè)性保健治療辦法，足以應(yīng)付緊急情況試驗室事故處理及上報醫(yī)學(xué)實驗室生物安全20/56試驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適合用于對健康成年人已知無致病作用微生物，如用于教學(xué)普通微生物試驗室等。包含微生物舉例大腸桿菌格魯伯耐格里原蟲感染性犬肝炎病毒枯草桿菌一級生物安全防護試驗室醫(yī)學(xué)實驗室生物安全21/56試驗室應(yīng)設(shè)洗手池（靠近出口處）試驗室圍護結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。地面應(yīng)防滑、無縫隙，不得鋪設(shè)地毯試驗室中家俱應(yīng)牢靠。應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器臺（架）試驗臺表面應(yīng)不透水，耐腐蝕、耐熱試驗室如有可開啟窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗一級生物安全防護試驗室試驗室設(shè)計及建造醫(yī)學(xué)實驗室生物安全22/56

工作過程中禁止非工作人員進入試驗室。接觸微生物或含有微生物物品后，脫掉手套后和離開試驗室前要洗手禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化裝及存放食物一級生物安全防護試驗室標準微生物操作規(guī)程醫(yī)學(xué)實驗室生物安全23/56使用機械移液器吸收液體，禁止口吸制訂尖銳器具安全操作規(guī)程按照試驗室安全規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠產(chǎn)生天天最少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出后要隨時消毒全部培養(yǎng)物、廢棄物在運出試驗室前須進行滅活（如高壓）。需運出試驗室滅活物品必須放在專用密閉容器內(nèi)。一級生物安全防護試驗室標準微生物操作規(guī)程醫(yī)學(xué)實驗室生物安全24/56一級生物安全防護試驗室

安全設(shè)施和個體防護普通無須使用生物安全柜等專用安全設(shè)備工作人員在試驗室應(yīng)穿工作服，帶防護眼鏡工作人員手上有皮膚破損或皮疹時應(yīng)戴手套醫(yī)學(xué)實驗室生物安全25/56試驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適合用于對人或環(huán)境含有中等潛在危害微生物。包含微生物舉例麻疹病毒沙門氏菌乙型肝炎病毒HIV血清學(xué)檢測衣原體志賀氏菌二級生物安全防護試驗室醫(yī)學(xué)實驗室生物安全26/56設(shè)計和建造特殊要求

消毒設(shè)施（高壓滅菌鍋、化學(xué)消毒裝置等）洗眼裝置可自動關(guān)閉門鎖門口有發(fā)光指示裝置換氣裝置（3-4次/小時）醫(yī)學(xué)實驗室生物安全27/56滿足一級試驗室(標準微生物操作規(guī)程)各款要求，在此基礎(chǔ)上尤其注意制訂出入制度試驗室人口貼上生物危險標志制訂試驗室特定生物安全操作規(guī)則每年一次最新培訓(xùn)制度二級生物安全防護試驗室特殊微生物操作規(guī)程生物危險Ⅱ級醫(yī)學(xué)實驗室生物安全28/56禁止用手處理破碎玻璃器具。二級生物安全防護試驗室特殊微生物操作規(guī)程使用塑料器材代替玻璃器材。

培養(yǎng)基、組織、體液及其它含有潛在危險性廢棄物須放在防漏容器中儲存、運輸及消毒、滅菌醫(yī)學(xué)實驗室生物安全29/56用過針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手直接從注射器取下。用過針頭必須直接放入防穿透容器中。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運輸?shù)教囟▍^(qū)域消毒，最好進行高壓消毒醫(yī)學(xué)實驗室生物安全30/56醫(yī)學(xué)實驗室生物安全31/56工作人員應(yīng)接收必要免疫接種和檢測(如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)必要時搜集從事危險性工作人員本底血清嚴格執(zhí)行試驗室工作人員年度采血檢測HIV抗體和立案制度。每六個月進行一次HIV抗體檢測，并保留樣品對從事艾滋病試驗室工作人員，因工作中意外事故造成HIV職業(yè)暴露者，所在單位應(yīng)負責(zé)處理抗病毒及其它對應(yīng)治療醫(yī)療費用二級生物安全防護試驗室特殊微生物操作規(guī)程醫(yī)學(xué)實驗室生物安全32/56試驗設(shè)備在運出修理或維護前必須進行消毒人員暴露于感染性物質(zhì)時，及時向試驗室責(zé)任人匯報，并統(tǒng)計事故經(jīng)過和處理方案禁止將無關(guān)動物帶入試驗室醫(yī)學(xué)實驗室生物安全33/56處理以下致病微生物時應(yīng)在生物安全柜(Ⅱ級)中進行，包含:

高濃度大容量有噴濺可能性上述材料離心操作如使用密封離心機轉(zhuǎn)子或安全離心杯，且只在生物安全柜中開閉，可在試驗室中進行。Ⅱ級生物安全柜必須每年進行一第二年度現(xiàn)場檢測。二級生物安全防護試驗室安全設(shè)施和個體防護醫(yī)學(xué)實驗室生物安全34/56安全設(shè)施和個體防護當微生物操作不可能在生物安全柜內(nèi)進行時，須使用面部保護裝置應(yīng)有對應(yīng)SOP醫(yī)學(xué)實驗室生物安全35/56二級生物安全防護試驗室安全設(shè)施和個體防護在試驗室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護服，不得穿著外出。用過工作服應(yīng)先在試驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。當手可能接觸感染材料、污染設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開試驗室，工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全36/56

樣品從一個試驗室轉(zhuǎn)送到另外一個試驗室，必須是血清或血漿，除特殊需要外，普通不能用全血。且需置于帶有蓋帽試管內(nèi)，預(yù)防樣品流出，試管上應(yīng)有顯著標識。清楚地標識為感染性材料（按所在生物安全防護試驗室級別標明相同級別）。感染性材料必須放在密閉管子中，再放入含有足夠吸水材料生物危險管中，以防泄漏。將試管放入專門帶蓋容器內(nèi)，容器材料要易于消毒處理，在所放試劑管周圍上下均墊有軟性物質(zhì)，以免破碎，容器外表有HIV檢測專用字樣。假如旅程較遠或者氣候酷熱時，盛有樣本容器應(yīng)至于4℃以下轉(zhuǎn)運

樣本轉(zhuǎn)送和發(fā)放生物危險Ⅲ級醫(yī)學(xué)實驗室生物安全37/56試驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適合用于主要經(jīng)過呼吸路徑使人傳染上嚴重甚至是致死疾病致病微生物及其毒素。通常已經(jīng)有預(yù)防疫苗。包含微生物舉例結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌鼠疫桿菌炭疽桿菌Q熱病原體HIV(血清學(xué)檢測除外)澳大利亞立克次氏體加拿大立克次氏體三級生物安全防護試驗室醫(yī)學(xué)實驗室生物安全38/56試驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適合用于對人體含有高度危險性，經(jīng)過氣溶膠路徑傳輸或傳輸路徑不明，當前尚無有效疫苗或治療方法致病微生物及其毒素。與上述情況類似不明微生物，也必須在四級生物安全防護試驗室中進行，帶有充分數(shù)據(jù)后再決定此種微生物或毒素應(yīng)在四級還是在較低級別試驗室中處理。包含微生物舉例黃病毒埃博拉病毒中歐蜱傳腦炎病毒

四級生物安全防護試驗室醫(yī)學(xué)實驗室生物安全39/56職業(yè)暴露是指試驗室、醫(yī)護、預(yù)防保健人員以及相關(guān)監(jiān)管工作人員，在從事艾滋病防治工作及相關(guān)工作過程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者血液、體液污染了破損皮膚或非胃腸道粘膜，或被含有艾滋病病毒血液、體液污染了針頭及其它銳器刺破皮膚，而含有被艾滋病病毒感染可能性情況。

試驗室事故處理醫(yī)學(xué)實驗室生物安全40/56美國CDC研究顯示：影響針頭刺傷后危險性原因包含

傷口深度有可見血液從傷口溢出針頭刺破了靜脈或動脈污染源來自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒載量高)醫(yī)學(xué)實驗室生物安全41/56緊急處理辦法皮膚針刺傷或切割傷：馬上用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷出血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當消毒劑浸泡，如70%乙醇或其它皮膚消毒劑。

醫(yī)學(xué)實驗室生物安全42/56粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。衣物污染：盡快脫掉污染衣物，進行消毒處理。污染物潑濺：發(fā)生小范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)馬上進行消毒處理。發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)馬上通知試驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全責(zé)任人抵達事故現(xiàn)場查清情況，確定消毒程序。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全43/56事故登記事故發(fā)生時間、地點及詳細經(jīng)過。暴露方式；受傷部位、傷口深淺、暴露程度；污染物種類（培養(yǎng)液、血液或其它體液）以及其中含有HIV情況。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全44/56處理方法和經(jīng)過，包含教授或領(lǐng)導(dǎo)赴現(xiàn)場指導(dǎo)和處理情況。是否采取暴露后藥品預(yù)防，假如是，應(yīng)詳細統(tǒng)計用藥情況，包含首次用藥時間、服藥方案和毒副作用。隨訪檢測日期、項目和結(jié)果。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全45/56匯報和檢測發(fā)生重大事故時，在緊急處理同時要馬上向主管領(lǐng)導(dǎo)和教授匯報。同時抽血檢測HIV抗體，暴露一年內(nèi)要定時檢測。發(fā)生小型事故時可在緊急處理后馬上將事故情況和處理方法匯報主管領(lǐng)導(dǎo)和教授，檢測同前。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全46/56HIV職業(yè)暴露后預(yù)防因為預(yù)防性治療藥品效力和毒性以及不一樣暴露方式造成HIV感染危險性不一樣，所以預(yù)防性治療藥品應(yīng)在HIV職業(yè)暴露預(yù)防性治療藥品貯備庫（點）和HIV/AIDS防治方面教授指導(dǎo)下使用。依據(jù)使用藥品反應(yīng)情況，可改變處方。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全47/56對感染可能性很大醫(yī)護、檢驗人員可使用預(yù)防性治療藥品，治療方案須依據(jù)暴露情況由教授決定。對于感染危險性很小，提議不使用藥品預(yù)防。對可能有危險人，是否用藥治療，應(yīng)權(quán)衡較低感染危險性與使用藥品效力和藥品毒、副反應(yīng)以及堅持用藥依從性等利弊。醫(yī)學(xué)實驗室生物安全48/56暴露物是否是體液、含血體液、其它污染物或其沾染器械是否其它污染物血液或含血液體暴露類型粘膜或可能有損傷皮膚不需PEP只沾染完整皮膚刺、割傷皮膚暴露量不需PEP危險度量小暴露時間短1級暴露低危：如表皮擦傷、針刺等量大暴露時間長2級暴露高危：如傷口較深、儀器上可見血液等2級暴露3級暴露步驟1：確定暴露級別（ExposureCode）

醫(yī)學(xué)實驗室生物安全49/56步驟2：確定HIV暴露源頭嚴重程度

HIV暴露源級別不明HIV暴露源級別1（輕度）