酵母菌形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的觀察

酵母菌形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的觀察第一頁，共23頁。目的要求觀察酵母形態(tài)，加深理解酵母的形態(tài)特征美藍(lán)染色鑒定酵母的死活學(xué)習(xí)使用目鏡測微尺和鏡臺測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。第二頁，共23頁。實驗材料顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、血球記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、美藍(lán)、無菌滴管、吸水紙、擦鏡紙、香柏油、擦鏡油。第三頁，共23頁。實驗程序5-1:測定微生物的大小5-2:測定微生物數(shù)量5-3:酵母的形態(tài)特和美藍(lán)染色鑒定酵母的死活第四頁，共23頁。實驗5-1:酵母的形態(tài)特和美藍(lán)染色鑒定酵母的死活

第五頁，共23頁。實驗5-1a：Yeasts(unicellularfungi)Division:buddingDonotformfilamentsSomeformfilamentsSomecanmate.第六頁，共23頁。蜉蝣體表面的酵母菌第七頁，共23頁。面包酵母出芽生殖中的啤酒酵母第八頁，共23頁。實驗5-1:測定微生物的大小第九頁，共23頁。

測定的工具：目鏡測微尺鏡臺測微尺第十頁，共23頁。實驗5-1實驗程序（測定微生物的大?。┠跨R測微尺的校正：在高倍鏡下，看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行，移動推動器，使目鏡測微尺的0點與鏡臺測微尺的某一刻度重合，然后，仔細(xì)尋找兩尺第二個完全重合的刻度。計算兩刻度間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。由于鏡臺測微尺的刻度每格長10μm，所以可得：目鏡測微尺每格長度（μm）=（鏡臺測微尺格數(shù)×10）/目鏡測微尺格數(shù)注意：校正目鏡測微尺必須針對特定的顯微鏡和附件（特定的接物鏡、接目鏡、鏡筒長度等）進(jìn)行，而且只能在這特定的情況下才可重復(fù)使用。菌體大小的測定：取下鏡臺測微尺，將細(xì)菌染色標(biāo)本置于載物臺上，然后在油鏡下用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。第十一頁，共23頁。第十二頁，共23頁。實驗5-2:測定微生物數(shù)量

第十三頁，共23頁。實驗5-2實驗程序（測定微生物數(shù)量）方法：活菌計數(shù)法——平板菌落計數(shù)法；總菌計數(shù)法——血球計數(shù)板或霍瑟（PeroffHausser）細(xì)菌計數(shù)板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。

第十四頁，共23頁。第十五頁，共23頁。第十六頁，共23頁。實驗程序Ⅱ1（測定微生物數(shù)量）

1.取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋玻片。2.取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。3.

靜止5min后，用低倍鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。

4.在高倍鏡下計數(shù)：隨機(jī)計數(shù)五個中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。第十七頁，共23頁。實驗程序Ⅱ2

5.計算方法：

6.注意事項：壓在方格線上的菌體，以壓在底線和右側(cè)線上的菌體計入本格內(nèi)；遇到有芽體的酵母時，若芽體和母體同等大，就按單個酵母計數(shù)。

7.計數(shù)完畢后，血球計數(shù)板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)。

（X1+X2+X3+X4+X5）5*25（或16）*10*1000*稀釋倍數(shù)

酵母菌細(xì)胞數(shù)/mL=第十八頁，共23頁。實驗5-3：美藍(lán)染色死活細(xì)胞鑒定美藍(lán)為無毒染料，其氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。通過美藍(lán)染色，檢驗細(xì)胞的還原能力?；罴?xì)胞還原能力強(qiáng)，在特定時間內(nèi)將美藍(lán)還原為無色。老化、死亡細(xì)胞呈藍(lán)色、淡藍(lán)色。第十九頁，共23頁