密封完好性試驗

密封完好性試驗第1頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一目錄

一、概述二、試驗準備三、試驗步驟四、再驗證周期第2頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一概述第3頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一第4頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一一、概述1、試驗目的：用微生物侵入試驗對凍干粉針劑車間軋蓋密封系統(tǒng)進行挑戰(zhàn)性試驗，以確認軋蓋后容器密封系統(tǒng)的完好性。2、試驗概述：取西林瓶灌裝入已滅菌培養(yǎng)基，在正常生產線上抽真空、壓塞、軋蓋。此后，將容器密封面浸入高濃度運動性菌液中，取出并檢查是否有微生物侵入，以確認容器密封系統(tǒng)的完好性。同時，須做陽性對照試驗，確認培養(yǎng)基的促菌生長能力。第5頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一試驗準備試驗準備洗瓶膠塞處理培養(yǎng)基菌懸液第6頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一二、試驗準備

批量：1000瓶/批1、洗瓶:清洗西林瓶1100只，經305℃干熱滅菌12分鐘后送至灌裝間備用。2、膠塞處理:清洗膠塞1100只，經121℃濕熱滅菌20分鐘后備用。第7頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一

3.1預先對配制、灌裝系統(tǒng)按照凍干粉針劑無菌操

作要求進行清潔、滅菌。

3.2按照培養(yǎng)基生產廠商要求，每批按TSB（胰

酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基）32.3g，加1L注射用水

的比例進行配制，加熱溶解并標定至4.5L，置

于滅菌柜中用純蒸汽121℃滅菌20min。二、試驗準備

3、配制培養(yǎng)基:第8頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一

二、試驗準備

3.3將滅菌后的培養(yǎng)基（TSB配制液）通過

未裝濾膜及濾芯的過濾系統(tǒng)，在灌裝機

的數(shù)控器上調節(jié)好裝量（3.5ml）進行灌

裝半加塞。3.4將灌裝半加塞的培養(yǎng)基在百級層流保護下轉移至凍干機內抽真空，結束后全壓塞、出箱、軋蓋。第9頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一4、制備微生物菌懸液：

4.1從銅綠假單胞菌（ATCC9027）的新鮮斜面上取一整環(huán)培養(yǎng)物，分別接入含6ml無菌培養(yǎng)基的試管中，在30～35℃下培養(yǎng)18～24h。

4.2將每管的培養(yǎng)物分別轉入含600ml相同培養(yǎng)基的容器內，于30~35℃下培養(yǎng)18～24h。在培養(yǎng)結束時，能明顯見容器內培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁。

4.3在微生物侵入試驗開始時，所用菌懸液濃度（活菌數(shù)）必須達到1×106CFU/ml。

二、試驗準備

第10頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一試驗步驟營養(yǎng)試驗微生物侵入試驗陽性對照實驗微生物侵入試驗后營養(yǎng)試驗第11頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一三、試驗步驟1.1從1000瓶培養(yǎng)基中取150瓶作為本次試驗的試樣品。1.2用剪刀輕輕從斜側面去除至少50瓶試樣品的整個鋁蓋（注意不要破壞其密封口，將去鋁蓋時不慎損壞容器密封性的所有試樣品剔除），另取80瓶帶蓋試樣品，將每一試樣品倒轉，使培養(yǎng)基與西林瓶內表面及膠塞充分接觸，在30～35℃豎立倒置培養(yǎng)14天。1、試驗樣品的制備:第12頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一三、試驗步驟1.3在培養(yǎng)期內，當試驗中發(fā)現(xiàn)任何帶蓋試樣品長菌時，則試驗無效，須棄去全部試樣品，重新從頭開始試驗。

第13頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一2.1所有試樣品培養(yǎng)14天均不長菌時，從上述1.2

試樣品中隨機取20個帶蓋試樣品，每個試樣

品內接種100CFU銅綠假單胞菌。在30～35℃

下培養(yǎng)7天，或培養(yǎng)至所有試樣品都呈陽性結

果。三、試驗步驟2、確認培養(yǎng)基促菌生長能力―營養(yǎng)試驗：第14頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一2.1.1若7天內，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長良好，則容器內培養(yǎng)基的促菌生長能力可判為合格。使用革蘭染色后，并置于紫外燈下，培養(yǎng)基呈藍綠色熒光，則確認試樣品容器內生長的菌為接入的銅綠假單胞菌，即為陽性。2.1.2若7天內，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長條件不好或經鑒別后受其它菌種污染，則試驗失敗，需重新作營養(yǎng)試驗。三、試驗步驟第15頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一3、微生物侵入試驗操作步驟:

微生物培養(yǎng)及侵入試驗應在不影響生產環(huán)境的地方（中心化驗室陽性室）進行。三、試驗步驟第16頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一3.1將新鮮的銅綠假單胞菌（ATCC9027）的菌懸液倒入適當?shù)娜萜鲀龋迷嚬芗芄潭ㄔ嚇悠?。三、試驗步驟3.2從上述1.2試樣品中再取50只帶蓋試樣品為A組，另取25個去蓋試樣品為B組，均倒置于菌懸液中,使試樣容器內的培養(yǎng)基充分接觸封口內表面，試樣品的頸部及封口的外表面應完全浸泡在菌懸液中（如下圖1所示）。第17頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一圖1微生物挑戰(zhàn)試驗示意圖三、試驗步驟第18頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一3.3將A組和B組試樣品在菌懸液中持續(xù)浸泡約4h后，取出試樣品，擦干試樣品容器外殘余的菌懸液，其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒五分鐘（注意不要破壞其密封口）。三、試驗步驟3.4從1.2試樣品中另取有蓋和去蓋的培養(yǎng)基各兩個，做陽性對照。陽性對照試樣品不經菌懸液浸泡，其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒五分鐘后，接種10～100CFU銅綠假單胞菌，按營養(yǎng)試驗的步驟進行陽性對照試驗。第19頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一3.5將消毒后的試樣品放入塑料袋中，置30～35℃下培養(yǎng)7天。檢查試樣品內微生物生長情況，有生長記作“﹢”，無生長記作“﹣”。三、試驗步驟3.5.1如果試樣品長菌，則按照2.1所述方法確認生長菌是挑戰(zhàn)微生物――銅綠假單胞菌。第20頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一3.5.2如果所有試樣品均不長菌，則從浸過菌懸液的A組試樣中取10甁，B組試樣中取5瓶，按2.所述方法對試樣品進行營養(yǎng)性試驗。

三、試驗步驟3.6微生物侵入試驗用菌懸液經滅菌后丟棄。

第21頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一4.1步驟2、3.4中進行的營養(yǎng)試驗和3.5.2中進行的陽性對照試驗都合格，微生物侵入試驗才有效。三、試驗步驟4、結果評價:第22頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一4.2挑戰(zhàn)試驗中A組和B組如有長菌，需記錄長菌的試樣數(shù)。在A組中如出現(xiàn)長菌，則須按下述要求作進一步調查。4.2.1仔細去除微生物生長的容器的蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。

4.2.2將觀察到試樣品封口的缺陷，采用拍照或其他適當方式詳細記錄。三、試驗步驟第23頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一

4.3如果任何挑戰(zhàn)試驗中長菌的試樣品不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器密封性挑戰(zhàn)試驗作失敗論。三、試驗步驟第24頁，共28頁，2023年，2月20日，星期一5、貯存穩(wěn)定性:5.1將剩余未經挑戰(zhàn)試驗的容器放入箱中，保存在室溫黑暗處；5.2在適當?shù)臅r間間隔（如12個月、24個月）取出一些容器，重復挑戰(zhàn)性試驗（步驟同上）。

三、試驗步驟第25頁，共28頁，2023年，