乳糖微生物限度驗(yàn)證方案

目錄1.目的 32.范圍 33.職責(zé) 34.參考文件 35.系統(tǒng)概述 46.驗(yàn)證用儀器、菌種和培養(yǎng)基 46.1驗(yàn)證用儀器 46.2驗(yàn)證用菌種 46.3驗(yàn)證用培養(yǎng)基 47.驗(yàn)證實(shí)施 47.1驗(yàn)證文件確認(rèn) 57.2需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查 67.3需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證 67.4控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查 67.5控制菌檢查方法驗(yàn)證 88.偏差清單及報(bào)告 99.驗(yàn)證周期 910.驗(yàn)證結(jié)果分析與評(píng)價(jià)報(bào)告 911.驗(yàn)證附表 10表1驗(yàn)證方案培訓(xùn)記錄表11表2文件的確認(rèn) 12表3菌液計(jì)數(shù)結(jié)果 13表4需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄 14表5需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證記錄 15表6控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查記錄 16表7控制菌檢查方法驗(yàn)證 17表8偏差清單 18表9偏差報(bào)告 19表10驗(yàn)證結(jié)果分析與評(píng)價(jià)報(bào)告 201.目的依據(jù)《中國(guó)藥典》（2015年版四部）,對(duì)乳糖新建立的微生物限度檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)在目前的檢驗(yàn)環(huán)境下該方法適合于供試品的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌、酵母菌測(cè)定及控制菌的檢查。2.范圍本驗(yàn)證方案適用于乳糖的微生物限度檢查法的驗(yàn)證。3.職責(zé) 3.1驗(yàn)證小組成員及職責(zé)序號(hào)部門(mén)姓名職務(wù)驗(yàn)證小組職務(wù)工作職責(zé)1質(zhì)量管理部劉國(guó)利質(zhì)量副總組長(zhǎng)負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案、驗(yàn)證報(bào)告的最終批準(zhǔn)負(fù)責(zé)驗(yàn)證涉及文件、資料的最終審核確保完成驗(yàn)證項(xiàng)目2質(zhì)量管理部鄧志軍質(zhì)管部長(zhǎng)副組長(zhǎng)負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案、驗(yàn)證報(bào)告的審核負(fù)責(zé)驗(yàn)證涉及文件、資料的審核3質(zhì)量管理部胡緒勇QA主任小組成員負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的起草、培訓(xùn)負(fù)責(zé)驗(yàn)證工作的實(shí)施負(fù)責(zé)驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中資料數(shù)據(jù)的收集、整理、歸檔負(fù)責(zé)難證項(xiàng)目實(shí)施中各部門(mén)協(xié)調(diào)工作負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的撰寫(xiě)4質(zhì)量管理部饒?zhí)螿C主任小組成員負(fù)責(zé)驗(yàn)證檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)、檢驗(yàn)方法的起草負(fù)責(zé)驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中檢驗(yàn)工作的安排5質(zhì)量管理部阮江為QA小組成員負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案、驗(yàn)證報(bào)告的初審負(fù)責(zé)協(xié)助驗(yàn)證過(guò)程的實(shí)施6質(zhì)量管理部毛亞瓊QC小組成員負(fù)責(zé)驗(yàn)證過(guò)程實(shí)施原始記錄的填寫(xiě)徐秋紅3.2驗(yàn)證方案培訓(xùn)：本驗(yàn)證方案批準(zhǔn)后，根據(jù)《人員培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》對(duì)確認(rèn)小組成員和相關(guān)人員進(jìn)行培訓(xùn)，使其了解方案的實(shí)施程序，明白其職責(zé)并能在驗(yàn)證工作中得到很好的執(zhí)行。見(jiàn)表1.4.參考文件本驗(yàn)證方案參考了以下標(biāo)準(zhǔn)和指南：《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年版）《藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》《藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南》（2003年版）《中國(guó)藥典》（2015年版四部）5.系統(tǒng)概述參照《中國(guó)藥典》（2015年版二部及四部）采用的檢測(cè)方法對(duì)葡萄糖原料新建立的微生物限度檢查法進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于供試品的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌、酵母菌的測(cè)定和控制菌的檢查?？梢哉沾藱z查法和此檢查條件進(jìn)行供試品的微生物限度檢查。6.驗(yàn)證用儀器、菌種和培養(yǎng)基6.1驗(yàn)證用儀器儀器名稱生產(chǎn)廠家儀器型號(hào)壓力蒸汽滅菌器電子天平PH酸度計(jì)電熱恒溫培養(yǎng)箱生化培養(yǎng)箱微生物限度檢驗(yàn)儀6.2驗(yàn)證用菌種菌種名稱菌種編號(hào)提供廠家菌種代數(shù)金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司第（）代銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司第（）代枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司第（）代大腸埃希菌[CMCC（B）44102]北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司第（）代白色念珠菌[CMCC（B）98001]北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司第（）代黑曲霉菌[CMCC（B）98003]北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司第（）代6.3驗(yàn)證用對(duì)照培養(yǎng)基對(duì)照培養(yǎng)基名稱來(lái)源批號(hào)胰酪大豆胨液體對(duì)照培養(yǎng)基中國(guó)食品藥品檢定研究院胰酪大豆胨瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基中國(guó)食品藥品檢定研究院沙氏葡萄糖瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基中國(guó)食品藥品檢定研究院沙氏葡萄糖液體對(duì)照培養(yǎng)基中國(guó)食品藥品檢定研究院麥康凱液體對(duì)照培養(yǎng)基中國(guó)食品藥品檢定研究院麥康凱瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基中國(guó)食品藥品檢定研究院6.4驗(yàn)證用培養(yǎng)基培養(yǎng)基名稱配制批號(hào)培養(yǎng)溫度（℃）胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30～35℃胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基30～35℃沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基20～25℃沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20～25℃麥康凱液體培養(yǎng)基42～44℃麥康凱瓊脂培養(yǎng)基30～35℃PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液——0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液——7.驗(yàn)證實(shí)施7.1驗(yàn)證文件確認(rèn)目的驗(yàn)證支持文件的確認(rèn)，用來(lái)保證驗(yàn)證的一致性、有效性。程序檢查《乳糖糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》、《微生物限度檢查法操作規(guī)程》、《培養(yǎng)基適用性檢查操作程序》及相關(guān)記錄是否齊全、是否是現(xiàn)行批準(zhǔn)的文件?？山邮諛?biāo)準(zhǔn)與本次驗(yàn)證相關(guān)的文件及記錄齊全，均為現(xiàn)行版本。確認(rèn)結(jié)果結(jié)果見(jiàn)“表1文件確認(rèn)”。7.2需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查目的確認(rèn)使用的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查符合要求。程序菌液制備取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，將培養(yǎng)物1ml，加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋制成每1ml含菌數(shù)不大于100cfu的菌懸液，備用。取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，經(jīng)20～25℃培養(yǎng)2～3天，將培養(yǎng)物1ml，加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉注射液中，10倍稀釋制成每1ml含菌數(shù)不大于100cfu的菌懸液，備用。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，經(jīng)20～25℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）的聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，取此菌原液1ml，用含0.05%（ml/ml）的聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，10倍稀釋制成每1ml含孢子數(shù)不大于100cfu的孢子懸液，備用。菌液計(jì)數(shù)（取2個(gè)平皿的平均值）：取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌1ml分別接種至2個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿中，每皿注入胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基約20ml，倒置于生化培養(yǎng)箱30～35℃培養(yǎng)3天，計(jì)數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉菌液1ml分別接種至2個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿中，每皿注入沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基約20ml，倒置于霉菌培養(yǎng)箱20～25℃培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)并取其平均值。②計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基取7個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2平皿，每皿接種1ml（含菌不大于100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對(duì)照，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后置于30～35℃培養(yǎng)3天，計(jì)數(shù)。取4個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種白色念珠菌、黑曲霉菌各2個(gè)無(wú)菌平皿，傾注胰酪大豆胨瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基，混勻，凝固后置于30～35℃培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)；對(duì)照培養(yǎng)基同法操作。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基取5個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種白色念珠菌、黑曲霉菌各2個(gè)平皿，每皿接種1ml（含菌不大于100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對(duì)照，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后置于20～25℃培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)；對(duì)照培養(yǎng)基同法操作。可接受標(biāo)準(zhǔn)被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。確認(rèn)報(bào)告結(jié)果見(jiàn)“表2菌液計(jì)數(shù)結(jié)果”、”表3培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查”。7.3需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證目的確認(rèn)所采用的計(jì)數(shù)方法適合于產(chǎn)品的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌的測(cè)定。程序菌液制備：取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)將培養(yǎng)物1ml，加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋制成每1ml含菌數(shù)不大于100cfu的菌懸液，備用。取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，經(jīng)20～25℃培養(yǎng)2～3天，將培養(yǎng)物1ml，加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉注射液中，10倍稀釋制成每1ml含菌數(shù)不大于100cfu的菌懸液，備用。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）的聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，取此菌原液1ml，用含0.05%（ml/ml）的聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，稀釋制成每1ml含孢子數(shù)不大于100cfu的孢子懸液，備用。②驗(yàn)證步驟：取供試品1個(gè)批號(hào)，每批中驗(yàn)證試驗(yàn)包括3組進(jìn)行獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的比值。a.試驗(yàn)組：取1：10的供試液10ml加入適量的試驗(yàn)菌液，混勻，使每1ml供試液中含菌量不大于100cfu，再取1ml注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，分別制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。b.菌液組：取稀釋液10ml，同試驗(yàn)組操作，測(cè)定其菌數(shù)。c.供試品對(duì)照組：取1：10的供試液1ml，測(cè)定供試品菌數(shù)。可接受標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)。稀釋劑對(duì)照組菌落數(shù)與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)。試驗(yàn)組菌數(shù)比值=試驗(yàn)組平均菌落數(shù)－供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)菌液對(duì)照組平均菌落數(shù)確認(rèn)報(bào)告結(jié)果見(jiàn)”表4需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證記錄”。7.4控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查目的確認(rèn)使用的控制菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查符合要求。程序①菌液制取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，將培養(yǎng)物1ml，加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋制成每1ml含菌數(shù)不大于100cfu，備用。②適用性檢查麥康凱液體培養(yǎng)基分別接種1ml（含菌不大于100cfu）大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在42～44℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好；接種1ml（含菌大于100cfu）金黃色葡萄糖菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在42～44℃培養(yǎng)48小時(shí)，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基用涂布法分別接種1ml（含菌不大于100cfu）大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平皿上，在30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，與對(duì)照培養(yǎng)皿比較，被檢培養(yǎng)皿與對(duì)照培養(yǎng)皿生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。用涂布法分別接種不大于100cfu的大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平皿上，在30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)。被檢培養(yǎng)基上試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對(duì)照培養(yǎng)基一致RV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基分別接種1ml（含菌不大于100cfu）沙門(mén)菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在30～35℃培養(yǎng)24小時(shí)，與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好；接種1ml（含菌大于100cfu）金黃色葡萄糖菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在30～35℃培養(yǎng)24小時(shí)，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基用涂布法分別接種1ml（含菌不大于100cfu）沙門(mén)菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平皿上，在30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，與對(duì)照培養(yǎng)皿比較，被檢培養(yǎng)皿與對(duì)照培養(yǎng)皿生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。用涂布法分別接種不大于100cfu的沙門(mén)菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平皿上，在30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)。被檢培養(yǎng)基上試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對(duì)照培養(yǎng)基一致。三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基用涂布法分別接種不大于100cfu的沙門(mén)菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平皿上，在30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)。被檢培養(yǎng)基上試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對(duì)照培養(yǎng)基一致。可接受標(biāo)準(zhǔn)促生長(zhǎng)能力檢查：被檢培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。抑制能力檢查：試驗(yàn)菌不得生長(zhǎng)。指示能力檢查：被檢培養(yǎng)基上試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對(duì)照培養(yǎng)基一致。確認(rèn)報(bào)告結(jié)果見(jiàn)”表5控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查”。7.5控制菌檢查方法驗(yàn)證目的驗(yàn)證所采用的檢查方法適合于產(chǎn)品的控制菌檢查。程序菌液制備取大腸埃希菌、沙門(mén)的新鮮培養(yǎng)物接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，將培養(yǎng)物1ml，加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋制成每1ml含菌數(shù)不大于100cfu的菌懸液，備用。1.驗(yàn)證步驟供試液的配制：取供試品10g，加入pH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，使成1：10的供試液。試驗(yàn)組：取1ml供試液和不大于100cfu試驗(yàn)菌加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，取上述培養(yǎng)物1ml加入100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中42～44℃培養(yǎng)24小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿上，30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)。陽(yáng)性對(duì)照組：取1ml不大于100cfu試驗(yàn)菌加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻30～35℃培養(yǎng)18～24，取上述培養(yǎng)物1ml加入100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中。42～44℃培養(yǎng)24小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿上，30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)陰性對(duì)照組：取pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液1ml加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，取上述培養(yǎng)物1ml加入100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中42～44℃培養(yǎng)24小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿上，30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)。試驗(yàn)組：取10g供試品和不大于100cfu試驗(yàn)菌接種至100胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，取上述培養(yǎng)物0.1ml接種至10mlRV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)取少量RV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)物接種于木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平皿上，30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行斜面接種30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)。陽(yáng)性對(duì)照組：取1ml不大于100cfu試驗(yàn)菌接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，取上述培養(yǎng)物0.1ml接種至10mlRV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)取少量RV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)物接種于木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平皿上30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行斜面接種30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)。陰性對(duì)照組：取100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)，取上述培養(yǎng)物0.1ml接種至10mlRV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)取少量RV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)物接種于木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平皿上30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照組應(yīng)檢出試驗(yàn)菌，陰性對(duì)照組應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，則可按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)消除供試品的抑菌活性后，重新進(jìn)行驗(yàn)證。確認(rèn)報(bào)告結(jié)果見(jiàn)”表6控制菌檢查方法驗(yàn)證記錄”。8.偏差清單及報(bào)告整理所有驗(yàn)證過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的偏差，并將清單列在“表6”中。將驗(yàn)證過(guò)程發(fā)現(xiàn)的所有偏差記錄在“表7”，并提出偏差解決方案，審核和批準(zhǔn)偏差解決方案及其實(shí)施。9.驗(yàn)證周期每5年進(jìn)行一次再驗(yàn)證，原測(cè)定法的檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，也需要重新驗(yàn)證。10.驗(yàn)證結(jié)果分析與評(píng)價(jià)報(bào)告由驗(yàn)證小組組長(zhǎng)對(duì)本方案做驗(yàn)證結(jié)論及建議，填寫(xiě)“表8驗(yàn)證結(jié)果分析與評(píng)價(jià)報(bào)告”，驗(yàn)證小組成員進(jìn)行會(huì)簽，驗(yàn)證委員會(huì)主任對(duì)本方案的結(jié)論進(jìn)行批準(zhǔn)。表1驗(yàn)證方案培訓(xùn)記錄表培訓(xùn)內(nèi)容教師姓名部門(mén)職務(wù)培訓(xùn)時(shí)間培訓(xùn)地點(diǎn)教師簽名參加培訓(xùn)人員簽名部門(mén)姓名部門(mén)姓名表2文件的確認(rèn)文件的確認(rèn)文件名文件編號(hào)存放地點(diǎn)《藥用炭質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》《微生物限度檢查法操作規(guī)程》《培養(yǎng)基適用性檢查操作程序》檢查人日期復(fù)核人日期

表3菌液計(jì)數(shù)結(jié)果菌液計(jì)數(shù)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果（個(gè)/ml）加菌量菌種培養(yǎng)基平皿號(hào)1天2天3天4天5天胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌12平均值枯草芽孢桿菌12平均值銅綠假單胞菌12平均值大腸埃希菌12平均值沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基白色念珠菌12平均值黑曲霉菌12平均值胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基陰性對(duì)照/沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基陰性對(duì)照/結(jié)果□合格□不合格結(jié)論檢查人/日期復(fù)核人/日期表4需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄培養(yǎng)結(jié)果（個(gè)/ml）加菌量菌種培養(yǎng)基平皿號(hào)被檢培養(yǎng)基對(duì)照培養(yǎng)基比值1天2天3天4天5天1天2天3天4天5天胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌1////////2////////平均值枯草芽孢桿菌1////////2////////平均值銅綠假單胞菌1////////2////////平均值白色念珠菌1////////2////////平均值黑曲霉菌1////////2////////平均值沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基白色念珠菌1////////2////////平均值黑曲霉菌1////////2////////平均值胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基陰性對(duì)照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基陰性對(duì)照結(jié)果□合格□不合格結(jié)論檢查人日期復(fù)核人日期表5需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證記錄需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證記錄供試品名稱批號(hào)生產(chǎn)廠家試驗(yàn)方法平皿法菌種加菌量項(xiàng)目平均菌落數(shù)結(jié)果123金黃色葡萄球菌試驗(yàn)組□合格□不合格菌液對(duì)照組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌數(shù)比值銅綠假單胞菌試驗(yàn)組□合格□不合格菌液對(duì)照組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌數(shù)比值枯草芽孢桿菌試驗(yàn)組□合格□不合格菌液對(duì)照組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌數(shù)比值白色念珠菌試驗(yàn)組□合格□不合格菌液對(duì)照組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌數(shù)比值黑曲霉菌試驗(yàn)組□合格□不合格菌液對(duì)照組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組菌數(shù)比值檢查人日期復(fù)核人日期表6控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查記錄控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查記錄試驗(yàn)項(xiàng)目促生長(zhǎng)能力抑制能力指示能力菌種大腸埃希菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌菌種代數(shù)第（）代第（）代第（）代加菌量（cfu/ml）試驗(yàn)結(jié)果培養(yǎng)基培養(yǎng)條件結(jié)果麥康凱液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度℃培養(yǎng)時(shí)間hr--------麥康凱液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度℃培養(yǎng)時(shí)間hr--------麥康凱瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度℃培養(yǎng)時(shí)間hr----麥康凱液體培養(yǎng)基陰性對(duì)照麥康凱瓊脂培養(yǎng)基陰性對(duì)照結(jié)果□合格□不合格結(jié)論檢查人日期復(fù)核人日期表7控制菌檢查方法驗(yàn)證控制菌檢查方法驗(yàn)證記錄供試品名稱批號(hào)生產(chǎn)廠家控制菌驗(yàn)證：大腸埃希菌供試液制備取供試品10g，加入pH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，使成1：10的供試液。取1：10的供試液1ml。培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)麥康凱液體培養(yǎng)基42～44℃培養(yǎng)24小時(shí)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基30～35℃培養(yǎng)18小時(shí)結(jié)果□合格□不合格檢查人日期復(fù)核人日期表8偏差清單偏差清單偏差編碼偏差描述發(fā)生偏差的項(xiàng)目檢查人日期復(fù)核人日期表9偏差報(bào)告偏差報(bào)告偏差編碼發(fā)生偏差的項(xiàng)目偏差描述及建議的糾正措施：驗(yàn)證人員簽名日期糾正措施的審核和批準(zhǔn)：質(zhì)監(jiān)中心主管簽名日期結(jié)果跟蹤：質(zhì)監(jiān)中心主管簽名日期（附相應(yīng)的偏差記錄）