精選生物技術(shù)制藥疫苗及其制備技術(shù)講義

（優(yōu)選）生物技術(shù)制藥第版疫苗及其制備技術(shù)目前一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點疫苗（Vaccine）傳統(tǒng)概念：將病原微生物（細菌、病毒、真菌等）及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預(yù)防傳染病的免疫制劑。世界衛(wèi)生組織的擴大免疫措施（EPI）——兒童免疫程序表目前二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點、成人目前三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點現(xiàn)代疫苗：治療性疫苗、非感染性疾病疫苗疫苗學(xué)（Vaccinology）目前四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點本章學(xué)習(xí)要求掌握：疫苗、基因工程疫苗、聯(lián)合疫苗的概念及常見疫苗的制備技術(shù)熟悉：疫苗的原理、類型、特點及主要用途了解：疫苗發(fā)展的歷程與趨勢、疫苗產(chǎn)業(yè)的特點與應(yīng)用目前五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點本章內(nèi)容概述疫苗的組成、作用原理、類型與特點疫苗的制備方法疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制疫苗產(chǎn)業(yè)的特點及應(yīng)用概況目前六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點第一節(jié)概述一、疫苗的產(chǎn)生“12世紀，中國開始用人痘接種預(yù)防天花”《疫苗可預(yù)防疾病的流行病學(xué)與預(yù)防學(xué)》

第6版，美國疾病控制與預(yù)防中心（CDC）2000年出版

目前七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗的產(chǎn)生天花（Smallpox）由天花病毒引起的一種烈性傳染病天花病毒：呈磚形，能對抗干燥和低溫，在痂皮、塵土和被服上可生存數(shù)月至一年半之久臨床表現(xiàn)：主要為嚴重毒血癥狀、皮膚成批依次出現(xiàn)斑疹、丘疹、皰疹、膿皰，最后結(jié)痂、脫痂，遺留痘疤。傳播途徑：飛沫吸入或直接接觸。特點：發(fā)展迅速，未免疫人群感染后15-20天內(nèi)致死率高達30％。目前八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——中國宋真宗時期（998-1023年）：人痘法，吸入天花病人痂粉預(yù)防天花。明朝隆慶年間（1567-1572年）：痘衣法、痘漿法、旱痘法和水苗法等多種接種方法出現(xiàn)。清朝順治死于天花，得過天花的康熙繼位人痘法的缺點：有時也會引起嚴重的天花目前九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——歐洲1721年，人痘接種法傳入英國1796年，英國醫(yī)生E.Jenner利用牛痘防治天花1798年，醫(yī)學(xué)界正式承認“疫苗接種確實是一種行之有效的免疫方法”。細胞培養(yǎng)法獲得天花病毒——牛痘苗目前十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗的產(chǎn)生疫苗之父法國免疫學(xué)家LouisPasteur雞霍亂弧菌減毒株（第一個細菌減毒活疫苗）目前十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德與狂犬病疫苗異體傳代法：將狂犬病毒在兔體內(nèi)經(jīng)連續(xù)傳代，獲得了減毒株目前十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德在疫苗領(lǐng)域的卓越貢獻細菌的分離培養(yǎng)技術(shù)減毒菌株的獲得連續(xù)傳代培養(yǎng)法高溫培養(yǎng)法異體傳代法巴氏減毒菌苗的發(fā)明：為實驗免疫學(xué)建立了基礎(chǔ)目前十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史（一）減毒活疫苗技術(shù)——第一次疫苗革命（二）基因重組疫苗技術(shù)——第二次疫苗革命（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——第三次疫苗革命目前十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史（一）減毒活疫苗技術(shù)——細胞水平人為處理使病原微生物失去毒力或降低毒力例：卡介苗（BacillusCalmette-Guérin,BCG，使用活的無毒牛型結(jié)核桿菌制成）、炭疽疫苗、狂犬疫苗目前十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史藥物毒理：結(jié)核菌是細胞內(nèi)寄生菌——細胞免疫用無毒卡介菌（結(jié)核菌）人工接種進行初次感染，經(jīng)過巨噬細胞的加工處理，將其抗原信息傳遞給免疫活性細胞，使T細胞分化增殖，形成致敏淋巴細胞，當機體再遇到結(jié)核菌感染時，巨噬細胞和致敏淋巴細胞迅速被激活，執(zhí)行免疫功能，引起特異性免疫反應(yīng)。目前十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史（二）基因重組疫苗技術(shù)——分子水平基因重組技術(shù)研究相關(guān)基因和蛋白質(zhì)產(chǎn)物例：乙肝疫苗（乙型肝炎表面抗原）目前十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史血源乙肝疫苗：無癥狀HBsAg攜帶者血漿提取的HBsAg，經(jīng)純化，滅活及添加佐劑制成?；蛑亟M（轉(zhuǎn)基因）乙肝疫苗：利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，構(gòu)建含有乙肝病毒HBsAg基因的重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入酵母（或重組CHO細胞）表達乙型肝炎表面抗原，在繁殖過程中產(chǎn)生未糖基化的HBsAg多肽，經(jīng)破碎酵母菌體，顆粒形未糖基化的HBsAg多肽釋放，經(jīng)純化，滅活，添加佐劑制成。

目前十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史基因工程技術(shù)在疫苗領(lǐng)域應(yīng)用構(gòu)建無毒或減毒疫苗：毒素基因突變構(gòu)建載體活疫苗：目的基因克隆至臨床常規(guī)使用的活疫苗中目前二十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——蛋白質(zhì)水平全基因水平篩選具有保護性免疫反應(yīng)的候選抗原具體步驟：1.基因組信息分析結(jié)合基因芯片篩選候選疫苗成分2.高通量基因重組表達候選疫苗蛋白成分3.免疫保護性測試目前二十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡史例：B型腦膜炎球菌（meningococcusB）

先用計算機分析B型腦膜炎球菌的基因組，找到600個潛在的疫苗候補，將其中350個在大腸桿菌中進行表達，然后將蛋白提純用于免疫小鼠，其中找到29個蛋白能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗體，從而達到預(yù)防免疫的作用。目前二十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點第二節(jié)

疫苗的組成、作用原理、類型與特點一、疫苗組成抗原佐劑防腐劑穩(wěn)定劑滅活劑緩沖液、鹽類等非活性成分目前二十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗組成1.抗原（antigen，Ag）疫苗最主要的有效活性成分免疫原性（immunogenicity）：刺激機體特異性免疫細胞活化、增殖、分化并產(chǎn)生免疫效應(yīng)物。免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）：與免疫效應(yīng)物發(fā)生特異性結(jié)合而產(chǎn)生免疫反應(yīng)。目前二十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗組成常用抗原包括：

滅活病毒或細菌活病毒或細菌（減毒株）病毒或菌體提純物有效蛋白成分類毒素細菌多糖合成多肽

核酸目前二十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點2.佐劑（adjuvant）非特異性增強抗原免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)。要求：安全無毒、在非冷藏條件下穩(wěn)定作用機制：

改變抗原的物理形狀，延長抗原在機體內(nèi)保留時間刺激單核巨噬細胞對抗原的遞呈能力

刺激淋巴細胞分化，增加擴大免疫應(yīng)答能力一、疫苗組成目前二十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗組成常用佐劑：用于人體：鋁佐劑/MF59（水包油的乳劑）動物試驗：弗氏完全佐劑（FCA）/弗氏不完全佐劑（FIA）目前二十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點3.防腐劑大多數(shù)的滅活疫苗都使用防腐劑目的：防止外來微生物的污染常用：0.01％～0.02％硫柳汞2-苯氧乙醇氯仿副作用：接觸性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、耳毒性一、疫苗組成目前二十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點4.穩(wěn)定劑目的：保證作為抗原的病毒或其他微生物存活，并保持免疫原性凍干疫苗中常用：乳糖、明膠、山梨醇等。

一、疫苗組成目前二十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點5.滅活劑滅活病毒或細菌抗原的方法：

物理方法（如加熱、紫外線照射等）

化學(xué)方法（丙酮、酚、甲醛等）對人體有一定毒害作用，因此在滅活抗原后必須及時從疫苗中除去，并經(jīng)嚴格檢定以保證疫苗的安全性。一、疫苗組成目前三十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點6.緩沖液、鹽類緩沖液的種類、鹽類的含量都可影響疫苗的效力、純度和安全性，因此都有嚴格的質(zhì)量標準一、疫苗組成目前三十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、疫苗作用原理當機體經(jīng)過口服或注射等途徑接種疫苗后，其中的抗原分子刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生高效價特異性的免疫保護物質(zhì)當機體再次接觸到相同病原菌抗原時，免疫系統(tǒng)依循免疫記憶，迅速制造出保護物質(zhì)來阻斷病原菌的入侵，從而使機體獲得針對病原體特異性的免疫力，使其免受侵害而獲得保護。目前三十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（一）減毒活疫苗（二）滅活疫苗（三）亞單位疫苗（四）聯(lián)合疫苗（五）核酸疫苗（六）治療性疫苗目前三十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（一）減毒活疫苗（liveattenuatedvaccine）通過一定方法使病原體的致病性減弱或喪失后獲得的由完整微生物組成的疫苗制品特點：能引發(fā)機體感染但不發(fā)生臨床癥狀，但其免疫原性可引發(fā)機體免疫反應(yīng)，刺激機體產(chǎn)生特異性的記憶B細胞和記憶T細胞，起到獲得長期或終生保護的作用。

目前三十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點優(yōu)點：接種次數(shù)少，反應(yīng)小，免疫效果好（體液免疫、細胞免疫、黏膜免疫），成本低缺點：穩(wěn)定性差，有毒力返祖現(xiàn)象，污染環(huán)境，免疫缺陷者不能接種目前三十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點目前三十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（二）滅活疫苗（inactivatedvaccine）將病原體經(jīng)培養(yǎng)增殖、滅活、純化處理后獲得的保留病原體幾乎全部組分的疫苗制品。特點：失去了病原體的感染性，但保留了較強的免疫原性和較好的安全性目前三十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點優(yōu)點：穩(wěn)定性好，反應(yīng)小，免疫缺陷者也可接種缺點：需多次接種，免疫效果較差（體液免疫），需要量大目前三十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點目前三十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（三）亞單位疫苗（subunitvaccine）

利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分制成的能誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體的疫苗制品。分類：純化亞單位疫苗：單個蛋白或寡糖組成、佐劑合成肽亞單位疫苗：抗病毒/腫瘤/細菌、寄生蟲感染基因工程亞單位疫苗目前四十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點基因工程亞單位疫苗（geneticengineeringsubunitvaccine）在分離出病原體特異抗原編碼基因的基礎(chǔ)上，將外源基因轉(zhuǎn)入非致病性微生物內(nèi)表達產(chǎn)物，然后通過分離純化獲得的特異蛋白質(zhì)。原核細胞（大腸桿菌）、真核細胞（酵母）活載體疫苗（細菌、病毒）、轉(zhuǎn)基因植物疫苗目前四十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點目前四十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（四）聯(lián)合疫苗（combinedvaccine）兩種或兩種以上抗原物理混合后制成的疫苗制劑。多聯(lián)疫苗（multi-combinedvaccine）：預(yù)防不同病原微生物引起的傳染?。ɡ喊侔灼疲┒鄡r疫苗（multivalentvaccine）：預(yù)防由同一病原微生物不同亞型引起的傳染?。ɡ?3價肺炎多糖疫苗）目前四十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點目前四十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（五）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）也稱基因疫苗（geneticvaccine），包括DNA疫苗和RNA疫苗。由抗原的編碼基因和載體組成，導(dǎo)入機體細胞后可通過宿主細胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)表達蛋白抗原，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生細胞和體液免疫應(yīng)答的疫苗制劑。目前四十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點DNA疫苗（DNAvaccine）將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達系統(tǒng)的質(zhì)粒上，導(dǎo)入宿主細胞內(nèi)表達抗原蛋白，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。特點：免疫效果好，制備方便，可重復(fù)使用，可用于免疫治療和聯(lián)合免疫目前四十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點目前四十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（六）治療性疫苗（therapeuticvaccine）在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機體中，通過誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答，達到治療或防止疾病惡化的疫苗制品。最早的治療性疫苗：狂犬病疫苗目前四十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點1.基于組成成分及性質(zhì)的分類（1）蛋白質(zhì)復(fù)合重構(gòu)的治療性疫苗改造靶抗原的結(jié)構(gòu)或組合，使其相似而又有異于傳統(tǒng)疫苗的靶抗原，重新喚起患者的功能性免疫應(yīng)答，進而打破和逆轉(zhuǎn)患者的免疫耐受狀態(tài)。改造方法：蛋白修飾，結(jié)構(gòu)/構(gòu)型改造，蛋白復(fù)合/多肽偶聯(lián)目前四十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（2）基因疫苗DNA疫苗：埃博拉（Ebola）疫苗、乙型肝炎（HBV）疫苗、丙型肝炎（HCV）疫苗、人免疫缺陷病毒（HIV）疫苗等RNA疫苗：RNA修飾的樹突狀細胞（DC）疫苗等目前五十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點（3）多水平基因修飾細胞疫苗腫瘤治療性疫苗：腫瘤細胞/DC細胞疫苗制備過程：目前五十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點2.基于治療疾病種類的分類（1）感染性疾病的治療性疫苗（2）腫瘤治療性疫苗（3）自身免疫性疾病的治療性疫苗（4）移植用治療性疫苗目前五十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點目前五十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗的類型與特點預(yù)防性疫苗治療性疫苗病原體蛋白不需改造需經(jīng)分子設(shè)計和重新構(gòu)建受用者健康人體患者監(jiān)測手段保護性抗體產(chǎn)生情況疾病改善情況激發(fā)免疫應(yīng)答類型體液免疫為主細胞免疫為主目前五十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點第三節(jié)疫苗的制備方法滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗減毒活疫苗——皮內(nèi)注射用卡介苗基因工程重組亞單位疫苗——重組乙型肝炎疫苗生化提取亞單位組分疫苗——吸附破傷風(fēng)疫苗治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T目前五十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點疫苗生產(chǎn)的一般流程目前五十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）本品系用世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的并經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的流感病毒株，分別接種雞胚，經(jīng)培養(yǎng)、收獲病毒液，病毒滅活、濃縮和純化后制成。用于預(yù)防本株病毒引起的流行性感冒目前五十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）The

influenzavaccineisanannualvaccinationusingavaccinethatisspecificforagivenyeartoprotectagainstthehighlyvariable

influenzavirus.

Eachseasonalinfluenzavaccinecontainsantigensrepresentingthree(trivalentvaccine)orfour(quadrivalentvaccine)influenza

virusstrains:twoinfluenzatypeAvirusstrains,andeitheroneortwoinfluenzatypeBvirusstrains.

目前五十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點流感病毒甲型流感病毒（InfluenzaAvirus）最容易發(fā)生變異（抗原轉(zhuǎn)變、抗原漂移）世界性流感大流行：甲型流感病毒出現(xiàn)新亞型或舊亞型重現(xiàn)引起甲型流感病毒根據(jù)H(hemagglutinin，血凝素)和N(neuraminidase，神經(jīng)氨酸酶)抗原不同分為許多亞型，H有17個亞型（H1～H17），N有10個亞型（N1～N10）。H1、H5、H7亞型為高致病性目前五十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus）抗原變異很慢局限性流行，對人類致病性較低丙型流感病毒（InfluenzaCvirus）抗原穩(wěn)定致病力較弱，主要侵犯幼兒和免疫力低下的人群，只引起人類不明顯的或輕微的上呼吸道感染目前六十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）Influenzavaccinesmaybe

administered

asaninjection

orasanasalspray.TheU.S.

CentersforDiseaseControlandPreventionrecommendthateveryoneovertheagesof6monthsshouldreceivetheseasonalinfluenzavaccine.

Vaccinationcampaigns

usuallyfocusonpeoplewhoareathighriskof

seriouscomplications

iftheycatchtheflu,suchastheelderlyandpeoplelivingwithchronicillness

orthosewith

weakenedimmunesystems,aswellashealthcareworkers.目前六十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（一）制備方法1.生產(chǎn)用原材料雞胚是分離各類病毒的較為理想的材料尿囊腔目前六十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（1）雞胚毒種傳代和制備：來源于SPF（SpecificpathogenFree）雞群疫苗生產(chǎn)：來源于封閉式房舍內(nèi)飼養(yǎng)的健康雞群、9-11日齡無畸形、血管清晰、活動（2）毒種WHO推薦并提供的甲型和乙型流感病毒株目前六十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.毒種種子批的建立及檢定符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定目前六十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.毒種種子批的建立及檢定建立：以毒種為基礎(chǔ)傳代（5代以內(nèi)得成品疫苗）血凝素型別鑒定試驗血凝抑制試驗

單向免疫擴散試驗病毒滴度：雞胚半數(shù)感染劑量法血凝滴度：血凝法無菌檢查、支原體檢查外源性禽白血病病毒、禽腺病毒檢測：ELISA保存：凍干毒種-20℃以下，液體毒種-60℃以下檢定目前六十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.單價原液的制備各流感病毒工作種子批分別接種（尿囊腔），33-35℃培養(yǎng)48-72h病毒收獲（尿囊液）收獲液檢定

微生物限度：菌數(shù)<105CFU/ml，沙門氏菌為陰性血凝滴度收獲液合并目前六十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.單價原液的制備病毒滅活（甲醛≤200μg/ml）、驗證及內(nèi)毒素含量測定濃縮（超濾）、純化（柱色譜法、蔗糖密度區(qū)帶離心）及過濾除菌（硫柳汞）單價原液保存（2-8℃）目前六十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）4.半成品的制備對單價原液根據(jù)相同血凝素含量進行配制：15-18μg/劑補加硫柳汞5.成品的制備半成品分批、分裝及凍干后包裝：劑，含各型流感病毒株血凝素為15μg/劑目前六十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（二）檢定要求1.單價原液的檢定鑒別試驗：血凝抑制試驗、單向免疫擴散試驗病毒滅活驗證試驗：雞胚存活率、血凝試驗血凝素含量檢測：單向免疫擴散試驗?zāi)壳傲彭揬總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.半成品的檢定游離甲醛含量≤50μg/劑硫柳汞含量≤50μg/劑血凝素含量：配制量的80%-120%無菌檢查目前七十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.成品的檢定鑒別：單向免疫擴散試驗外觀：乳白色液體，無異物pH值：硫柳汞含量≤50μg/劑蛋白質(zhì)含量≤200μg/劑血凝素含量：配制量的80%-120%卵清蛋白含量≤250ng/劑抗生素殘留量≤50ng/劑目前七十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）目前七十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、減毒活疫苗——皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）本品系用卡介菌經(jīng)培養(yǎng)后，收集菌體，加入穩(wěn)定劑凍干制成目前七十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）（一）基本要求生產(chǎn)車間、設(shè)備及器具專用制造、包裝過程避光工作人員：身體健康、無結(jié)核病目前七十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）（二）制備方法1.生產(chǎn)用菌種：符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定卡介菌D2PB302菌株目前七十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）2.種子批的建立及檢定(<12代)培養(yǎng)特性：菌落特征（多皺、微黃菌膜）毒力試驗（豚鼠腹腔注射）：體重不減輕，解剖觀察無有毒分枝桿菌試驗（豚鼠皮下注射）：體重不減輕，解剖觀察免疫力試驗（豚鼠皮下注射）：解剖分析保存：凍干，8℃以下目前七十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）3.原液的制備生產(chǎn)用種子：工作種子批生產(chǎn)用培養(yǎng)基：液體蘇通培養(yǎng)基等接種與培養(yǎng)：37-39℃靜止培養(yǎng)收獲和合并：收集菌膜，壓干，研磨，加入穩(wěn)定劑稀釋目前七十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）4.半成品的制備穩(wěn)定劑稀釋：5.成品的制備分裝、凍干、封口保存目前七十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）（三）檢定要求1.原液檢定純菌檢查：涂片鏡檢濃度測定：參照標準品，分光光度法檢測2.半成品的檢定沉降率測定：靜置，分光光度法檢測活菌數(shù)測定≥1.0×107CFU/mg活力測定：XTT法目前七十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）3.成品的檢定鑒別試驗：抗酸染色涂片外觀：白色疏松體或粉末狀，加水成均勻懸液水分≤3.0%效力測定（豚鼠皮下注射）：局部硬結(jié)反應(yīng)活菌數(shù)測定≥1.0×106CFU/mg無有毒分支桿菌試驗（豚鼠皮下注射）：體重不減輕，解剖觀察熱穩(wěn)定性試驗：37℃放置28天，計算活菌率目前八十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、基因工程亞單位疫苗——重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）由重組酵母細胞表達的乙型肝炎表面抗原，經(jīng)純化、滅活及加入佐劑吸附制成。目前八十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）（一）制備方法1.生產(chǎn)用菌種：基因重組構(gòu)建的表達HBsAg的重組釀酒酵母原始菌種目前八十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）2.種子批的建立及檢定符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定建立：原始菌種傳代培養(yǎng)物純度：無細菌和其他真菌檢出HBsAg基因序列測定檢定質(zhì)粒保有率：平板復(fù)制法活菌率：血細胞計數(shù)板抗原表達率：蛋白質(zhì)含量、HBsAg含量保存：工作種子批-70℃保存，其余液氮保存目前八十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）3.原液的制備發(fā)酵：錐形瓶、種子罐、生產(chǎn)罐三級發(fā)酵純化：細胞破碎（TritonX-100）、硅膠吸附、疏水色譜純化、硫氰酸鹽處理、稀釋、過濾除菌保存：2-8℃，不超過3個月目前八十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）4.半成品的制備甲醛處理：100μg/ml鋁吸附配制：與鋁佐劑等量混合5.成品的制備分批、分裝及凍干后包裝目前八十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）（二）檢定要求1.原液檢定特異蛋白帶：SDS，20-25kD蛋白帶N-端氨基酸序列測定：氨基酸序列分析儀純度：免疫印跡法、高效液相色譜法2.半成品的檢定吸附完全性≥95%硫氰酸鹽含量＜1.0μg/mlTritonX-100含量＜15.0μg/ml目前八十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）3.成品的檢定鑒別試驗：ELISA外觀：乳白色混懸液pH值：鋁含量:0.35-0.62mg/ml目前八十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、生化提取亞單位組分疫苗——吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）本品系采用破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌，在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后提取破傷風(fēng)毒素蛋白經(jīng)甲醛脫毒、精制，加入氫氧化鋁佐劑制成。目前八十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）（一）制備方法1.生產(chǎn)用菌種：產(chǎn)毒效價高、免疫力強的破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌目前八十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）2.種子批的建立及檢定符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定建立：原始菌種傳代培養(yǎng)特性：專性厭氧菌、培養(yǎng)觀察染色鏡檢：革蘭氏染色檢定生化反應(yīng)：不發(fā)酵糖類、不還原硝酸鹽等產(chǎn)毒試驗(小鼠皮下注射)：觀察癥狀特異性中和試驗(小鼠皮下注射)：觀察癥狀保存：2-8℃目前九十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）3.類毒素原液的制備毒素的獲得：微生物培養(yǎng)，離心上清，除菌過濾脫毒（甲醛）及檢定（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀精制：等電點沉淀、鹽析、超濾等，加硫柳汞保存：2-8℃目前九十一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）4.半成品的制備佐劑配制：氫氧化鋁吸附類毒素的配制：7-10Lf/ml5.成品的制備分批、分裝、凍干后包裝目前九十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）（二）檢定要求1.類毒素原液檢定pH值：純度：1500Lf/mg蛋白氮特異性毒性檢查（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀毒性逆轉(zhuǎn)實驗（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀2.半成品的檢定無菌檢查目前九十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）3.成品的檢定鑒別試驗：動物實驗、絮狀試驗、凝膠免疫沉淀外觀：乳白色懸液化學(xué)檢定：pH、氫氧化鋁、硫柳汞、甲醛等含量效價測定≥40IU/劑特異性毒性檢查（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀目前九十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點五、治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-TDENDREON公司的自體細胞免疫療法2010年批準上市，首個被FDA批準的治療性癌癥疫苗目前九十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點五、治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T基本步驟:采集患者的外周血單個核細胞，培養(yǎng)生成抗原提呈細胞（樹枝狀細胞)樹枝狀細胞在培養(yǎng)條件下用基因工程制備的融合蛋白（PA2024）孵育,這種融合蛋白由兩部分組成:抗原-前列腺酸性磷酸酶（PAP），PAP能在95%的前列腺癌細胞中表達;粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF),一種能幫助樹枝狀細胞成熟和激活的免疫信號因子收集經(jīng)融合蛋白孵育刺激的樹枝狀細胞等免疫活性細胞重新注入患者體內(nèi),激發(fā)體內(nèi)產(chǎn)生針對攜帶PAP抗原的前列腺癌細胞的抗腫瘤免疫反應(yīng)目前九十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點第四節(jié)疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制目前九十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前九十八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前九十九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百零一頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百零二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、原材料的質(zhì)量控制（一）生產(chǎn)用水（二）器材、溶液等原材料（三）動物源的原材料：SPF級（四）菌種和毒種（五）細胞目前一百零三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點（四）菌種和毒種目前一百零四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百零五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、生產(chǎn)過程質(zhì)量控制《中國生物制品規(guī)程》GMP人員素質(zhì)、衛(wèi)生及無菌的要求目前一百零六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百零七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百零八頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（一）理化檢定檢測疫苗中的有效成分和無效有害成分物理性狀檢查蛋白質(zhì)含量測定：基因工程疫苗防腐劑含量測定純度檢查其他：水分、佐劑等目前一百零九頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（二）安全性檢定菌、毒種和主要原材料的檢查半成品檢查成品檢查目前一百一十頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（三）效力檢定免疫力試驗活疫苗的效力測定血清學(xué)試驗?zāi)壳耙话僖皇豁揬總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百一十二頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點目前一百一十三頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點第五節(jié)疫苗產(chǎn)業(yè)特點及應(yīng)用概況疫苗行業(yè)是生物醫(yī)藥領(lǐng)域中比較高端的細分領(lǐng)域，具有較高的技術(shù)壁壘、資金壁壘和政策壁壘。

全球疫苗85%的疫苗市場被葛蘭素史克、賽諾菲安萬特、默克、惠氏和諾華這五家跨國制藥企業(yè)所壟斷。我國疫苗市場規(guī)模已接近100億元，全世界排名前10位的制藥公司已全部進軍中國市場。目前一百一十四頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點一、疫苗研發(fā)生產(chǎn)特點需全程監(jiān)管研發(fā)是疫苗供應(yīng)體系的核心周期長、投入高、風(fēng)險大：10年以上一條生產(chǎn)線只生產(chǎn)一種產(chǎn)品對大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)的需求高投入產(chǎn)出比高目前一百一十五頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點二、我國疫苗分類及需求政府免費向公民提供、公民依照政府規(guī)定接種公民自愿接種、自費負擔目前一百一十六頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點三、我國疫苗行業(yè)現(xiàn)狀流通領(lǐng)域的開放和計劃免疫范圍的擴大，加強計劃疫苗需求，激活有價疫苗市場加大傳統(tǒng)疫苗的技術(shù)改良與新型疫苗品種的開發(fā)力度展開從產(chǎn)品競爭到企業(yè)競爭的雙重競爭目前一百一十七頁\總數(shù)一百二十九頁\編于十七點四、接種疫苗的效果1.人用疫苗徹底消滅天花基本消滅脊髓灰質(zhì)炎