免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用

關(guān)于免疫學(xué)技術(shù)在食品科學(xué)中的應(yīng)用第1頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月

第八章免疫學(xué)檢測技術(shù)免疫學(xué)檢測技術(shù)以其靈敏度高、專一性強和速度快等顯著特點廣泛用于食品的品質(zhì)、質(zhì)量、安全以及食品中生物活性成分的檢測與分析。第2頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月

第一節(jié)抗原抗體的檢測第3頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月一.抗原抗體反應(yīng)

指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)，是免疫球蛋白分子上的抗原結(jié)合位和抗原分子上的抗原決定簇相互吸引以及多種分子間的引力參與下發(fā)生的反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)可發(fā)生于體內(nèi)，也可發(fā)生于體外。第4頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月抗原抗體抗原與抗體之間通過非共價鍵結(jié)合，它們之間的結(jié)合力包括電荷引力、范德華力、氫鍵結(jié)合力和疏水作用力。多種非共價結(jié)合力使抗原抗體緊密結(jié)合在一起?？乖c抗體結(jié)合力第5頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月抗原與抗體反應(yīng)特點抗原抗體1、特異性：抗原抗體在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關(guān)系，兩者結(jié)合具有高度特異性。2、按比性：兩者分子比例合適時才出現(xiàn)最強的反應(yīng)。3、可逆性：改變pH和離子強度是最常用的促解離方法。第6頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月抗原與抗體反應(yīng)的影響因素1）抗原抗體性質(zhì)：互補程度2）酸堿度：pH6-8

溫度：37度電解質(zhì)：0.85%氯化鈉或各種緩沖液第7頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月二.利用抗原抗體反應(yīng)的實驗主要用途：用已知的抗原檢測未知的抗體。用已知的抗體檢測未知的抗原。定性或定量檢測體內(nèi)各種大分子，如：細(xì)胞因子，免疫球蛋白。

第8頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月二.利用抗原抗體反應(yīng)的實驗免疫凝集試驗

免疫沉淀反應(yīng)

免疫標(biāo)記技術(shù)其他

第9頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月1.免疫凝集試驗

顆?？乖?例；細(xì)菌、紅細(xì)胞）或可溶性抗原結(jié)合于不容性載體微粒上后與相應(yīng)的抗體在適當(dāng)?shù)臈l件下，經(jīng)一定時間后凝集成肉眼可見的凝集物。直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)免疫凝集反應(yīng)第10頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月顆?？乖鄳?yīng)抗體直接凝集反應(yīng)

顆?？乖?例；細(xì)菌、紅細(xì)胞）與相應(yīng)的抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象稱為直接凝集反應(yīng)。直接凝集反應(yīng)肉眼可見的凝集物直接凝集試驗試管法玻片法第11頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月

將可溶性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面，然后與相應(yīng)的抗體(或抗原)作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng)。載體：人或動物的紅細(xì)胞、活性碳顆粒、聚苯乙烯膠乳等。載體增大抗原（或抗體）反應(yīng)面積。間接凝集反應(yīng)第12頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月可溶性抗原不容性載體相應(yīng)抗體正向間接凝集反應(yīng)可溶性抗體不容性載體可溶性相應(yīng)抗原反向間接凝集反應(yīng)待測標(biāo)本相應(yīng)抗體致敏抗原凝集不凝集間接凝集抑制反應(yīng)可溶性抗體SPA相應(yīng)抗原協(xié)同凝集反應(yīng)第13頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月常用于食品安全檢測，如：食物中微生物志賀氏菌污染檢測。具體方法：SPA（StaphylococcalProteinA,金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的一種蛋白質(zhì)成分）具有同人和多種哺乳動物IgG分子Fc段結(jié)合的能力。結(jié)合到SPA上的志賀氏菌抗體與志賀氏菌產(chǎn)生特異性的凝集反應(yīng)，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，從而用于快速檢測。免疫凝集試驗應(yīng)用第14頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月2.免疫沉淀反應(yīng)免疫沉淀反應(yīng)（precipitation）是指可溶性抗原（細(xì)菌培養(yǎng)液、細(xì)胞或組織浸出液、血清蛋白等）與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在電解質(zhì)參與下出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。該反應(yīng)多用于半固體瓊脂作為介質(zhì)，抗原抗體在凝膠中擴散，在比例合適處形成白色沉淀。第15頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月單向免疫擴散單向免疫擴散（singleimmunodiffusion)將一定量的已知抗體均勻混于瓊脂凝膠中制成瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后加入抗原?？變?nèi)抗原向四周呈環(huán)狀形成濃度梯度，在抗原與抗體的量達到一定比例時即可形成肉眼可見的沉淀環(huán)。第16頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月抗原抗體雙向免疫擴散雙向瓊脂擴散（doubleimmunodiffusetest)可溶性抗原和抗體在含有電解質(zhì)的同一個瓊脂凝膠板的對應(yīng)孔中，各自向四周凝膠中擴散，如果兩者相對應(yīng)，則發(fā)生特異性反應(yīng)，在濃度比例合適處形成肉眼可見的白色沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原的相關(guān)性分析。第17頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月將抗原樣品先進行電泳，使其中的各種成分彼此分開，然后加入抗體做雙向免疫擴散，以分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇，在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤剑纬扇庋劭梢姷某恋砘?。免疫電泳?8頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月

常用于食品安全檢測，對食品中污染病源菌的定性和監(jiān)別，以及食品中的某些成分。如：單向免疫擴散法檢測牛乳中免疫球蛋白含量。免疫沉淀試驗應(yīng)用第19頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月3.免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)immunolabellingtechnique指用熒光素，放射性核素，酶、化學(xué)發(fā)光劑等作為追蹤物，標(biāo)記抗體或抗原進行的抗原抗體反應(yīng)。具有靈敏度和特異性高，快速，可定性、定量等檢測。第20頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫標(biāo)記技術(shù)分類酶標(biāo)記免疫學(xué)分析EIA放射線標(biāo)記免疫學(xué)分析RIA免疫熒光法IF第21頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月酶標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù)將酶催化作用的高效性與抗原抗體的特異性相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體后形成的酶標(biāo)記物，既保留抗原或抗體的免疫活性，又保留了酶的催化活性。當(dāng)酶標(biāo)記物與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原或抗體相互作用時，可形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物。利用復(fù)合物上標(biāo)記的酶催化底物顯色，其顏色的深淺與待測標(biāo)本中抗原或抗體的量相關(guān)。靈敏度：ng-pg,常用酶:辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶第22頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月酶標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting)酶免疫組化技術(shù)（enzymeimmunohistochemistrytechnique)其它第23頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月ELISA:enzymelinkedimmunosorbentassay

將已知抗體（抗原）包被于載體上，再加上抗原-抗體反應(yīng)使酶標(biāo)記抗體（抗原）結(jié)合在載體上，經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)記抗體（抗原）后加入底物顯色，定性或定量分析有色產(chǎn)物確定待測物的存在與含量的檢測技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)第24頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)間接法雙抗體夾心法競爭法第25頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)間接法抗原抗體一抗二抗底物產(chǎn)物第26頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)雙抗體夾心法（三明治)抗原抗體酶標(biāo)抗體底物產(chǎn)物第27頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)競爭法EEEEEEEEEEEE測定對照抗原底物產(chǎn)物抗體E酶標(biāo)抗原第28頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月ELISA廣泛應(yīng)用于食品科學(xué)領(lǐng)域。食品中農(nóng)藥殘留檢測食品中抗生素殘留檢測食源性病原菌檢測食品安全檢測食品成分提取功能性食品研究第29頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting)將凝膠電泳的高分辨力同固相免疫測定結(jié)合起來的一種方法。先將復(fù)合物在分離膠中分離，然后將這些分子轉(zhuǎn)移至膜上，再用特異性的抗體來鑒定這些單個的抗原成分。第30頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting)

SDS

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印酶免疫測定可應(yīng)用于蛋白質(zhì)提取及分析等許多方面。三項技術(shù)結(jié)合而成。第31頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫印跡技術(shù)(Immuno-blotting)CBBImmunoblottingLWPCLWPC第32頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月酶免疫組化技術(shù)以酶標(biāo)抗體與組織或細(xì)胞的抗原進行反應(yīng)，結(jié)合形態(tài)學(xué)檢查，對抗原進行定性、定量或定位檢測的技術(shù)。用于測定組織或細(xì)胞表面的抗原。第33頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月3.免疫標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)記免疫學(xué)分析EIA放射線標(biāo)記免疫學(xué)分析RIA免疫熒光法IF第34頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月放射線標(biāo)記免疫學(xué)分析RIA

用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體進行免疫學(xué)檢測的免疫標(biāo)記技術(shù)。該法靈敏度高達pg。常用的放射性同位素有125I和131I。應(yīng)用于食品安全檢測，食品中農(nóng)藥殘留、激素等檢測。第35頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫熒光法IF直接法—熒光素直接標(biāo)記抗體，對標(biāo)本進行檢測。特異性強，但任一抗原均需制備熒光素抗體間接法—用第一抗體與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗進行檢測。靈敏度高、熒光素標(biāo)記的二抗可用于多種抗原的檢測，但非特異性熒光增多。第36頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月

第二節(jié)淋巴細(xì)胞的測定

測定淋巴細(xì)胞的功能，可以判斷機體的細(xì)胞免疫或體液免疫水平。測定淋巴細(xì)胞功能試驗應(yīng)用于功能性食品等研究中。第37頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月T淋巴細(xì)胞增殖試驗T細(xì)胞功能測定細(xì)胞毒試驗第38頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月T淋巴細(xì)胞增殖試驗T淋巴細(xì)胞在有絲分裂原或抗原刺激下可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，產(chǎn)生一系列形態(tài)變化。細(xì)胞變大、細(xì)胞漿增多、出現(xiàn)空泡、核仁明顯、核染色質(zhì)疏松等。第39頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月T淋巴細(xì)胞增殖試驗形態(tài)學(xué)方法--鏡檢淋巴母細(xì)胞3H-TdR摻入法—氚標(biāo)記胸腺嘧啶核苷（Thymidineribosode)滲入法。測定DNA增殖的量(也可用于測NK細(xì)胞活性)MTT比色法—細(xì)胞活化增殖水平（可溶性噻唑鹽，代謝后產(chǎn)生蘭紫色物）T淋巴細(xì)胞增殖試驗T淋巴細(xì)胞增殖試驗第40頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)，計算淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，即淋巴母細(xì)胞的含量形態(tài)學(xué)方法第41頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中，細(xì)胞DNA合成大量增多。在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR

），使3H-TdR滲入到DNA中，根據(jù)細(xì)胞內(nèi)核素的量可判斷淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度。3H-TdR摻入法第42頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月MTT比色法

MTT是一種黃色可溶性噻唑鹽，摻入細(xì)胞后，在細(xì)胞活化增殖時通過線粒體能量代謝過程，MTT代謝形成藍紫色甲瓚沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍，形成的甲瓚的量與細(xì)胞活化增殖的程度成正相關(guān)。第43頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞毒試驗細(xì)胞毒試驗乳酸脫氫酶法細(xì)胞凋亡檢查法第44頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月乳酸脫氫酶法—LDH在胞漿內(nèi)含量豐富，正常時不能通過細(xì)胞膜，當(dāng)細(xì)胞受損傷或死亡時可釋放到細(xì)胞外，此時細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性與細(xì)胞死亡的數(shù)目成正比，用比色法測定。乳酸脫氫酶法第45頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞凋亡檢查法—靶細(xì)胞被CTL殺傷后，可發(fā)生細(xì)胞凋亡。方法有形態(tài)學(xué)法、瓊脂糖凝膠電泳、流式細(xì)胞儀等。細(xì)胞凋亡檢查法第46頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月B細(xì)胞功能測定B細(xì)胞的數(shù)目和功能測定是反應(yīng)機體體液免疫水平的重要指標(biāo)。第47頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月抗體形成細(xì)胞試驗用綿羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫家