用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座

大腸桿菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定

水、環(huán)境中微生物測(cè)定林親雄閻春蘭李曉華用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第1頁(yè)了解光電比濁計(jì)數(shù)法原理。學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)操作方法。經(jīng)過(guò)細(xì)菌數(shù)量測(cè)量了解大腸桿菌生物特征和規(guī)律，繪制生長(zhǎng)曲線。

試驗(yàn)31大腸桿菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第2頁(yè)生長(zhǎng)曲線

將少許純種單細(xì)胞微生物接種到定量液體培養(yǎng)基中，定時(shí)取樣測(cè)定細(xì)胞數(shù)量，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以菌數(shù)為縱坐標(biāo)作圖，得到一條反應(yīng)單細(xì)胞微生物在整個(gè)培養(yǎng)期間菌數(shù)改變規(guī)律曲線。二、試驗(yàn)原理一個(gè)經(jīng)典生長(zhǎng)曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定時(shí)和衰亡期四個(gè)時(shí)期用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第3頁(yè)微生物數(shù)量測(cè)定方法稀釋平板計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法最大約率法光電比濁法用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第4頁(yè)稀釋平板計(jì)數(shù)法對(duì)樣品稀釋培養(yǎng)，據(jù)形成菌落數(shù)計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：活菌計(jì)數(shù)方法，對(duì)設(shè)備要求不高。缺點(diǎn)：操作復(fù)雜。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法使用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，計(jì)數(shù)直觀。缺點(diǎn)：計(jì)數(shù)結(jié)果為活細(xì)菌和死菌體總和。用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第5頁(yè)最大約率法待測(cè)菌液經(jīng)十倍系列稀釋，每稀釋度做3-5個(gè)重復(fù)，經(jīng)培養(yǎng)后，檢驗(yàn)細(xì)菌生長(zhǎng)，以有細(xì)菌生長(zhǎng)最終三個(gè)稀釋度管數(shù)作數(shù)量指標(biāo)，由數(shù)理統(tǒng)計(jì)表查出近似值，再乘以數(shù)量指標(biāo)第一位稀釋倍數(shù)，即為原菌液中菌數(shù)。用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第6頁(yè)最大約率法比如：某細(xì)菌在稀釋培養(yǎng)法中生長(zhǎng)情況以下：稀釋度：10-310-410-510-610-710-8重復(fù)數(shù)：555555有菌生長(zhǎng)管數(shù)：555410依據(jù)上述結(jié)果，數(shù)量指標(biāo)為“541”，查表得近似值為17，乘以第一位數(shù)稀釋倍數(shù)，得出原始培養(yǎng)物活菌數(shù)=17×105個(gè)優(yōu)點(diǎn)：活菌計(jì)數(shù)，適合用于特殊細(xì)菌。缺點(diǎn)：計(jì)數(shù)結(jié)果為概值。用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第7頁(yè)光電比濁法光電比濁法是利用在一定范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比原理。當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞在溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計(jì)中測(cè)定時(shí)所吸收光線越多。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便快速，適合于自動(dòng)控制。

缺點(diǎn)：測(cè)定結(jié)果受培養(yǎng)液成份影響；一些樣品樣品不適適用此法。

用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第8頁(yè)菌種培養(yǎng)不一樣時(shí)段大腸桿菌。儀器或其它用具分光光度計(jì)，比色皿等。三、試驗(yàn)器材用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第9頁(yè)開(kāi)電源，儀器預(yù)熱20min，將波長(zhǎng)調(diào)至600nm處。打開(kāi)樣品室，將擋光體插入比色皿架，將其推或拉入光路。蓋好樣品室蓋，在TMODE下，按0%T鍵調(diào)零透射比。取出擋光體，按100%T/OA鍵調(diào)100%透射比。四、試驗(yàn)步驟1.樣品測(cè)試前調(diào)試用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第10頁(yè)2.樣品測(cè)定將參比溶液（未接種LB液體培養(yǎng)基）以及被測(cè)溶液倒入比色皿中。打開(kāi)樣品室蓋，將參比溶液放在樣品架第一個(gè)槽位中，將被測(cè)溶液依次放入其它槽位。將參比溶液推入光路，按100%T/OA鍵調(diào)滿度。按MODE，將測(cè)試方式調(diào)至吸光度方式（A）。此時(shí),顯示器顯示“0.000”。將被測(cè)溶液推入光路，顯示器顯示為被測(cè)樣品吸光值。用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第11頁(yè)

在600nm波長(zhǎng)下，用未接種LB液體培養(yǎng)基作空白對(duì)照，分別對(duì)培養(yǎng)了0、4、8、12、16和20h大腸桿菌培養(yǎng)液，進(jìn)行光電比濁測(cè)定。對(duì)于高濃度大腸桿菌培養(yǎng)液,要用未接種LB培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，使其吸光值在0.1-0.65范圍內(nèi)。比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后，必須經(jīng)待測(cè)樣品潤(rùn)洗。比色皿毛面用吸水紙擦干，而光面只能用吸水紙吸干，以免光面被劃破。比色皿之間吸光度進(jìn)行比較。用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第12頁(yè)四、試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)不一樣大腸桿菌培養(yǎng)液OD600值，并繪制大腸桿菌生長(zhǎng)曲線。

培養(yǎng)時(shí)間（h）4812162024光密度值OD600用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第13頁(yè)五、思索題光電比濁計(jì)數(shù)原理是什么？這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)？假如用活菌計(jì)數(shù)法制作生長(zhǎng)曲線，你認(rèn)為會(huì)有什么不一樣？二者各有什么優(yōu)缺點(diǎn)？

用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第14頁(yè)比較不一樣場(chǎng)所和不一樣條件下細(xì)菌數(shù)量和類型。觀察不一樣類群微生物菌落形態(tài)特征。體會(huì)無(wú)菌操作主要性。掌握水和環(huán)境中微生物測(cè)定方法。檢測(cè)污染水域微生物類型和數(shù)量。

試驗(yàn)67水、環(huán)境中微生物測(cè)定一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第15頁(yè)應(yīng)用平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定污染水細(xì)菌總數(shù)。因?yàn)榧?xì)菌種類繁多，不可能找到一個(gè)培養(yǎng)基在一個(gè)條件下，使全部細(xì)菌均能生長(zhǎng)繁殖。所以，計(jì)算出來(lái)細(xì)菌總數(shù)僅是一個(gè)近似值。利用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基能夠大致測(cè)定不一樣環(huán)境中存在微生物。二、試驗(yàn)原理用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第16頁(yè)樣品采取自來(lái)水取自自來(lái)水管道。

橙汁購(gòu)于超市?？谇弧⑷嗣駧?、門(mén)把手和試驗(yàn)環(huán)境中微生物。南湖水距水面10-15cm深層水樣。培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基

。儀器或其它用具

滅菌培養(yǎng)皿，無(wú)菌槍頭，涂棒等。三、試驗(yàn)器材用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第17頁(yè)無(wú)菌操作采取10-1，10-2

，10-3稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板;每個(gè)稀釋度2個(gè)重復(fù)。N-乙酰葡糖胺四、試驗(yàn)步驟1.南湖水中微生物測(cè)定每個(gè)培養(yǎng)皿加0.1ml稀釋液用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第18頁(yè)(LTA)2.口腔、人民幣和門(mén)把手微生物測(cè)定用棉簽分別從牙周、人民幣紙幣和門(mén)把手表面挑取微生物，然后放入裝有0.5ml無(wú)菌水EP管中，顛倒均勻后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨平板中，涂布均勻。3.試驗(yàn)室空氣中微生物測(cè)定將牛肉膏蛋白胨平板蓋揭開(kāi)，分別置試驗(yàn)臺(tái)10，20，30，40，50，60min后，蓋上皿蓋，倒置培養(yǎng)。4.自來(lái)水、橙汁中微生物測(cè)定取1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板。自來(lái)水用無(wú)菌三角瓶搜集。用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第19頁(yè)四、試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算每ml南湖水中含有微生物數(shù)量。你所測(cè)定環(huán)境中微生物數(shù)量和種類；并試著分別統(tǒng)計(jì)每種細(xì)菌大小、形態(tài)、干濕、透明度、顏色以及邊緣等特征。觀察試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間？名稱

南湖水自來(lái)水（個(gè)/mL）口腔（個(gè)/cm2）人民幣（個(gè)/cm2）門(mén)把手（個(gè)/cm2）空氣（分鐘）（個(gè)）10-110-210-3總數(shù)數(shù)量形態(tài)用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第20頁(yè)五、思索題你所測(cè)定南湖水污染程度怎樣？經(jīng)過(guò)此次試驗(yàn)，在預(yù)防培養(yǎng)物污染與預(yù)防細(xì)菌擴(kuò)散方面，你學(xué)到了什么？有什么體會(huì)？用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定專家講座第21頁(yè)此次試驗(yàn)安排比濁法測(cè)定大腸桿菌生長(zhǎng)