第十七章病毒檢驗技術(shù)演示文稿

第十七章病毒檢驗技術(shù)演示文稿目前一頁\總數(shù)二十七頁\編于十點優(yōu)選第十七章病毒檢驗技術(shù)目前二頁\總數(shù)二十七頁\編于十點第十七章

病毒檢驗技術(shù)返回總目錄目前三頁\總數(shù)二十七頁\編于十點本章內(nèi)容

第一節(jié)標本的采集、處理與運送

1第二節(jié)病毒的分離與鑒定2第三節(jié)病毒學檢測及診斷3目前四頁\總數(shù)二十七頁\編于十點學習目標及重點

學習目標：掌握病毒標本采集和送檢應遵循的原則；病毒檢驗鑒定常用技術(shù)熟悉病毒血清學診斷常用的方法了解病毒感染的實驗室快速診斷學會病毒的培養(yǎng)基本操作本章重點：★病毒標本采集和運送原則?！锊《緦W診斷及鑒定常用方法?！锊《九囵B(yǎng)的基本操作。目前五頁\總數(shù)二十七頁\編于十點第一節(jié)標本的采集、處理與運送

一、標本的采集與處理1.采集時間：發(fā)病早期或急性期盡快采集。2.采集部位：取決于臨床癥狀和所懷疑感染的病毒。

如：流感病毒感染------鼻咽拭子

乙型腦炎病毒感染------腦脊液

輪狀病毒感染------糞便

乙型肝炎病毒感染------血液3.采集方法與處理

提高病毒的分離率，防止標本污染。采集時無菌操作,可加入抗生素以殺死雜菌目前六頁\總數(shù)二十七頁\編于十點二、標本的運送與保存

1.標本的運送盡快送檢冷凍、冷藏運輸防漏、專人、標記2.標本的保存-70℃可較長時間保存可加入甘油或二甲基亞砜（DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防病毒失活第一節(jié)標本的采集、處理與運送

返回章內(nèi)容目前七頁\總數(shù)二十七頁\編于十點一、病毒的分離培養(yǎng)

2.雞胚培養(yǎng)

第二節(jié)病毒的分離與鑒定原代細胞培養(yǎng)二倍體細胞培養(yǎng)傳代細胞

羊膜腔接種尿囊腔接種卵黃囊接種絨毛尿囊膜接種組織細胞培養(yǎng)

雞胚培養(yǎng)

動物接種目前八頁\總數(shù)二十七頁\編于十點1.組織細胞培養(yǎng)

雞成纖維細胞Hep-2細胞細胞培養(yǎng)瓶Vero細胞第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前九頁\總數(shù)二十七頁\編于十點10一般選用9～14d的雞胚來源充足、組織分化程度低、本身很少攜帶病毒和細菌、對接種病毒不產(chǎn)生抗體及病毒較易增殖等2.雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十頁\總數(shù)二十七頁\編于十點選擇不同的接種部位是病毒分離成功的關鍵常用的主要有：

尿囊腔接種、羊膜腔接種、卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種2.雞胚培養(yǎng)第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十一頁\總數(shù)二十七頁\編于十點2.雞胚培養(yǎng)尿囊腔接種羊膜腔接種尿囊腔羊膜腔常用接種途徑：

尿囊腔接種、羊膜腔接種、卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的適應和傳代培養(yǎng)常用于臨床流感病毒初次分離第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十二頁\總數(shù)二十七頁\編于十點卵黃囊接種絨毛尿囊膜接種卵黃囊絨毛尿囊膜人工氣室羊膜腔氣室絨毛尿囊膜尿囊腔

卵白2.雞胚培養(yǎng)主要用于蟲媒病毒、衣原體及立克次體的分離和繁殖。常用于牛痘病毒、天花病毒、單純皰疹病毒的分離卵黃囊第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十三頁\總數(shù)二十七頁\編于十點3.動物接種常用的實驗動物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和雞等常用的接種途徑包括皮下、皮內(nèi)、腹腔、靜脈、角膜、鼻腔及腦內(nèi)接種等方式第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十四頁\總數(shù)二十七頁\編于十點二、病毒增殖的觀察（一）病毒在細胞內(nèi)增殖的鑒定指標1．細胞形態(tài)的改變2．紅細胞吸附3．細胞培養(yǎng)液pH值改變（二）病毒數(shù)量及病毒感染性測定1．血凝試驗2．中和試驗3．空斑形成試驗4．半數(shù)感染量（ID50）和組織培養(yǎng)半數(shù)感染量（TCID50）

第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十五頁\總數(shù)二十七頁\編于十點二、病毒增殖的觀察（一）病毒在細胞內(nèi)增殖的鑒定指標

1．細胞形態(tài)的改變（1）細胞病變效應（cytophathiceffect，CPE）第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十六頁\總數(shù)二十七頁\編于十點正常細胞病變細胞是指某些病毒特別是無包膜的病毒感染組織細胞后，正常生長的梭形細胞變圓、變性、壞死、溶解及從培養(yǎng)瓶壁脫落，細胞堆積形成葡萄狀第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十七頁\總數(shù)二十七頁\編于十點（2）多核巨細胞1．細胞形態(tài)的改變多見于有包膜的病毒，如呼吸道合胞病毒、麻疹病毒等，由感染細胞融合而成多核巨細胞第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十八頁\總數(shù)二十七頁\編于十點（3）包涵體1．細胞形態(tài)的改變

某些病毒感染宿主細胞后，細胞內(nèi)出現(xiàn)一種光學顯微鏡下可見的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，多為圓形、卵圓形或不定形。一般是由完整的病毒顆?；蛏形囱b配的病毒亞基聚集而成，稱為包涵體。第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前十九頁\總數(shù)二十七頁\編于十點2．紅細胞吸附3．細胞培養(yǎng)液pH值改變二、病毒增殖的觀察病毒感染細胞后，可使細胞的代謝發(fā)生變化，導致培養(yǎng)液pH值改變。第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前二十頁\總數(shù)二十七頁\編于十點（二）病毒數(shù)量及病毒感染性測定二、病毒增殖的觀察1．血凝試驗病毒顆粒紅細胞

某些病毒（如流感病毒）表面的血凝素（HA）能引起人或某些哺乳動物的紅細胞發(fā)生凝集，將這類病毒感染細胞后收集的病毒液作不同稀釋，以發(fā)生血凝反應的病毒液的最高稀釋度作為該病毒的血凝效價（即滴度），可對病毒含量進行半定量測定。血凝現(xiàn)象第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前二十一頁\總數(shù)二十七頁\編于十點能使紅細胞完全凝集的病毒的最高稀釋倍數(shù)為該病毒的血凝效價，此效價為1個血凝單位（HAU）第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前二十二頁\總數(shù)二十七頁\編于十點病毒顆粒紅細胞病毒抗體

血凝抑制試驗病毒液中若先加入病毒的特異性抗體，抗體與病毒表面的抗原特異性結(jié)合，從而抑制病毒與紅細胞的血凝現(xiàn)象，稱為血凝抑制試驗。第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前二十三頁\總數(shù)二十七頁\編于十點2．中和試驗（Nt）

在體外孵育病毒與特異性抗體的混合物，使病毒與抗體相互反應，再將混合物接種到敏感的宿主體內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后觀察CPE或紅細胞吸附現(xiàn)象是否消失，即特異性抗體是否中和相應病毒，從而測定殘存的病毒感染力的一種方法3．空斑形成試驗第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前二十四頁\總數(shù)二十七頁\編于十點4．半數(shù)感染量（ID50）和組織培養(yǎng)半數(shù)感染量（TCID50）測定病毒感染雞胚、動物或細胞后，引起50%死亡或病變的最小量。用來估計病毒感染的強弱程度，但不能準確測定感染性病毒顆粒的多少返回章內(nèi)容第二節(jié)病毒的分離與鑒定目前二十五頁\總數(shù)二十七頁\編于十點

第三節(jié)病毒學檢測及診斷一、形態(tài)學檢查及診斷

1.

光學顯微鏡檢查：

*直接觀察到較大的病毒體（如痘病毒）

*包涵體狂犬病毒感染------嗜酸性包涵體

巨細胞病毒感染---“貓頭鷹眼”狀的嗜酸性包涵體

目前二十六頁\總數(shù)二十