感染性疾病及免疫學(xué)檢測(cè)

傳染病：是病原體以某種方式進(jìn)入到人體后，并在人體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，釋放毒素或?qū)е聶C(jī)體內(nèi)微生態(tài)平衡失調(diào)，給人體的組織和器官造成一定的損傷而引起的疾病。目前一頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)病原體易感人群目前二頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)免疫學(xué)檢驗(yàn)主要用于：輔助診斷及鑒別診斷判斷療效及預(yù)后流行病學(xué)調(diào)查目前三頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）金標(biāo)法（試紙條、試紙板）化學(xué)發(fā)光法1.電化學(xué)發(fā)光（羅氏）2.微粒子化學(xué)發(fā)光（雅培）免疫印跡法(Westernblotting)

凝集反應(yīng)（梅毒檢測(cè))目前四頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）

是一類(lèi)常用的免疫酶技術(shù)。是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行。常用的酶：辣根過(guò)氧化物酶(HRP)

堿性磷酸酶（AP）。目前五頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)基本步驟包被封閉孵育洗滌顯色結(jié)果測(cè)定

缺點(diǎn)：1只是診斷的輔助手段，特異性和靈敏性有待提高。

2操作過(guò)程有些繁瑣，反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不能一蹴而就。目前六頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)金標(biāo)法原理：金標(biāo)層析法采用雙抗原夾心法免疫測(cè)定原理，選擇經(jīng)純化的基因工程制備的抗原，分別作為包被抗原和膠體金結(jié)合抗原。由于層析作用反應(yīng)復(fù)合物沿硝酸纖維膜向前移動(dòng)，當(dāng)遇到包被抗原時(shí)，形成紅色沉淀線。在包被膜上還有一條質(zhì)控線對(duì)照，故當(dāng)有兩條紅線時(shí)判為陽(yáng)性，只有一條紅線時(shí)，判為陰性。目前七頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)免疫印跡法免疫印跡法(Westernblotting)是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合的雜交技術(shù)。免疫印跡法具有分析容量大、敏感度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是檢測(cè)蛋白質(zhì)特性、表達(dá)與分布的一種最常用的方法。（病毒學(xué)檢測(cè)主要用于檢測(cè)HIV抗原確證試驗(yàn)）目前八頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)是指顆?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合反應(yīng)出現(xiàn)的可見(jiàn)性現(xiàn)象。顆?？乖缤暾募?xì)菌、紅細(xì)胞等與相應(yīng)抗體相混合，在一定條件下出現(xiàn)凝集。目前九頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析

chemiluminescenceimmunoassay（CLIA）CLIA是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性。目前十頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)CLIA優(yōu)越性高度敏感，可達(dá)pg／ml或pmol水平；特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，CV＜5％。測(cè)定范圍寬，可達(dá)7個(gè)數(shù)量級(jí)。試劑穩(wěn)定，無(wú)毒害，無(wú)污染，有效期長(zhǎng)，達(dá)數(shù)月甚至數(shù)年。操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，易于自動(dòng)化。在對(duì)環(huán)保很重視的國(guó)家，CLIA成了取代RIA的首選方法。目前十一頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)常見(jiàn)術(shù)前檢測(cè)甲型肝炎抗體（抗HAVIgM）乙肝五項(xiàng)丙型肝炎抗體（抗HCV)梅毒螺旋體抗體人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體（抗HIV）目前十二頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)病毒性肝炎

ViralHepatitis是由一組嗜肝病毒引起的，以肝臟炎癥和壞死病變?yōu)橹鞯囊环N傳染病。主要表現(xiàn)為明顯的消化道癥狀、全身疲乏無(wú)力，肝臟腫大。肝功能異常，部分病例出現(xiàn)黃疸。目前十三頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)甲型病毒性肝炎（HAV）HAV屬小RNA病毒，為正單鏈RNA病毒。HAV主要經(jīng)糞-口途徑傳播。潛伏期平均28天。HAV抵抗力較強(qiáng)，60℃加熱10-12h后仍具有感染性，85℃加熱立即滅活，對(duì)乙醚、氯仿及PH為3的酸性環(huán)境有抵抗力。目前十四頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HAVIgM：近期感染HAV,發(fā)病2周后陽(yáng)性率為100%，3個(gè)月后轉(zhuǎn)陰。早期診斷。IgG：急性感染后6個(gè)月達(dá)高峰，然后逐漸下降，可終身存在。既往感染HAVRNA：早期診斷的特異性指標(biāo)目前十五頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBV(hepatitisBvirus）乙型肝炎病毒目前十六頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)我國(guó)流行現(xiàn)狀現(xiàn)有HBV感染者約1.6億目前十七頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBV顆粒管型小球型大球型目前十八頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBV特點(diǎn)HBsAg與HBsAbHBeAg與HBeAbHBcAg與HBcAb有包膜雙股DNA病毒三組Ag-Ab系統(tǒng)：目前十九頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBs-Ag是感染的標(biāo)志見(jiàn)于體液和分泌物中，也可見(jiàn)于唾液、精液、乳汁中介導(dǎo)病毒結(jié)合肝細(xì)胞HBs-Ab3-6個(gè)月產(chǎn)生有抵抗力的標(biāo)志阻斷病毒結(jié)合肝細(xì)胞目前二十頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBeAg病毒復(fù)制的標(biāo)志，傳染性強(qiáng)病毒合成后釋放到血液中治療的參考指標(biāo)HBeAb病毒復(fù)制減少的標(biāo)志，傳染性弱要先于HBsAb出現(xiàn)目前二十一頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBcAg存在于病毒核心，不釋放至血液抗原性強(qiáng)HBcAb出現(xiàn)早，消退晚IgM:近期感染HBVIgG:既往感染HBV目前二十二頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)臨床組合模式目前二十三頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc臨床意義1+-+-+俗稱(chēng)“大三陽(yáng)”。急性或慢性乙肝；病毒在復(fù)制，傳染性強(qiáng)。2+--++俗稱(chēng)“小三陽(yáng)”。急性或慢性乙肝；傳染性低。這種模式在慢性無(wú)癥狀攜帶者以及急性感染人群中較常見(jiàn)，病毒復(fù)制可能仍在進(jìn)行。3+---+急性或慢性乙肝感染，有傳染性4---++既往感染5----+處于HBsAg和HBeAg消失與Anti-HBe和Anti-HBs出現(xiàn)之間的一個(gè)缺口時(shí)期；既往感染6-+--+感染恢復(fù)期；既往感染，有免疫力7-+-++感染恢復(fù)期；既往感染8-+---主動(dòng)免疫9-----未感染HBV,屬易感者目前二十四頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)10++-++少見(jiàn)的模式11+----12+-+--13-++-+14+-+++模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc臨床意義目前二十五頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)乙肝五項(xiàng)少見(jiàn)模式分析單一HBsAg：

主要見(jiàn)于急性HBV感染的最早期，一般隨之出現(xiàn)HBeAg和IgM的Anti-HBc。通常的慢性HBV感染中，HBsAg和Anti-HBc并存者約占95%，HBV慢性感染中不出現(xiàn)Anti-HBc是少見(jiàn)的。單一的HBsAg的異常表現(xiàn)主要由于Anti-HBc的缺失。目前二十六頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBsAg和Anti-HBs并存：在HBV感染恢復(fù)期中約有3%的個(gè)例可同時(shí)檢出HBsAg和Anti-HBs,然后HBsAg消失而Anti-HBs水平逐漸升高。在慢性HBV感染者中約3%-5%兩者共存，出現(xiàn)Anti-HBs并不表明HBsAg的清除和感染的恢復(fù)，可能由于：1.前后感染兩種亞型HBV，或HBsAg與其抗體之間僅有低親和性反應(yīng)；2.S基因變異，其編碼的HBsAg抗原性改變，原型Anti-HBs不能將其清除；3.α干擾素治療中出現(xiàn)Anti-HBs血清轉(zhuǎn)換，也因S基因的變異，而未能清除HBsAg。4.HBV疫苗接種者中也有少數(shù)個(gè)例雖有正常的Anti-HBs應(yīng)答，但仍能感染α決定簇變異的免疫逃逸病毒株，從而出現(xiàn)與HBsAg共存的現(xiàn)象。目前二十七頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HBeAg和Anti-HBe并存：一般是處于乙肝e抗原和e抗體轉(zhuǎn)換時(shí)期，e抗原和e抗體以抗原抗體復(fù)合物的狀態(tài)共存。Anti-HBe試劑檢測(cè)時(shí)，血樣中的抗原抗體復(fù)合物同樣可以結(jié)合至包被板上，起到了競(jìng)爭(zhēng)效果。目前二十八頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)呈世界性分布極易慢性化，與肝硬化、原發(fā)性肝癌關(guān)系密切HCV（hepatitisCvirus）丙型肝炎病毒目前二十九頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HCV特點(diǎn)有包膜的單股正鏈RNA病毒抗HCV抗體非保護(hù)性抗體輸血和非腸道途徑傳播主要檢測(cè)IgG目前三十頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)丙型病毒性肝炎(HCV)臨床意義HCV是輸血后肝炎和散發(fā)性非甲非乙型肝炎的主要病原。HCV感染后可導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌等多種肝臟疾病?？笻CV陽(yáng)性而血清中沒(méi)有HCVRNA提示既往感染。目前三十一頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)檢測(cè)方法

常用檢測(cè)方法為ELISA法，金標(biāo)記免疫層析法和化學(xué)發(fā)光法。目前三十二頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)檢測(cè)方法：ELISA化學(xué)發(fā)光目前三十三頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HIV(HumanImmunodeficiencyVirus)

人獲得性免疫缺陷病毒目前三十四頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)我國(guó)歷年艾滋病病毒感染者和病人數(shù)目前三十五頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HIV的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)HIV-1和HIV-2逆轉(zhuǎn)錄病毒兩股相同的正鏈RNA目前三十六頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)CD4抗原輔助受體CD4+細(xì)胞HIVgp120結(jié)合CD4/輔助受體目前三十七頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)病毒經(jīng)黏膜或皮膚破損進(jìn)入體內(nèi)感染黏膜或皮膚層樹(shù)突狀細(xì)胞病毒于24小時(shí)內(nèi)在樹(shù)突狀細(xì)胞繁殖病毒于24-28小時(shí)到達(dá)局部淋巴結(jié)病毒于5天內(nèi)出現(xiàn)在外周血液中每個(gè)感染細(xì)胞可產(chǎn)生5000個(gè)病毒顆粒，每人每天可產(chǎn)1010病毒。目前三十八頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)HIV的檢測(cè)篩選試驗(yàn)：敏感性高，如ELISA，膠體金標(biāo)記層析法。確診試驗(yàn)：特異性高，如蛋白印跡試驗(yàn)和IFA抗體最早在感染后二周，最晚三個(gè)月會(huì)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性初篩試驗(yàn)2次陽(yáng)性，再進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)?zāi)壳叭彭?yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)樣品初篩檢測(cè)陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)篩查試劑復(fù)查原有試劑加另一種篩選試劑均陽(yáng)性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)報(bào)告陰性目前四十頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)結(jié)果判斷確診試驗(yàn)陽(yáng)性，有臨床癥狀，診斷為AIDS確診試驗(yàn)陽(yáng)性，無(wú)臨床癥狀，診斷為HIV感染者確診試驗(yàn)陰性，但初篩試驗(yàn)陽(yáng)性或有臨床癥狀，3個(gè)月后復(fù)查目前四十一頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)梅毒

syphilis

是梅毒螺旋體引起的一種慢性傳染病，本病的特點(diǎn)是病程的長(zhǎng)期性和潛匿性，病原體可侵犯任何器官，臨床表現(xiàn)出各種不同的癥狀。目前四十二頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)三個(gè)階段

一期梅毒：硬性下疳；二期梅毒：梅毒疹；三期梅毒：累及心、肝、神經(jīng)系統(tǒng)、骨等。目前四十三頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)后天性梅毒（獲得性）：95%性交傳播，少數(shù)因輸血、接吻、醫(yī)務(wù)人員不慎受染等直接接觸傳播。

先天性梅毒（胎傳梅毒）：梅毒螺旋體可自患病母體的血液經(jīng)胎盤(pán)傳給胎兒傳播方式目前四十四頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗(yàn)及療效觀察。可以分為以下四種試驗(yàn)，原理基本相同：

1、性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL)

：由于試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，故而國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室很少采用。但VDRL是唯一可用于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學(xué)方法

2、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)：在特制的紙片上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn)凝集，用肉眼可觀察結(jié)果。

3、甲苯胺紅試驗(yàn)（TRUST)：在試劑中加入甲苯胺紅代替炭粉顆粒，使結(jié)果更易于觀察。

4、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR)梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（一）目前四十五頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷滴度：出現(xiàn)凝集反應(yīng)的血清最高稀釋倍數(shù)。目前四十六頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的缺陷：

1、特異性：由于在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、結(jié)締組織病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以此類(lèi)試驗(yàn)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng).

2、敏感性：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)有時(shí)出現(xiàn)弱陽(yáng)性或陰性結(jié)果，而臨床上又像二期梅毒，此時(shí)應(yīng)將此血清稀釋后做定量試驗(yàn)，如出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，則為抗體過(guò)量引起的前帶現(xiàn)象。1－2％二期梅毒病人可出現(xiàn)此現(xiàn)象而發(fā)生梅毒血清假陰性反應(yīng)。此外，由于感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應(yīng)素又可能轉(zhuǎn)陰，因此這類(lèi)試驗(yàn)不適于一、三期梅毒，對(duì)隱性梅毒和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此此類(lèi)試驗(yàn)做梅毒初篩時(shí)，存在一定數(shù)量的漏檢.非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)：

1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)表現(xiàn)為滴度隨療程逐漸下降，故可以作為療效觀察的指標(biāo)

2、此類(lèi)方法價(jià)格低廉梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（二）目前四十七頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：用梅毒螺旋體作為抗原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法：

1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS)2、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）

3、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA)4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）

5、梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RT）梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（三）目前四十八頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）原理：TPPA的原理與TPHA基本相同，它以人工合成的惰性明膠顆粒代替TPHA試驗(yàn)的紅細(xì)胞作為載體，是TPHA的升級(jí)產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：1、試劑穩(wěn)定，批間差小

2、結(jié)果判讀更為清晰明確

3、敏感性和特異性較TPHA進(jìn)一步提高

4、通過(guò)了國(guó)家的批批檢不足：結(jié)果判定主觀，較難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（四）目前四十九頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)賽樂(lè)迪亞（Serodia）TPPA

梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗(yàn)?zāi)壳拔迨?yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)目前五十一頁(yè)\總數(shù)五十五頁(yè)\編于十三點(diǎn)梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（TP-ELISA）原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢血清以及酶標(biāo)抗原，形成雙抗原夾心，同時(shí)檢測(cè)

IgG、IgM抗體。少數(shù)試劑采用間接法，檢測(cè)IgG

優(yōu)點(diǎn)：1、敏感性和特異性較高

2、價(jià)格較低，適合于對(duì)大量樣品的篩查不足：各家ELISA試劑盒采用的抗原和工藝不同，使測(cè)定的敏感性和特異性產(chǎn)生較大的差異，臨床實(shí)驗(yàn)