CFDA起草無菌制劑培養(yǎng)基模擬灌裝試驗指引版

CFDA起草無菌制劑培養(yǎng)基模擬灌裝試驗指南.目的為指導(dǎo)和規(guī)范無菌藥品生產(chǎn)的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，充分評藥品生產(chǎn)企業(yè)的無菌操作水平，確保所生產(chǎn)無菌藥品的安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定，依據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及附錄，制定本指南。.范圍本指南根據(jù)無菌生產(chǎn)工藝的特點闡述了非最終滅菌的無菌產(chǎn)品培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的基本要求及流程，適用于采用無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)無菌制劑。.定義本指南所指的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，是指采用無菌的培養(yǎng)基或適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)，模擬藥品生產(chǎn)中無菌操作的全過程（不僅僅是灌裝過程），以評價該無菌工藝無菌保證水平的一系列活動。.原則在對無菌生產(chǎn)工藝充分認知和生產(chǎn)經(jīng)驗累積的基礎(chǔ)上，非最終滅菌產(chǎn)品企業(yè)應(yīng)結(jié)合工藝、設(shè)備、人員和環(huán)境等要素定期開展培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，以確認無菌生產(chǎn)過程的可靠性。開展培養(yǎng)基模擬灌裝試驗應(yīng)遵循以下原則：以現(xiàn)行GMP法規(guī)要求為準則，評價無菌生產(chǎn)過程的法規(guī)符合性，不符合規(guī)范要求的無菌工藝過程，不能通過模擬試驗來證實其無菌控制措施的合理性。對無菌生產(chǎn)過程實施風(fēng)險評估，識別生產(chǎn)過程風(fēng)險點以并評估現(xiàn)有控制措施的有效性，評估結(jié)果將在試驗方案設(shè)計時給予考慮。應(yīng)結(jié)合無菌生產(chǎn)過程所涉及到的工藝、設(shè)備、人員以及操作時限等因素有針對性開展模擬試驗，盡可能模擬實際無菌生產(chǎn)全過程，并應(yīng)特別關(guān)注“開放”操作、人工干預(yù)等高風(fēng)險過程。如同一生產(chǎn)線生產(chǎn)多個包裝規(guī)格的產(chǎn)品，應(yīng)評價模擬試驗方案對各產(chǎn)品無菌工藝過程的適用性。應(yīng)對有顯著差異的無菌工藝過程逐一開展模擬試驗。.無菌生產(chǎn)工藝及模擬范圍無菌產(chǎn)品的無菌生產(chǎn)工藝通常為：經(jīng)除菌過濾或其他方法獲取無菌藥液或無菌粉末，在無菌條件下進行液體灌裝或粉末灌裝，密封。凍干制劑在液體灌裝的基礎(chǔ)上增加了冷凍干燥工藝。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗應(yīng)從第一步無菌操作開始，直至無菌產(chǎn)品完全密封結(jié)束。如果在產(chǎn)品制備階段已經(jīng)采用了無菌生產(chǎn)的工藝，此部分工藝也應(yīng)作為模擬驗證的一部分。.模擬試驗方案的設(shè)計及實施過程要求培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的前提條件在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗之前應(yīng)確認與無菌工藝相關(guān)的支持性系統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)的驗證已完成，并達到了可接受的標準。工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)和輔助設(shè)施按照預(yù)期要求完成了設(shè)計、安裝和運行確認生產(chǎn)設(shè)備、公共系統(tǒng)、輔助設(shè)施滅菌方法完成了相應(yīng)的驗證，物品及廠房、設(shè)施所使用消毒劑及消毒方式完成了相關(guān)的驗證。藥液及與產(chǎn)品接觸的氣體、設(shè)備組件、容器、器具滅菌工藝完成了相應(yīng)的驗證。無菌關(guān)鍵區(qū)域的氣流及環(huán)境監(jiān)測達到了設(shè)計要求。根據(jù)無菌生產(chǎn)工藝要求建立了相關(guān)操作規(guī)程文件。參與模擬灌裝試驗的人員接受了GMP、無菌操作、微生物知識以及實施模擬試驗的培訓(xùn)。進入潔凈區(qū)的全部人員通過了更衣程序的確認，并采用文件形式，可視化標識管理或其他方式，確認了每位參與者可進入的的區(qū)域和其所允許的無菌操作項目。容器密封性驗證已經(jīng)完成。基于無菌風(fēng)險的模擬試驗方案的設(shè)計模擬試驗方案設(shè)計應(yīng)結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝，盡量與實際無菌操作過程保持一致，以求試驗結(jié)果真實反映生產(chǎn)過程的無菌保證水平。無菌生產(chǎn)工藝的風(fēng)險評估無菌生產(chǎn)工藝的設(shè)計基于對產(chǎn)品特性、工藝技術(shù)和無菌控制措施的認知和經(jīng)驗的累積，設(shè)計模擬試驗方案前應(yīng)對無菌生產(chǎn)過程開展系統(tǒng)性風(fēng)險評估，以充分識別無菌生產(chǎn)過程中潛在風(fēng)險點。模擬試驗方案設(shè)計時，應(yīng)重點考察和評估無菌操作的高風(fēng)險過程。無菌生產(chǎn)工藝的暴露操作是影響最終產(chǎn)品無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的無菌連接、無菌容器的轉(zhuǎn)運和更換、灌裝等關(guān)鍵操作，都是引入微生物污染的重點環(huán)節(jié)及風(fēng)險點，模擬試驗方案設(shè)計應(yīng)考察以上過程無菌防護措施的有效性。證實無菌操作人員滿足無菌生產(chǎn)要求，是實施模擬試驗的目的之一，有人員參與的無菌操作，應(yīng)考察評估來源于人員的污染途徑。進行模擬試驗方案設(shè)計時，應(yīng)結(jié)合工藝過程中的“開放”環(huán)節(jié)，重點考察有人員參與的關(guān)鍵操作，評價人員素質(zhì)和防護措施的可靠性。培養(yǎng)基的選擇與評價培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)被模擬產(chǎn)品的特點、灌裝過程、培養(yǎng)基滅菌方式等方面決定使用何種培養(yǎng)基。胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對無菌工藝環(huán)境中源自人體的細菌、芽抱和真菌有良好的促生長效果，廣泛應(yīng)用于微生物實驗室，環(huán)境監(jiān)測、無菌檢測及微生物計數(shù)或控制菌檢測，是模擬灌裝試驗常用的培養(yǎng)基。如果產(chǎn)品灌裝后充入惰性氣體、產(chǎn)品是儲存在無氧條件，無菌操作在嚴格的厭氧環(huán)境中進行時（即生產(chǎn)全過程氧氣濃度低于0.1%），應(yīng)考慮采用厭氧培養(yǎng)基如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）。在有氧氣存在的無菌工藝的環(huán)境監(jiān)控中反復(fù)發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產(chǎn)品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧菌時，需評估增加厭氧培養(yǎng)基。包含動物來源成分的培養(yǎng)基，須提供無BSE（可傳染性海綿腦病）/TSE（瘋牛?。┳C明，亦可選用植物來源的培養(yǎng)基。促生長能力試驗?zāi)M灌裝培養(yǎng)基產(chǎn)品完成培養(yǎng)后應(yīng)按照現(xiàn)行中國藥典方法進行促生產(chǎn)能力試驗，以證明本次驗證所用培養(yǎng)基的營養(yǎng)性。培養(yǎng)基促生長能力試驗使用的菌種，如：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉(CMCC98003)、枯草芽抱桿菌(CMCC63501)、金黃色葡萄球菌(CMCC26003)、銅綠假單胞菌(CMCC10104)、生抱梭菌(CMCC64941),在試驗中除標準菌株之外應(yīng)考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的微生物。促生長試驗應(yīng)能證明所選培養(yǎng)基能夠支持低量微生物的復(fù)壯和生長，接種量應(yīng)控制在10CFU-100CFU/灌裝單位。通過5天的促生長試驗，應(yīng)證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長。培養(yǎng)基的配制模擬灌裝的培養(yǎng)基應(yīng)在控制區(qū)域進行準備，準備過程中，應(yīng)注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴散及殘留造成的環(huán)境污染。應(yīng)按照培養(yǎng)基生產(chǎn)商提供的配方配制培養(yǎng)基。應(yīng)考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細菌和霉菌生長的風(fēng)險，以避免微生物生長導(dǎo)致培養(yǎng)基過濾性能降低。配制后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快滅菌或除菌過濾，進入無菌儲罐或容器儲存?zhèn)溆谩Ｅ囵B(yǎng)基在模擬灌裝前應(yīng)恢復(fù)至室溫，即用型無菌液體培養(yǎng)基儲存條件和使用條件應(yīng)遵循生產(chǎn)商要求。培養(yǎng)基的除菌與滅菌除菌過濾如采用除菌過濾的方式準備培養(yǎng)基將方便同生產(chǎn)工藝銜接，但過濾器堵塞的情況時有發(fā)生，支原體污染的風(fēng)險也難避免，所以應(yīng)對以上情況進行風(fēng)險評估并采取合理應(yīng)對。由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)基除菌過濾的濾器型號可與產(chǎn)品使用的過濾器不同。培養(yǎng)基可能因含有顆粒或生物負載較大，導(dǎo)致除菌過濾器的堵塞，這種情況下可增加預(yù)過濾以避免堵塞。值得注意的是除菌過濾的可靠性是通過專門的除菌過濾挑戰(zhàn)實驗驗證的，無法通過培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的結(jié)果證實。濕熱滅菌可采用在線滅菌或滅菌釜濕熱滅菌，但不同于微生物實驗室使用的小瓶培養(yǎng)基滅菌，培養(yǎng)基實驗所用的大體積培養(yǎng)基可能會產(chǎn)生受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象。滅菌過程應(yīng)遵循生產(chǎn)商推薦的滅菌時間和溫度的建議，以確保滅菌后的培養(yǎng)基的促生長能力。過度滅菌可能使培養(yǎng)基碳化以及降低其促生長性能。為避免過度加熱可采用濕熱滅菌與除菌過濾聯(lián)合使用的方式，但都應(yīng)進行促生長性能檢查。輻照滅菌輻照滅菌可避免支原體污染風(fēng)險，常與除菌過濾聯(lián)合使用。6.5.3.2.如直接使用輻照后的無菌培養(yǎng)基粉末，應(yīng)在無菌環(huán)境條件進行無菌操作。輻照滅菌過程應(yīng)經(jīng)試驗，驗證中應(yīng)使用耐輻射的菌種，并在產(chǎn)品質(zhì)量報告包含劑量信息。灌裝量容器中培養(yǎng)基灌裝量應(yīng)考慮適宜微生物生長的需要和容器內(nèi)表面覆蓋的要求，灌裝量不必與產(chǎn)品相同，通常應(yīng)能達到容器體積的1/3?1/2,即可保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到所有內(nèi)表面并有足夠的氧氣支持微生物的生長，以利于對培養(yǎng)基的觀察。灌裝數(shù)量及模擬持續(xù)時間培養(yǎng)基模擬灌裝數(shù)量應(yīng)足以保證評價的有效性及完成模擬方案中設(shè)計的各種干預(yù)活動。企業(yè)應(yīng)基于風(fēng)險評估的原則對所設(shè)計的灌裝數(shù)量、持續(xù)時間、模擬方式、預(yù)期收率作出合理說明。產(chǎn)品的生產(chǎn)批量小于5000支，模擬灌裝批量至少與生產(chǎn)批量相同;產(chǎn)品的生產(chǎn)批量在5000支至10000支，模擬灌裝數(shù)量應(yīng)與產(chǎn)品實際的生產(chǎn)批量相當(dāng)，對于高速灌裝線和總是以最大批量生產(chǎn)的產(chǎn)品，建議模擬灌裝數(shù)量應(yīng)不小于最大批量；大規(guī)模生產(chǎn)，即產(chǎn)品的生產(chǎn)批量大于10000支，最低模擬灌裝數(shù)量應(yīng)不低于10000支，且不應(yīng)低于產(chǎn)品實際生產(chǎn)批量的10%。大規(guī)模生產(chǎn)時，模擬試驗可采用以下幾種方式：（切換方式尚須討論）培養(yǎng)基與空瓶切換模擬試驗的持續(xù)時間和實際生產(chǎn)相當(dāng)，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實際批量，模擬試驗在培養(yǎng)基灌裝和空瓶運行間切換。在正常生產(chǎn)條件下應(yīng)模擬灌裝足夠數(shù)量的培養(yǎng)基產(chǎn)品，以保證能夠準確反映實際生產(chǎn)的污染風(fēng)險，在灌裝培養(yǎng)基期間應(yīng)模擬所有類型和規(guī)定數(shù)量的干預(yù)。模擬試驗應(yīng)包含生產(chǎn)的開始、結(jié)束階段和干預(yù)發(fā)生的時刻，在不灌裝培養(yǎng)基期間灌裝線穿插運行空容器。該方式能全面評估人員、操作和生產(chǎn)環(huán)境。培養(yǎng)基與注射用水切換模擬試驗的持續(xù)時間和實際生產(chǎn)相當(dāng)，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實際批量，模擬驗證在培養(yǎng)基灌裝和注射用水灌裝間切換。此種方式比實際生產(chǎn)更復(fù)雜，同時存在注射用水稀釋部分培養(yǎng)基導(dǎo)致促生長性能下降的風(fēng)險，應(yīng)通過促生長試驗證明其有效性。生產(chǎn)結(jié)束后模擬在一批產(chǎn)品生產(chǎn)結(jié)束后，不經(jīng)拆卸、清潔、消毒、滅菌等工作，直接進行培養(yǎng)基灌裝。此方式仍應(yīng)對設(shè)備的安裝、啟動和開始灌裝進行模擬并有足量的培養(yǎng)基沖洗產(chǎn)品管路以除去殘留的產(chǎn)品，并通過足夠的試驗證明培養(yǎng)基的促生長特性。對微生物生長有抑制性的產(chǎn)品，不適用此種方式。最差條件的選擇為了確認無菌生產(chǎn)工藝中無菌質(zhì)量風(fēng)險控制的有效性，通常采用生產(chǎn)過程中可能發(fā)生的最差條件進行模擬試驗。值得注意的是最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境。應(yīng)基于風(fēng)險等級并結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水平、人員數(shù)量和干預(yù)等因素來設(shè)計模擬試驗最差條件。包括但不限于以下方面：人員應(yīng)充分考慮人員及其活動對無菌生產(chǎn)工藝帶來的風(fēng)險，如模擬生產(chǎn)過程的最多人數(shù)，當(dāng)操作人員數(shù)量減少可能導(dǎo)致其它方面污染風(fēng)險增加時，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應(yīng)包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設(shè)備設(shè)施維護人員，同時應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。工藝時間應(yīng)適當(dāng)考慮模擬實際生產(chǎn)操作過程中房間、設(shè)備、物料消毒或滅菌后放置的最長時間及最長的工藝保留時限等，如設(shè)備設(shè)施、分裝容器、無菌器具滅菌后最長的放置時間等。灌裝速度模擬試驗應(yīng)涵蓋產(chǎn)品實際灌裝速度范圍，基于無菌風(fēng)險的角度分析評價灌裝速度對工藝過程及其他方面的影響程度，如采用最慢的灌裝速度、最大的容器用以模擬最長暴露時間，也可采用最快的灌裝速度、最小的容器用以模擬最大操作強度/難度。環(huán)境模擬試驗挑戰(zhàn)的最差環(huán)境應(yīng)考慮選擇單批產(chǎn)品無菌生產(chǎn)周期末端、間歇式生產(chǎn)的空調(diào)系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產(chǎn)期間周期性滅菌最長的時間間隔。干預(yù)概念：無菌生產(chǎn)工藝中人員及人員活動是最大的微生物污染源，因此，本指南中的干預(yù)是指由操作人員按照相關(guān)規(guī)定參與與無菌工藝生產(chǎn)有關(guān)的所有操作活動。干預(yù)可分為固有的干預(yù)和糾正性干預(yù)。固有干預(yù)是指常規(guī)和有計劃的無菌操作，如裝載膠塞，環(huán)境監(jiān)控，設(shè)備安裝等;糾正性干預(yù)則是指對無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如生產(chǎn)過程中清除破碎的瓶子，排除卡住的膠塞，更換部件、設(shè)備故障排除等。原則：無菌生產(chǎn)過程允許的各種干預(yù)活動應(yīng)該文件化，以明確規(guī)定正常的生產(chǎn)活動和干預(yù)活動，模擬試驗中干預(yù)設(shè)計應(yīng)與實際的生產(chǎn)活動保持一致，模擬試驗不應(yīng)模擬違反法規(guī)及操作要求的干預(yù)（如違反SOP標準操作規(guī)程的操作等）用以證明其合理性。模擬類型及頻次：無菌模擬試驗方案中應(yīng)明確規(guī)定固有干預(yù)、糾正性干預(yù)（如維修、故障停機、設(shè)備調(diào)試）的頻次、類型及復(fù)雜程度。如模擬試驗用于評估一定階段的日常生產(chǎn)無菌保證水平，干預(yù)應(yīng)盡量與實際的生產(chǎn)工藝一致。對于生產(chǎn)線存在多種相似的組合時，可采用最差條件的組合以代表其他相似的組合。通常，固有干預(yù)及經(jīng)常發(fā)生的糾正性干預(yù)應(yīng)在每次模擬中都實施，偶發(fā)性的干預(yù)可周期性地模擬。對難以預(yù)測的設(shè)備故障或偶發(fā)性干預(yù)，如無菌生產(chǎn)過程意外暫?；蛑貑?、無菌狀態(tài)下設(shè)備、設(shè)施偶發(fā)故障排除等，應(yīng)在模擬試驗方案中設(shè)計與此類操作相關(guān)的所有干預(yù)。模擬試驗應(yīng)設(shè)計并實施足夠多的糾正性干預(yù)，干預(yù)頻次的設(shè)計應(yīng)考慮生產(chǎn)過程按比例覆蓋模擬試驗的全過程，用以支持實際的無菌產(chǎn)品的評價。人員實施干預(yù)的人員應(yīng)經(jīng)過相關(guān)的培訓(xùn)和考核并能按規(guī)定的程序?qū)嵤└鞣N干預(yù)，應(yīng)在模擬試驗中考察操作和維修人員恢復(fù)故障設(shè)備的能力。標準化的簡單的固有干預(yù)可由某些操作人員實施并據(jù)此評價其他人。復(fù)雜性高的操作，如裝配灌裝機等，從事此類操作的人員應(yīng)逐一在模擬灌裝試驗中參與操作，操作條件不應(yīng)優(yōu)于日常生產(chǎn)的操作條件。干預(yù)后產(chǎn)品（容器）的處理實際工藝中如明確規(guī)定受干預(yù)影響的產(chǎn)品（容器）應(yīng)從生產(chǎn)線上剔除，則在模擬試驗時也應(yīng)剔除，并應(yīng)在方案中明確規(guī)定剔除的數(shù)量和位置，模擬試驗時產(chǎn)生的這類產(chǎn)品（容器）無需培養(yǎng)。否則，應(yīng)納入培養(yǎng)計劃。如在干預(yù)發(fā)生前已經(jīng)密封，但在日常生產(chǎn)中按規(guī)定不需要剔除的產(chǎn)品，模擬試驗時也應(yīng)保留、培養(yǎng)并納入評估。記錄模擬試驗過程中的所有干預(yù)必須逐一記錄，用以評估干預(yù)對無菌保證的影響。糾正性干預(yù)記錄的內(nèi)容至少應(yīng)包括糾正性干預(yù)的類型、位置、次數(shù);固有干預(yù)記錄至少包括干預(yù)內(nèi)容、分類和發(fā)生頻率等信息。容器規(guī)格與容器閉封組合一條灌裝線上產(chǎn)品的容器有多種規(guī)格時，一般選擇應(yīng)對最小和最大尺寸的容器進行培養(yǎng)基灌裝模擬試驗。當(dāng)使用特定的容器/膠塞組合存在特別的操作問題，如卡瓶卡塞，即增加干預(yù)的情況，建議單獨對其進行工藝模擬驗證。通常采用透明的容器代替不透明或棕色的容器，以保證識別受污染模擬產(chǎn)品的能力。如一條灌裝線上存在多臺灌裝機，灌裝機之間的裝配（載）方式存在較大的差異，必須考慮分別驗證不同容器組合的必要性。培養(yǎng)前的容器檢查模擬試驗中完整性缺陷產(chǎn)品的剔除工藝應(yīng)采用日常生產(chǎn)的剔除工藝，除完整性缺陷的產(chǎn)品外，其他外觀缺陷、灌裝量異常的模擬產(chǎn)品也應(yīng)進行培養(yǎng)并用于評估污染率。培養(yǎng)條件培養(yǎng)前，應(yīng)對模擬灌裝產(chǎn)品進行顛倒、輕搖以使培養(yǎng)基接觸所有內(nèi)表面。培養(yǎng)時間至少14天，也可采用其它方法，但必須進行驗證證明其有效性。培養(yǎng)溫度應(yīng)有利于在環(huán)境或產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)的微生物的生長，一般采用先在20-25℃最少培養(yǎng)7天，然后在30-35℃的范圍繼續(xù)培養(yǎng)7天。也可采用單一的20-35℃的培養(yǎng)條件，但應(yīng)有相關(guān)的數(shù)據(jù)證明培養(yǎng)條件有利于微生物的生長。在整個培養(yǎng)期間應(yīng)連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。培養(yǎng)后的檢查培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)對所有模擬灌裝產(chǎn)品逐支進行無菌性檢查，通常應(yīng)在合適的照度下進行目視觀察，檢查人員應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)，并具有發(fā)現(xiàn)樣品中微生物高度生長和輕微生長的能力。在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)陽性樣品，應(yīng)做標記并立即移出培養(yǎng)箱（室）。如在培養(yǎng)后檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產(chǎn)品，應(yīng)進行適當(dāng)?shù)脑蛘{(diào)查并采取糾正措施。當(dāng)灌裝不透明的容器，允許將物料從單獨的容器擠到用于觀察的玻璃容器中，以確保有陽性能被觀察到或者購買透明物質(zhì)的特殊容器。計數(shù)與數(shù)額平衡為保證模擬試驗結(jié)果的準確性，應(yīng)對各個階段的模擬灌裝產(chǎn)品進行準確計數(shù)：包括灌裝、培養(yǎng)前檢查、培養(yǎng)后檢查的數(shù)量等。數(shù)量應(yīng)平衡，如發(fā)現(xiàn)不平衡，應(yīng)調(diào)查偏差的原因并確定本次模擬試驗是否有效。惰性氣體模擬試驗時，應(yīng)考慮培養(yǎng)基支持微生物生長的能力，可采用除菌過濾后的空氣代替惰性氣體，替代空氣應(yīng)通過與惰性氣體相同的管道系統(tǒng)以確保完全模擬惰性氣體的使用過程，如必須采用惰性氣體用以模擬厭氧性工藝（氧氣濃度低于0.1%），應(yīng)確認惰性氣體/培養(yǎng)基的組合支持相應(yīng)微生物的生長。環(huán)境及監(jiān)控通過有計劃的環(huán)境監(jiān)控證明模擬試驗過程中的環(huán)境符合要求。環(huán)境監(jiān)控方案設(shè)計應(yīng)基于風(fēng)險評估確定日常生產(chǎn)的環(huán)境監(jiān)控的各要素，如取樣點、取樣對象、取樣頻率、警戒和糾偏標準、實施方法等。評估環(huán)境監(jiān)測采樣帶來的風(fēng)險，在最差條件選擇時根據(jù)風(fēng)險評估結(jié)果選擇環(huán)境監(jiān)測需要模擬的程度。采樣人員無菌操作能力及環(huán)境監(jiān)測對無菌灌裝的影響都應(yīng)在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中充分評估。模擬試驗時應(yīng)采用與日常生產(chǎn)相同的環(huán)境監(jiān)控方案為基礎(chǔ)，并模擬生產(chǎn)狀況，包括采樣儀器、耗材的轉(zhuǎn)移、消毒等，任何異于日常環(huán)境監(jiān)控的情況都應(yīng)有說明和記錄。環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)處理環(huán)境（包括人員）監(jiān)控的數(shù)據(jù)結(jié)果用于評估模擬生產(chǎn)過程中的環(huán)境條件是否適宜于生產(chǎn)。當(dāng)模擬灌裝產(chǎn)品出現(xiàn)陽性結(jié)果時，環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)可用于進行根本原因的調(diào)查。模擬試驗時發(fā)生的環(huán)境偏差并不是模擬試驗成功的否決條件，是否通過試驗取決于調(diào)查的結(jié)果。即使最終決定在環(huán)境監(jiān)控結(jié)果超出糾偏標準時模擬灌裝試驗依然通過，也不意味著日常生產(chǎn)可以在同等環(huán)境偏差的條件下進行。其他應(yīng)該考慮的問題：儀器耗材傳遞進入灌裝的重要區(qū)域的采樣耗材采用最終滅菌的多層包裝，避免在傳遞時人員、轉(zhuǎn)移箱或推車等引入的交叉污染。除了避免采樣發(fā)生假陽性的結(jié)果，更應(yīng)避免傳遞樣品對生產(chǎn)區(qū)域造成的污染。在關(guān)鍵潔凈區(qū)使用的監(jiān)測設(shè)備應(yīng)專區(qū)使用，降低不同潔凈區(qū)傳遞過程中的帶來的污染，特別是生物制品類型產(chǎn)品，更應(yīng)考慮菌苗，毒素，細胞等交叉方面的問題。沉降菌沉降菌取樣覆蓋整個生產(chǎn)或試驗過程，值得注意的是過度頻繁采樣、更換平皿可能干擾生產(chǎn)且造成污染風(fēng)險。由于水分流失，或產(chǎn)品或消毒劑等帶來的抑菌風(fēng)險，沉降菌所用平皿的最長采樣時間需進行驗證以確保采樣后回收率仍能符合要求。如果采樣平皿如有較多冷凝水則不適合在重要區(qū)域使用。浮游菌與壓縮空氣的微生物采樣頭和防塵蓋進行雙層或三層包裝，用前進行高溫高壓滅菌，并確認儲存效期。微生物收集設(shè)備采樣的高風(fēng)速可能使平皿表面失水，在采樣條件下的平皿的回收率應(yīng)符合要求。環(huán)境檢測設(shè)備應(yīng)參照ISO標準進行采樣效率的驗證，以保證有效采樣，這也包含壓縮空氣釋放壓力的采樣。表面采樣接觸平皿采樣（包括人員采樣）：應(yīng)控制采樣時間及力度以保證采樣效果。根據(jù)生產(chǎn)環(huán)境消毒劑以及生產(chǎn)產(chǎn)品的抑菌性，采樣應(yīng)消除抑菌性并驗證中和和效果。采樣后立即消毒其表面。重要區(qū)域采樣點避免動物源性病毒污染。接觸平皿由于表面突出極易污染，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)區(qū)域的過程中，應(yīng)保證平皿蓋始終蓋緊。拭子采樣：拭子采樣需要對采樣效率進行驗證，拭子沾取的緩沖液以恰好潤濕為宜。根據(jù)生產(chǎn)環(huán)境消毒劑以及生產(chǎn)產(chǎn)品的抑菌性，采樣應(yīng)消除抑菌性并驗證中和和效果。采樣后盡快接種于培養(yǎng)基，避免長時間對菌造成的傷害，如有必要須驗證至接種最長間隔時間。塵埃粒子監(jiān)測：對A級潔凈區(qū)進行懸浮粒子監(jiān)測應(yīng)包括關(guān)鍵操作的全過程中，例如設(shè)備組裝操作過程。生產(chǎn)過程中的污染（如活生物、放射危害）可能損壞塵埃粒子計數(shù)器時，應(yīng)當(dāng)在設(shè)備調(diào)試操作和模擬操作期間進行測試。A級潔凈區(qū)監(jiān)測的頻率和取樣量，應(yīng)能及時發(fā)現(xiàn)所有人為干預(yù)、偶發(fā)事件及任何系統(tǒng)的損壞。人員因素：所有被授權(quán)在生產(chǎn)時進入無菌灌裝間的人員，包括觀察人員和維修人員，每年至少參加一次成功的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，方可參與正常生產(chǎn)的無菌操作，應(yīng)保留人員參與相關(guān)模擬試驗的記錄。模擬試驗方案的設(shè)計、實施及微生物污染調(diào)查應(yīng)有具備微生物方面專業(yè)知識的人員參與。不同劑型應(yīng)考慮的特殊因素凍干制劑：凍干制劑除了模擬灌裝過程外還應(yīng)模擬產(chǎn)品轉(zhuǎn)入凍干機凍干過程。冷凍培養(yǎng)基可能使捕獲的微生物受損，影響其生長，因此方案設(shè)計時應(yīng)給予考慮和評估；如影響明顯，則不推薦模擬冷凍過程。模擬凍干時，必須考慮真空度、維持時間及溫度。一定溫度下的真空度會使培養(yǎng)基沸騰，應(yīng)避免這種情況的發(fā)生。模擬凍干的維持時間有以下兩種模式，應(yīng)根據(jù)風(fēng)險評估預(yù)先確定采用何種模式?？s短維持時間模式：即培養(yǎng)基灌裝到容器中，半壓塞，將容器轉(zhuǎn)移至凍干機內(nèi)，在凍干機箱體內(nèi)部分抽真空，維持真空狀態(tài)的時間短于實際凍干周期，然后箱體破空，在凍干機內(nèi)完全壓塞。其優(yōu)點是關(guān)注風(fēng)險最大的裝載和壓塞操作，模擬凍干的時間較短。缺點是沒有維持與生產(chǎn)相同的工藝時間，可能導(dǎo)致污染風(fēng)險低于正常生產(chǎn)。抽真空后，通常應(yīng)采用空氣代替惰性氣體平衡腔室壓力，以利于TSB培養(yǎng)基支持微生物的生長。懸濁液懸濁液用于不溶性無菌產(chǎn)品，如一些抗生素、疫苗和皮質(zhì)激素。懸濁液灌裝的過程模擬應(yīng)包含懸濁液灌裝中使用的工藝及相應(yīng)的無菌操作。模擬程序應(yīng)該包括懸濁液生產(chǎn)的特征步驟，如賦形劑的滅菌，無菌粉末的加入和懸濁液的混合。與液體灌裝差別最大之處在于無菌條件下，無菌模擬介質(zhì)粉末加入到培養(yǎng)基罐體。懸濁液的灌裝操作與溶液制劑灌裝的方法類似，但由于懸濁液劑型配置的步驟，會相應(yīng)增加攪拌器、緩沖罐、管路以及相應(yīng)的無菌操作等特別之處，都應(yīng)在灌裝試驗中體現(xiàn)。軟膏/乳膏/乳液/凝膠無菌軟膏/乳膏/乳液/凝膠與溶液或懸濁液產(chǎn)品模擬灌裝類似，模擬過程涵蓋實際操作的工藝。盡量采用被模擬產(chǎn)品使用賦形劑制備劑型的工藝和無菌操作方式，可增加增稠劑使培養(yǎng)基特性而更接近產(chǎn)品灌裝特性，使培養(yǎng)基適于灌裝設(shè)備。無菌軟膏的灌裝通常在不同于小瓶、注射筒或安甑瓶的灌裝設(shè)備上進行。在設(shè)備設(shè)計或操作上的區(qū)別除外，灌裝的基本方法是類似于其他劑型的。灌裝培養(yǎng)后觀察對于軟膏/乳膏/乳液/凝膠產(chǎn)品的獨特之處-容器的檢查-模擬過程灌裝好的容器的轉(zhuǎn)運培養(yǎng)觀察可能需要特別注意。粉末制劑（無菌粉末分裝）無菌產(chǎn)品配方中加入其他無菌物質(zhì)的過程應(yīng)被模擬，例如混合、研磨、分裝以及其他工序在灌裝區(qū)域完成的又應(yīng)被模擬。粉末灌裝設(shè)備與液體灌裝設(shè)備差異很大，模擬時通常包含液體和粉末兩種灌裝操作。陰性對照如粉末模擬灌裝都用到無菌液體和無菌模擬介質(zhì)粉末兩種灌裝方式，可采用單獨灌裝一些液體容器作為陰性對照，以液體灌裝系統(tǒng)的污染源評價用于說明合并灌裝的污染。通常在粉末灌裝前先做液體灌裝，如果液體灌裝操作失敗，可取消此次灌裝。懸浮粒子粉末模擬灌裝試驗中模擬介質(zhì)的灌裝可能引起塵埃粒子檢測數(shù)據(jù)超標，可參考實際生產(chǎn)經(jīng)驗，記錄與分析粒子粒徑，分析粉末灌裝時是否會引起塵埃粒子監(jiān)測數(shù)據(jù)浮動。模擬介質(zhì)/賦型劑模擬灌裝中有時會用到無菌粉末代替產(chǎn)品作為模擬介質(zhì)?；蚴悄M特殊劑型懸濁液，軟膏/乳膏/乳液/凝膠時，為了適應(yīng)灌裝設(shè)備以及內(nèi)包裝，需要加入賦形劑，模擬介質(zhì)及賦形劑的選擇基本要求是流動性類似于被模擬產(chǎn)品，無菌且無抑菌性，易溶解，常用模擬介質(zhì)有聚乙二醇，乳糖，甘露醇，凡士林等。在使用模擬介質(zhì)及賦形劑前，應(yīng)對其適用性進行確認，包括無菌試驗、抑菌試驗、溶解度試驗（例如：5mlTSB甘露醇不宜超過0.3g粉末）以及溶解時間。模擬介質(zhì)及賦形劑的包裝形式，應(yīng)盡量與被模擬產(chǎn)品的無菌原料一致，表面消毒后傳遞至灌裝區(qū)域。儲存條件、有效期等應(yīng)按照模擬介質(zhì)及賦形劑供應(yīng)商要求執(zhí)行。其他劑型其它一些不常見的劑型，如吸入劑、氣霧劑和植入劑等，可參考本指南提供的設(shè)計理念，以滿足這些劑型的具體要求。方案的實施應(yīng)依據(jù)方案建立詳細的用于實施模擬試驗的批記錄，批記錄的格式應(yīng)與產(chǎn)品的批生產(chǎn)記錄格式相同，包括所有與試驗相關(guān)信息和操作人員確認簽字及原始記錄等。方案及批記錄應(yīng)得到質(zhì)量管理部門的批準，驗證實施過程除了嚴格按照方案及批記錄的要求執(zhí)行外，還應(yīng)關(guān)注以下幾方面的因素：產(chǎn)品容器、膠塞、接觸產(chǎn)品的設(shè)備和部件應(yīng)按SOP準備。為了便于偏差調(diào)查，應(yīng)對完成密封后的模擬產(chǎn)品包裝單元進行編號，每一組編號應(yīng)能追溯到培養(yǎng)基的灌裝時間及相應(yīng)的操作。應(yīng)觀察或錄像模擬生產(chǎn)的全過程，以確保各種干預(yù)操作得到適當(dāng)完成。應(yīng)對模擬灌裝試驗過程進行相應(yīng)的過程監(jiān)控，確保過程符合方案和批記錄的要求。應(yīng)詳細準確記錄模擬試驗中實施的各種干預(yù)。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗在生產(chǎn)線上實施完成后，應(yīng)對所有與培養(yǎng)接觸的設(shè)備、容器、部件及環(huán)境進行有效清潔，防止培養(yǎng)基殘留造成微生物滋生。模擬試驗的結(jié)果、評估和結(jié)論應(yīng)形成書面報告并經(jīng)質(zhì)量管理部門批準，根據(jù)實施記錄，為通過模擬驗證的人員頒發(fā)確認書并規(guī)定有效期限。.可接受標準與結(jié)果判斷培養(yǎng)基模擬灌裝試驗可接受標準應(yīng)當(dāng)遵循現(xiàn)行GMP無菌附錄中的有關(guān)規(guī)定。培養(yǎng)基通常比實際產(chǎn)品更有利于微生物的生長，因此，可接受標準中允許存在低概率的微生物污染是科學(xué)合理的。企業(yè)應(yīng)制定符合法規(guī)的內(nèi)控標準，在制定內(nèi)控標準時，應(yīng)考慮以下幾方面因素：模擬試驗應(yīng)和實際生產(chǎn)盡可能接近；應(yīng)基于風(fēng)險評估的原則制定科學(xué)合理的內(nèi)控限度；出現(xiàn)任何陽性均應(yīng)進行徹底、規(guī)范的調(diào)查;在科學(xué)評估的基礎(chǔ)上采取適當(dāng)?shù)募m偏措施。采用良好設(shè)計且受控的無菌灌裝系統(tǒng)，特別是自動化的系統(tǒng)如吹灌封、隔離器等，污染率可大幅度降低。即使每次灌裝的污染率都符合可接受標準，如果連續(xù)進行的模擬灌裝批中反復(fù)出現(xiàn)陽性意味著無菌生產(chǎn)工藝存在系統(tǒng)性問題，必須得到有效解決。.污染調(diào)查及糾正措施不管批量有多大，只要無菌工藝驗證存在污染，意味著無菌保證可能存在問題，發(fā)現(xiàn)任何污染樣品均應(yīng)進行調(diào)查，應(yīng)利用一切可能的方法調(diào)查污染的來源，污染調(diào)查流程及方法應(yīng)在方案中明確規(guī)定。模擬灌裝中出現(xiàn)任何數(shù)量的污染都必須視為偏差并徹底調(diào)查。分離到的污染微生物應(yīng)鑒別到種屬，鑒別結(jié)果應(yīng)與本次試驗過程所有微生物檢測結(jié)果及企業(yè)微生物菌種庫進行對比，為查找污染途徑提供可能的依據(jù)。此外，也可借助文獻檢索來查找污染途徑。可通過查看培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的錄像或現(xiàn)場記錄，以還原模擬試驗過程中人員操作行為、干預(yù)及設(shè)備運行等真實狀況，有利于分析問題的來源。應(yīng)對培養(yǎng)基模擬灌裝試驗實施過程相關(guān)的所有記錄進行詳細調(diào)查，并關(guān)注各種偏差、驗證、變更等，所有偏離原始驗證狀態(tài)情況均應(yīng)逐一評估并說明。檢查所有相關(guān)人員的培訓(xùn)和資質(zhì)確認記錄。調(diào)查的關(guān)鍵是找到污染的來源，結(jié)合調(diào)查需要，必要時應(yīng)制定完整的取樣和微生物鑒別計劃，調(diào)查過程應(yīng)有記錄并歸檔。如調(diào)查找到指定的原因，應(yīng)制定糾正預(yù)防措施，并再次進行模擬試驗，以證明措施的有效性。如調(diào)查無指定原因，應(yīng)對生產(chǎn)工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評估，在現(xiàn)有模擬試驗方案的基礎(chǔ)上增加取樣點和頻次，以獲得更多數(shù)據(jù)支持原因調(diào)查，同時應(yīng)適當(dāng)增加試驗批次，以證明無菌生產(chǎn)工藝具備持續(xù)、可靠的生產(chǎn)能力。調(diào)查結(jié)果應(yīng)形成書面報告并得到質(zhì)量管理部門的批準。9.試驗周期及再驗證新建無菌生產(chǎn)線，在正式投產(chǎn)之前，每班次應(yīng)當(dāng)連續(xù)進行