我的細胞融合與單克隆抗體

學習目標1、掌握動物細胞融合與植物體細胞雜

交的區(qū)別與聯(lián)系。2、簡述動物細胞融合和單克隆抗體制

備的過程。3、了解單克隆抗體在醫(yī)學實踐中的應(yīng)

用，并能說出應(yīng)用實例。目前一頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點自學指導怎樣才能順利達到上述目標？要靠大家緊張有效的自學。請同學們認真閱讀教材P52-54，思考下列問題，8分鐘后進行檢測。比一比，看誰知識掌握得最牢固.目前二頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點1、動物細胞融合的概念是什么？2、動物細胞融合的原理是什么？誘導動物細胞融合的方法有哪些？3、抗體是由何種細胞產(chǎn)生的？4、一個Ｂ淋巴細胞(漿細胞)能分泌多種抗

體嗎？5、融合后培養(yǎng)液中有幾種細胞？6、怎樣篩選出雜交瘤細胞，雜交瘤細胞有

何優(yōu)點？目前三頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點先學（一）學生認真閱讀教材P52—54，獨立完成上述思考題（教師巡視，保證每位學生都集中精力)(時間8分鐘）（二）提問：隨機點名學生回答，如有錯誤，

教師引導其他學生更正、討論。（三）檢測、板演1.出示檢測題2.讓三名學生板演，其他學生做到筆記本上，教師巡視，搜集檢測中出現(xiàn)的錯誤。目前四頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點1.動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A．動物細胞融合 B．胚胎移植C．動物細胞培養(yǎng)D．核移植２．在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的B．雜種細胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導融合的手段相同CB目前五頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異B．具有更強的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力強4、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）

A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞

B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞

D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細胞DA目前六頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點5、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（）①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞

A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C目前七頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點后教（一）更正：

1.教師公布答案、學生自改。2.自己尋找錯誤原因或同桌之間小聲討論（二）點評：

1.對于學生討論后不能解決的問題，教師進行有針對性的分析和講解2.評檢測題，點撥知識點目前八頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點融合的原生質(zhì)體AB再生細胞壁雜種細胞AB雜種植株脫分化愈傷組織再分化原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A去壁人工誘導植物細胞A植物細胞B回顧植物體細胞雜交過程去壁目前九頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點一、動物細胞融合是指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。也稱細胞雜交⑴自然發(fā)生：受精卵⑵人工誘導：利用誘導劑誘導動物細胞融合雜交細胞：融合后形成的具有兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞。概念：目前十頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點細胞膜的流動性原理：誘導融合方法：物理法:化學法:生物法：滅活的病毒離心、振動、電激等聚乙二醇（PEG）目前十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點仙臺病毒紫外線滅活喪失感染活性（不感染細胞）保留融合活性（誘導細胞融合）①什么是病毒的滅活？滅活是指用物理或化學手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。②滅活病毒誘導細胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。目前十二頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜具有一定的流動性）目前十三頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點正在融合的淋巴細胞與骨髓瘤細胞正在融合的雞血細胞目前十四頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點融合過程：把兩個不同的動物細胞放在一起，用滅活的病毒處理細胞，它們先發(fā)生質(zhì)融合，再出現(xiàn)核融合，進而形成雜交細胞。融合后的雜交細胞經(jīng)過有絲分裂后仍能形成兩個完整的雜交細胞目前十五頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點動物細胞融合技術(shù)的意義打破生殖隔離，使遠緣雜交成為可能廣泛應(yīng)用多個學科領(lǐng)域（細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種的培育）重要用途：制備單克隆抗體。目前十六頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點二、單克隆抗體傳統(tǒng)血清抗體的制備：方法：向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，然后從動物血清中分離所需要的抗體。純度低；產(chǎn)量低、特異性差傳統(tǒng)血清抗體的制備的缺陷：目前十七頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點使用相應(yīng)的抗體檢測乙肝病毒——抗原抗體生成的原理

醫(yī)院一般檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒的方法乙肝病毒模式圖

凡能夠引起機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原。⑴什么是抗原？例如花粉、病菌、病毒等。有時自身的組織或細胞也會成為抗原，如癌細胞等。目前十八頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點抗原決定簇：抗原表面具有的某些特定的化學基團，能決定抗原特異性，是免疫細胞識別抗原的重要依據(jù)。各種抗原的決定簇數(shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。目前十九頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點

⑵什么是抗體？由何種細胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?起何作用？

當機體受到抗原刺激劑后由效應(yīng)B細胞（漿細胞）產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白——抗體。

抗體分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。目前二十頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點抗體與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合目前二十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點

一種抗原有多種不同的決定簇,刺激的是多種B細胞,作用于不同的B細胞后,會產(chǎn)生多種抗體目前二十二頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點血清抗體（也稱多克隆抗體）由血清中提取的抗體是由不同淋巴細胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達百萬種以上，稱為多克隆抗體。特點：產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏。抗原不純抗體不純

抗原動物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體目前二十三頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點

抗體

抗原應(yīng)答抗體的不純性

動物細胞受到抗原刺激,引起免疫反應(yīng)產(chǎn)生的球蛋白.不是自己的而又能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原.一種抗原有多種不同的決定簇,刺激的是多種B細胞,作用于不同的B細胞后,會產(chǎn)生多種抗體,這是多克隆的,故不純!制備單克隆抗體的思路抗原

B細胞漿細胞抗體

刺激目前二十四頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點怎么才能得到純的抗體?光純還不行,還要大量.怎么辦?但，有問題:找，什么細胞能無限繁殖呢?思路就出來了:要想獲單一的純抗體,就必須從一個B細胞出發(fā).每一個B淋巴細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一，特異性強的抗體。讓B細胞大量繁殖(克隆)就可以產(chǎn)生大量抗體了.B細胞是不能無限繁殖的.怎么辦?癌!只有癌細胞.但它不能產(chǎn)生抗體.癌細胞能無限繁殖,但不能產(chǎn)生抗體.B細胞能產(chǎn)生抗體,但不能大量繁殖.融合呀!只要將兩個細胞融合即可互補.目前二十五頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點⑵如何誘導融合？

加入聚乙二醇（PEG）⑴如何得到B淋巴細胞？制備單克隆抗體的過程目前二十六頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點⑶細胞兩兩融合后，有哪些類型？B-BB-瘤(雜交瘤細胞)瘤-瘤⑷如何篩選出雜交瘤細胞？

單克隆抗體制備過程中，總共有兩次篩選，第一次篩選出雜交瘤細胞，第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，兩次篩選的原理和方法是不相同的。

①首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞目前二十七頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點①細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。②人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。你想到篩選雜交瘤細胞的方案了么？

小資料：目前二十八頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細胞！加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞因為可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖。目前二十九頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點通常采用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔細胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，再由這些單細胞克隆生長，然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。②再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞

在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。目前三十頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點(5)如何得到大量的單克隆抗體？

體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體——化學性質(zhì)單一、特異性強目前三十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點單克隆抗體篩選雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內(nèi)細胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細胞誘導細胞融合特異性雜交瘤細胞雜交瘤細胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過程：特點：既能產(chǎn)生抗體又能大量繁殖特點：特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原免疫目前三十二頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。目前三十三頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點單克隆抗體制備過程目前三十四頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點4、單抗隆抗體的應(yīng)用①作為診斷試劑②定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病

用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強，具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。③用于治療疾病和運載藥物

利用同位素標記單抗，在特定組織成像

制成生物導彈，將藥物定向帶到癌細胞所在的位置，在原位殺死癌細胞，療效高、副作用小。單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并可以大量制備。目前三十五頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點目前三十六頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點

目前三十七頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點⑵用于治療疾病和運載藥物①特異性強、靈敏度高

生物導彈——單克隆抗體＋抗癌藥物

②療效高、毒副作用小結(jié)合同位素的單抗-----生物導彈目前三十八頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點結(jié)合同位素的單抗-----生物導彈單抗放射性同位素目前三十九頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點制備單克隆抗體1、常規(guī)抗體獲得的方法及其特點2、單克隆抗體制備的原理◆利用

產(chǎn)生特異性抗體的功能。◆利用

無限增殖的特性?！衾?/p>

技術(shù)將兩種細胞融合獲得雜交瘤細胞。◆利用

技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞。B淋巴細胞骨髓瘤細胞動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)3、單克隆抗體的制備4、單克隆抗體的應(yīng)用目前四十頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點項目動物細胞融合植物體細胞雜交原理細胞膜的流動性細胞膜的流動性和植物細胞的全能性融合前提分散成單個細胞去除細胞壁誘導方法聚乙二醇、離心、振動、電激、滅活病毒聚乙二醇、離心、振動、電激、結(jié)果獲得雜種細胞或細胞產(chǎn)物獲得雜種植株用途制備單克隆抗體培育作物新品種意義使遠緣雜交成為可能克服遠緣雜交障礙目前四十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十八點⑶圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________

。B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

1.下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌的抗體實驗方案⑴該實驗方案的目是