小球藻的培養(yǎng)

小球藻的培養(yǎng)一、小球藻小球藻是單細(xì)胞植物，種類(lèi)較多，多數(shù)生活在淡水中，少數(shù)生活在海洋里。按植物學(xué)分類(lèi)，小球藻屬于小球藻綱綠藻目原球藻科生物，其體型小，直徑一般為3～5μm，在顯微鏡下，需要放大400～600倍才能看到，我們?nèi)庋劭吹降闹徊贿^(guò)是含有小球藻的綠色的水。小球藻所含的營(yíng)養(yǎng)成分很高，其蛋白質(zhì)含量達(dá)到50%～60%（相當(dāng)于花生米的2倍、雞蛋的5倍），含脂肪10%～30%，還含有多種維生素。小球藻的生物活性物質(zhì)糖蛋白和多糖體的含量也相當(dāng)高，這些生物活性物質(zhì)具有增強(qiáng)人體免疫力、抗癌、降血壓、抑制血糖上升、排除體內(nèi)毒素和迅速恢復(fù)機(jī)體損傷等功能。因此，小球藻的培養(yǎng)前景廣闊。作為培養(yǎng)原料的小球藻，可以到較清潔的池塘、水坑中采集綠色的水，在顯微鏡下鑒定，然后再用。也可以向培養(yǎng)它的人索取。1容器的準(zhǔn)備小規(guī)模的培養(yǎng)可用瓶、缸等，大規(guī)模的培養(yǎng)可用水泥池。首先，要對(duì)所使用的容器進(jìn)行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水沖刷數(shù)次。(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平稱(chēng)量5g2%漂白粉澄清液；②定量轉(zhuǎn)移至容量瓶中；③加水至1L；④混勻。2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水?dāng)噭?，再加水?00毫升，充分調(diào)勻后，待澄清后取上清液使用。）2培養(yǎng)液的準(zhǔn)備（1）BG11液體培養(yǎng)基配方：Stock1定容100mL檸檬酸0.3g檸檬酸鐵胺0.3gEDTANa20.05gStock2定容1000mLNaNO330gK2HPO40.78gMgSO4·7H2O1.5gStock3定容100mLCaCl2·2H2O1.9gStock4定容100mLNa2CO32gStock5定容1000mLH3BO32.86gMnCl2·4H2O1.81gZnSO4·7H2O0.222gNa2MnO4·2H2O0.391gCuSO4·5H2O0.079gCo(NO3)2·6H2O0.049gStock1取用2mLStock2取用20mLStock3取用2mLStock4取用1mLStock5取用1mL總定容1000mL（2）購(gòu)買(mǎi)2000元/套，九種原液各200ml（稀釋1000倍），10瓶。培養(yǎng)基各取1ml。聯(lián)系電話：153562722883藻種購(gòu)買(mǎi)：淘寶輪蟲(chóng)小球藻套裝。40元/一套4接種選取生活力強(qiáng)、生長(zhǎng)旺盛的藻種，在天氣晴朗的上午接種。一般情況下，作為第1級(jí)培養(yǎng)，可按藻液與培養(yǎng)液1∶2的比例進(jìn)行接種。接種的量大，可使藻種迅速成為培養(yǎng)液中的優(yōu)勢(shì)種，利用生物間的拮抗作用，減少了污染機(jī)會(huì)，縮短了小球藻的培養(yǎng)時(shí)間。待擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，可按藻液與培養(yǎng)液1∶4的比例進(jìn)行接種。5管理5.1攪拌由于小球藻不能游動(dòng)，只能浮在水中生活，所以必須對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行攪拌，讓藻體不斷變換位置，使光照、養(yǎng)料和水溫均衡，這樣有利于藻體的迅速生長(zhǎng)和繁殖。常用的攪拌工具有玻璃棒、竹棒，每天攪拌3次，每次1分鐘。5.2光照小球藻的培養(yǎng)要有充分的光照，陰雨天光線不足時(shí)，可在培養(yǎng)室內(nèi)用人工光源進(jìn)行補(bǔ)充，通常用冷白熒光燈，光照強(qiáng)度為2000～3000Lx；但在光線強(qiáng)烈的夏天，要用遮陽(yáng)網(wǎng)等進(jìn)行適當(dāng)避光。5.3溫度及pH溫度保持在25～30℃，最適宜生長(zhǎng)溫度為26℃。pH保持在6～8。5.4污染的防治在小球藻的培養(yǎng)過(guò)程中，要經(jīng)常觀察藻液的顏色是否正常、是否有沉淀和附壁現(xiàn)象、液面是否有菌膜等異常情況。造成藻種污染的多數(shù)情況是原生動(dòng)物及雜藻的生長(zhǎng)。如果顯微鏡下檢查有原生動(dòng)物生活，可用1mg/L的漂白粉滅殺。對(duì)付其他雜藻最好的辦法是嚴(yán)格控溫和經(jīng)常檢查培養(yǎng)液的pH。6采收當(dāng)小球藻的培養(yǎng)液變成綠色、用顯微鏡觀察1mL。培養(yǎng)液中大約有100個(gè)小球藻時(shí)，就可以采收或擴(kuò)大再培養(yǎng)了。采收時(shí)，用0.3%～0.5%的明礬粉溶解在培養(yǎng)液里，約1小時(shí)后，小球藻沉在了水底，除去上層的水，就能獲得小球藻的濃縮液。二、硅藻1.儲(chǔ)存液：(1)金屬液（每升含）EDTA二鈉-4.360g氯化鐵晶體-3.150g五水硫酸銅-0.010g七水硫酸鋅-0.022g六水氯化鈷-0.010g四水氯化錳-0.180g二水鉬酸鈉-0.006g(2)維生素液（每升含）VB12-0.0005g維生素B5鹽酸鹽-0.1g生物素-0.0005g2.1L培養(yǎng)基配方：硝酸鈉-0.075g二水合磷酸二氫鈉-0.00565g金屬液1.00ml維生素液1.00ml硅酸鈉50mg加水至1L。硅藻培養(yǎng)溫度在22℃，光照照度在3000lux（不要太陽(yáng)直射）以上。大量培養(yǎng)中曾出現(xiàn)過(guò)雜藻污染問(wèn)題,主要是浮游的藍(lán)纖維藻及部分柵藻和小球藻。我們利用藻類(lèi)比重、懸浮習(xí)性不同來(lái)排除雜藻。發(fā)現(xiàn)雜藻時(shí),停止攪拌數(shù)小時(shí),使硅藻下沉,藍(lán)纖維藻等懸浮在水中。然后將上清液傾棄,再將沉淀硅藻用蒸餾水反復(fù)清洗幾次后,加入新鮮培養(yǎng)基,即可獲得純化。補(bǔ)充：

1．藻種培養(yǎng)設(shè)施：藻種的培養(yǎng)要在保種室中進(jìn)行，保種室要求通風(fēng)條件好，光線條件好，溫度可控性好，保種室要配有空調(diào)、冰箱、具有人工光源的培養(yǎng)架等。培養(yǎng)中常用培養(yǎng)儀器有顯微鏡、解剖鏡等，容器有三角燒瓶、廣口玻璃瓶等。保種室要嚴(yán)格消毒，防止病菌的侵入。

2．容器、工具的消毒：進(jìn)行單細(xì)胞藻類(lèi)的純培養(yǎng)，容器、工具、培養(yǎng)基都要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，但一般生產(chǎn)性的單種培養(yǎng)，則只須達(dá)到消毒目的就可以了。常用的消毒方法有高溫消毒法和化學(xué)藥品消毒法。

高溫消毒法是利用高溫殺死微生物的方法。不耐高溫的容器如塑料和橡膠制品等不能利用高溫法消毒。a、直接灼燒消毒

接種環(huán)、鑷子等金屬小工具，試管口、瓶口等可以直接在酒精燈火焰上短暫灼燒消毒。載玻片、小刀等則最好先蘸酒精，然后在酒精燈火焰上點(diǎn)燃，等器具上的酒精燒完，也就完成了滅菌操作。b、煮沸消毒

把容器、工具放入鍋中，加水煮沸消毒，一般煮沸10-20分鐘。大型錐形瓶消毒，可在瓶口上放一普通的玻璃漏斗，再在漏斗上放一稱(chēng)量瓶蓋，在錐形瓶?jī)?nèi)加少量淡水，置電爐上加熱煮沸5-10分鐘，可使整個(gè)瓶壁消毒。消毒完畢即用消毒的紙或消毒的紗布包扎瓶口。此法適合消毒小型的容器工具。c、烘箱干燥消毒

將玻璃容器、金屬工具用清水洗干凈后，放入烘箱。關(guān)閉烘箱門(mén)，打開(kāi)通氣孔，接通電源加熱。當(dāng)溫度上升到120℃時(shí)，關(guān)閉通氣孔，停止加熱。如果進(jìn)行純培養(yǎng)，容器必須滅菌，當(dāng)溫度上升到105℃時(shí)，關(guān)閉通氣孔，繼續(xù)加熱至160℃，保持溫度，恒溫2小時(shí)，然后停止加熱。必須要等到溫度下降到60℃以下，才能打開(kāi)烘箱門(mén)。有棉塞和紙包扎的容器、工具滅菌，不能超過(guò)180℃，以免烘焦。

化學(xué)藥品消毒主要用于生產(chǎn)性大量培養(yǎng)中，大型容器、工具、水泥池等常用化學(xué)藥劑消毒。a、漂白粉消毒工業(yè)用漂白粉一般含有效氯25%~35%，消毒時(shí)按萬(wàn)分之1-3的含量配成水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡半小時(shí)，再用消毒水沖洗3~4次即可。b、酒精消毒酒精消毒常用于中小形容器和工具，方法是用紗布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹即可。c、高錳酸鉀消毒以百分之五的比例配成溶液把要消毒的容器、工具浸泡5分鐘，然后取出用消毒水沖洗2~3次，便可達(dá)到消毒目的。如果是對(duì)玻璃鋼水槽、水泥池等消毒，可以用高錳酸鉀溶液撥在池壁上，撥灑幾遍后刷洗池底，10分鐘后再用消毒水沖洗干凈。d

石炭酸石炭酸消毒按3%~5%的比例配成消毒液，把要消毒的容器和工具放在其中浸泡半小時(shí)，再用消毒水沖洗2~3次。

微藻的培養(yǎng)液是在消毒的海水或淡水中加入各種營(yíng)養(yǎng)鹽配制而成。培養(yǎng)液的配制，首先按配方先后稱(chēng)量各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可逐一溶解，也可以同時(shí)溶解。遇到難溶的含金屬的物質(zhì)可以加熱或與NaEDTA一起溶解，配方中的維生素一般等水溫降至60℃后再加。生產(chǎn)上為了方便可以將營(yíng)養(yǎng)鹽配方濃縮1000-2000倍配成母液，使用時(shí)可以根據(jù)培養(yǎng)水體多少量取母液的體積即可。

3．培養(yǎng)液的制備和消毒：保種培養(yǎng)液的消毒一般采用加熱消毒法，經(jīng)沉淀、過(guò)濾的海水，一般加溫至90℃左右維持5分鐘或達(dá)到沸騰即可。由于海水中的一些對(duì)藻類(lèi)生長(zhǎng)有促進(jìn)作用的有機(jī)物在高溫時(shí)易遭破壞，所以加溫時(shí)間不宜太長(zhǎng)。

4．接種：接種就是把作為藻種的藻液接入新配好的培養(yǎng)液中，進(jìn)行豐富培養(yǎng)。選擇無(wú)污染、生長(zhǎng)旺盛、顏色正常、藻液中無(wú)沉淀、細(xì)胞無(wú)附壁的藻種進(jìn)行接種。一般來(lái)說(shuō)藻種液和新培養(yǎng)液的比例為1:2。接種的時(shí)間最好在上午的8~10時(shí)，這個(gè)時(shí)間是藻類(lèi)細(xì)胞代謝最旺盛的時(shí)候。培養(yǎng)條件:保種的條件最好保證在藻種的最適生長(zhǎng)條件，要保證藻種不受污染。

5．藻種培養(yǎng)：

溫度保持在25

～30

℃。pH

保持在6～8

。

6．日常培養(yǎng)管理:1）注意保種室的衛(wèi)生，定時(shí)打掃，謝絕無(wú)關(guān)人員的進(jìn)入等；2）外觀檢查。檢查藻液顏色是否不再淺變濃，或是出現(xiàn)渾濁或沉降等反映藻體生長(zhǎng)不正常，處于老化時(shí)期受到病蟲(chóng)侵染的現(xiàn)象。3）鏡檢檢查是否發(fā)生污染，是否老化，以確保試驗(yàn)的順利進(jìn)行。4）控制溫度。通過(guò)暖氣控溫裝置控制溫度，使試驗(yàn)藻細(xì)胞在適宜的溫度環(huán)境中。5）搖瓶。在培養(yǎng)過(guò)程中每天搖瓶1-3次,使藻均勻分布。6)

調(diào)節(jié)光強(qiáng)。

保持合適的光強(qiáng)，白天避免陽(yáng)光直射。

7．

藻種保藏方法：存藻種時(shí)可以根據(jù)保種目的和保種條件的不同分別采取不同的保種方法。1）固體培養(yǎng)基保存法。保種用的固體培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)濃度應(yīng)比正常的液體培養(yǎng)液的高，一般增加一倍。瓊脂量為1-1.5%。固體培養(yǎng)基分裝滅菌后，冷卻待用。將無(wú)污染的藻種用噴霧法或劃線法接種到固體培養(yǎng)基上。常用固體培養(yǎng)基保種方法有兩種，一種通常把藻種接種在固體培養(yǎng)基上，在弱光低溫條件下慢慢培養(yǎng)保存，接種一次可以保存半年到一年。另一種方法，接種后首先放在光線充足的地方（防止直射光照射），使藻類(lèi)細(xì)胞較快速地繁殖起來(lái)，直到培養(yǎng)基上出現(xiàn)顏色，即可放入冰箱或冷庫(kù)中，一般在5℃左右的低溫下保存。每天給藻種幾個(gè)小時(shí)的弱光照。此法保存的時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)2至3年。2）液體培養(yǎng)基保存法。低溫、弱光下培養(yǎng)。一般兩個(gè)月更換一次培養(yǎng)液。淡水小球藻在國(guó)內(nèi)的培養(yǎng)有幾十年的歷史，因?yàn)榕囵B(yǎng)方式簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)速度快，被譽(yù)為罐裝的太陽(yáng)，一度被大力推廣。小球藻是培育淡水輪蟲(chóng)的有效餌料之一。

淡水小球藻的培養(yǎng)，無(wú)非幾個(gè)要素，光照、適宜的溫度、營(yíng)養(yǎng)液。首先說(shuō)一下光照，一般是大于4500lx，溫度以25℃為最佳，在25-30度間都能夠很好的生長(zhǎng)，每20個(gè)小時(shí)就能分裂成4個(gè)細(xì)胞。那么第三個(gè)要素是營(yíng)養(yǎng)液，而營(yíng)養(yǎng)液無(wú)非就是氮源、磷源、碳源及一些微量元素，目前使用較多的營(yíng)養(yǎng)液配方有BG-11、F/2、SE培養(yǎng)基等，同時(shí)強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)表明，適當(dāng)補(bǔ)充尿素是促進(jìn)小球藻生長(zhǎng)的一個(gè)很好的方式，同時(shí)小球藻可以異養(yǎng)，適當(dāng)添加葡萄糖可以縮短培養(yǎng)時(shí)間。藻種的獲得很容易，但是建議用純種的規(guī)范操作的藻種，好的種源是開(kāi)口的第一步，現(xiàn)在藻種獲得可以通過(guò)某寶直接搜索小球藻藻種購(gòu)買(mǎi)，也可以通過(guò)向水生所采購(gòu)，但是那里藻種普遍較貴，差不多1000大洋10ml左右，如果不是科研要求，不建議如此購(gòu)買(mǎi)，還有就是通過(guò)科研院校索要。首先我們要獲得小球藻藻種，這個(gè)