生化檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證

生化檢測(cè)系統(tǒng)

2021/5/91為什么要做性能驗(yàn)證？《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》《ISOl5189—醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》

二者均要求，設(shè)備在臨床應(yīng)用之前必須要進(jìn)行性能驗(yàn)證；

目的：確定設(shè)備能達(dá)到所要求的性能指標(biāo)；設(shè)備的性能是否合格，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性起決定性的作用。2021/5/92什么是性能評(píng)價(jià)？

自行研究或開發(fā)了一個(gè)檢測(cè)方法，為了使方法的檢測(cè)結(jié)果符合臨床要求，必須對(duì)方法的性能作詳細(xì)而全面的實(shí)驗(yàn)，這時(shí)的實(shí)驗(yàn)是對(duì)性能的評(píng)價(jià)。通常是生產(chǎn)廠家完成。2021/5/93什么是性能驗(yàn)證？

對(duì)他人或廠商的評(píng)價(jià)資料中的幾個(gè)主要性能進(jìn)行證實(shí)。

通常由實(shí)驗(yàn)室自己完成。2021/5/94性能驗(yàn)證試驗(yàn)

對(duì)配套系統(tǒng)，一般驗(yàn)證下列指標(biāo)：

―準(zhǔn)確度(accuracy)---EP15-A―精密度(precision)---EP5-A2―線性范圍（linearrange)---EP-6―可報(bào)告范圍(reportablerange)---EP-6―參考區(qū)間(referenceinterval)---C28-A2

對(duì)非配套系統(tǒng)，驗(yàn)證更為廣泛。2021/5/95什么時(shí)候做性能驗(yàn)證試驗(yàn)？1.方法或系統(tǒng)首次在實(shí)驗(yàn)室使用；

2.EQA或PT結(jié)果未通過，采取糾正措施后；

3.達(dá)到文件規(guī)定周期2021/5/96做性能驗(yàn)證時(shí)首先滿足的實(shí)驗(yàn)條件儀器的維護(hù)保養(yǎng)儀器校準(zhǔn)室內(nèi)質(zhì)控試劑、校準(zhǔn)品（有效期、批號(hào)等）人員（SOP）

保證儀器在最佳狀態(tài)2021/5/97一.精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)2021/5/98基本概念

測(cè)量精密度(measurementprecision)

在規(guī)定條件下，對(duì)同一或相似被測(cè)對(duì)象重復(fù)測(cè)量得到測(cè)量示值或測(cè)得量值間的一致程度。

1.測(cè)量精密度通常由不精密度的量度以數(shù)字表達(dá)，如規(guī)定測(cè)量條件下的標(biāo)準(zhǔn)差、方差和變異系數(shù)。

2.規(guī)定的條件可以是測(cè)量的重復(fù)性條件、測(cè)量的中間精密度條件或測(cè)量的再現(xiàn)性條件。

3.測(cè)量精密度用于定義測(cè)量重復(fù)性、中間測(cè)量精密度和測(cè)量再現(xiàn)性。2021/5/99基本概念測(cè)量重復(fù)性在一組測(cè)量條件下的測(cè)量精密度，包括相同測(cè)量程序、相同操作者、相同測(cè)量系統(tǒng)、相同操作條件和地點(diǎn)，并且在短時(shí)間段內(nèi)對(duì)同一或相似被測(cè)對(duì)象重復(fù)測(cè)量。

1.在臨床化學(xué)上，即所謂的批內(nèi)精密度。

2.在評(píng)估體外診斷醫(yī)療器械時(shí)，通常重復(fù)性條件來代表基本不變的測(cè)量條件（被稱為重復(fù)性條件），產(chǎn)生的測(cè)量結(jié)果是最小變異。3.重復(fù)性信息可對(duì)故障排除目的有用處。

2021/5/910基本概念測(cè)量再現(xiàn)性：在包括了不同地點(diǎn)、不同操作者、不同測(cè)量系統(tǒng)的測(cè)量條件下對(duì)同一或相似被測(cè)對(duì)象重復(fù)測(cè)量的測(cè)量精密度。

1.在臨床化學(xué)上，即所謂的室間精密度。

2.在評(píng)估體外診斷醫(yī)療器械時(shí)，通常再現(xiàn)性條件代表了最大改變的條件（被稱為再現(xiàn)性條件），產(chǎn)生于獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室間比較結(jié)果時(shí)遇到的測(cè)量結(jié)果變異，如發(fā)生在室間比對(duì)計(jì)劃中（例如，能力比對(duì)）。

2021/5/911基本概念3.不同測(cè)量系統(tǒng)可使用不同測(cè)量程序。

4.應(yīng)在實(shí)際程度上給出改變或不改變條件的說明。2021/5/912基本概念中間精密度在一組測(cè)量條件下的測(cè)量精密度，這些條件包括相同的測(cè)量程序、相同地點(diǎn)并且對(duì)相同或相似的被測(cè)對(duì)象在一長時(shí)間段內(nèi)重復(fù)測(cè)量，但可包含其它相關(guān)條件的改變。

1.應(yīng)在實(shí)際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準(zhǔn)物、試劑批號(hào)、設(shè)備系統(tǒng)、操作者和環(huán)境條件等變量。

2.在體外診斷醫(yī)療器械評(píng)價(jià)中，一般中間精密度條件代表醫(yī)療器械在一長時(shí)間段內(nèi)的實(shí)際使用條件。2021/5/913文件依據(jù)CLSI（原NCCLS）頒布的EP5-A2文件《定量測(cè)量方法的精密度性能評(píng)價(jià)-批準(zhǔn)指南第二版》2021/5/914實(shí)驗(yàn)方法批內(nèi)精密度在相同的測(cè)量條件下，在最短時(shí)間內(nèi)（常是在同一測(cè)量批次內(nèi)）對(duì)同一樣品測(cè)量20次，由此計(jì)算出批內(nèi)精密度。2021/5/915實(shí)驗(yàn)方法批間精密度在一段時(shí)間內(nèi)（一般為連續(xù)20個(gè)工作日）對(duì)同一樣品（常為質(zhì)控品），每天測(cè)定一次，每次測(cè)定雙份，由此計(jì)算出批間精密度。如果時(shí)間緊，也可改為測(cè)5日，每天分2批進(jìn)行，每批重復(fù)測(cè)定2次，每次至少間隔2h，每個(gè)濃度每天能獲得4個(gè)數(shù)據(jù)。由此計(jì)算出總精密度。2021/5/916實(shí)驗(yàn)樣本的選擇1.實(shí)驗(yàn)樣本要穩(wěn)定，其基質(zhì)組成應(yīng)盡可能與臨床樣本相似。一般常采用臨床實(shí)驗(yàn)室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清；

2.實(shí)驗(yàn)樣本的濃度盡可能選擇與廠商聲明性能相近的濃度或接近該項(xiàng)目醫(yī)學(xué)決定水平的濃度。

3.通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質(zhì)的質(zhì)控物作為實(shí)驗(yàn)樣品。2021/5/917樣本濃度的選擇1.精密度大小和樣品濃度有關(guān)樣品濃度高時(shí)，雖然標(biāo)準(zhǔn)差的絕對(duì)值較大，但變異系數(shù)往往變小。所以評(píng)估精密度時(shí)，建議評(píng)估高低二個(gè)濃度的精密度。當(dāng)二個(gè)濃度的精密度有顯著差異時(shí)，建議增加為三個(gè)濃度。2021/5/918樣本濃度的選擇2.所選濃度應(yīng)在測(cè)量范圍內(nèi)有醫(yī)學(xué)意義的值，即至少有一個(gè)濃度在醫(yī)學(xué)決定水平(medicaldecisionlevels)左右。

不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測(cè)量范圍。也不應(yīng)選用靠近最低檢出限的樣品，此時(shí)所得的精密度往往偏大。如沒有醫(yī)學(xué)決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個(gè)濃度。此外再根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇一個(gè)值。2021/5/919試劑和校準(zhǔn)品的要求

在整個(gè)階段，盡可能使用相同條件，應(yīng)使用同一種類同一批號(hào)的試劑和校準(zhǔn)物，如有可能，只進(jìn)行一次校準(zhǔn)。使用不同批號(hào)試劑和多次校準(zhǔn)都會(huì)增加檢驗(yàn)結(jié)果的變異程度。2021/5/920質(zhì)量控制

檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)同時(shí)至少測(cè)一個(gè)質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不論實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進(jìn)行試驗(yàn)以取得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。要保存所有的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和失控處理記錄。2021/5/921在正式實(shí)驗(yàn)前操作者應(yīng)熟練掌握1.操作程序

2.保養(yǎng)程序

3.樣本準(zhǔn)備

4.校準(zhǔn)及檢測(cè)程序

2021/5/922數(shù)據(jù)收集

分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outliers)。離群值的標(biāo)準(zhǔn)：任何結(jié)果和總均值的差超過4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。為了能收集到至少20個(gè)有效數(shù)據(jù)，除補(bǔ)充由于質(zhì)控失控而增加的測(cè)試外，還應(yīng)再增加由于離群值不用于精密度的計(jì)算所需增加的檢驗(yàn)次數(shù)。2021/5/923數(shù)據(jù)收集

進(jìn)行批內(nèi)精密度評(píng)估實(shí)驗(yàn)時(shí)，一次只能有一個(gè)離群值，當(dāng)不接受數(shù)據(jù)超過2個(gè)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)，檢查問題和解決問題后重新開始新的評(píng)估實(shí)驗(yàn)。*必須保留任何離群值和室內(nèi)質(zhì)控失控的記錄。2021/5/924結(jié)果分析

計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。從CLIA’88允許誤差表中查閱評(píng)價(jià)的該項(xiàng)目的允許誤差范圍。

2021/5/925判斷標(biāo)準(zhǔn)批內(nèi)精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。批間精密度—CV值要求低于1/3CLIA’88允許誤差。2021/5/926CLIA’88允許誤差范圍不涉及的項(xiàng)目：

EQA的允許誤差試劑說明書提供2021/5/927二.正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)2021/5/928基本概念準(zhǔn)確度（accuracy）指檢測(cè)結(jié)果與被測(cè)量真值之間的一致程度。正確度（truness）指大批檢測(cè)結(jié)果得到的平均值與真值的一致程度。通常用統(tǒng)計(jì)量“偏倚”來表示。偏倚（bias）指測(cè)量結(jié)果的預(yù)期值與可接受值間的差異。以檢測(cè)計(jì)量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。2021/5/929基本概念誤差（error）指對(duì)于真值或?qū)τ诳山邮艿?、預(yù)期真值或參考值的偏離，分為隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差?？傉`差（totalerror）指某實(shí)驗(yàn)室用某方法在多次獨(dú)立檢驗(yàn)中分析某樣品所得各個(gè)結(jié)果值與靶值之差在一定置信區(qū)間內(nèi)的最大值。包括隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，是不準(zhǔn)確度的估計(jì)值。2021/5/930文件依據(jù)CLSI頒布的EP15-A文件《用戶對(duì)精密度和準(zhǔn)確度性能的核實(shí)指南》2021/5/931實(shí)驗(yàn)方法參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)測(cè)定具有溯源性的校準(zhǔn)物質(zhì)

2021/5/932實(shí)驗(yàn)程序

對(duì)權(quán)威機(jī)構(gòu)提供的室間質(zhì)控物進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與已知靶值和可接受限進(jìn)行比較。2021/5/933定值參考物來源1.已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人物質(zhì)；2.從能力比對(duì)試驗(yàn)中獲得的參考物；3.廠家提供的正確度確認(rèn)物或質(zhì)控物；4.實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)物；5.由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質(zhì)。2021/5/934實(shí)驗(yàn)程序

選擇適合評(píng)價(jià)的檢驗(yàn)方法最易獲得的材料。至少要求測(cè)定2個(gè)水平，選擇的水平應(yīng)能代表方法的最低和最高測(cè)量范圍。實(shí)驗(yàn)前充分混勻分析物，用實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)測(cè)定2次，將檢測(cè)結(jié)果與說明書標(biāo)示值或靶值進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，偏倚小于CLIA’88的1/2，認(rèn)為檢測(cè)系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。2021/5/935三.線性范圍及可報(bào)告范圍驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)2021/5/936基本概念線性范圍（linearrange)使實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的最終分析結(jié)果為可接受的線性的濃度范圍，此時(shí)非線性誤差應(yīng)低于允許誤差。線性（linearity）在給定的測(cè)量范圍內(nèi)，使測(cè)定結(jié)果與樣本中分析物的量直接成比例的能力。2021/5/937基本概念分析測(cè)量范圍（analyticalmeasurementrange）是方法直接測(cè)量標(biāo)本，而不需要任何的稀釋、濃縮或者其它預(yù)處理等過程下，測(cè)量結(jié)果總誤差符合要求的分析物濃度的范圍。臨床可報(bào)告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對(duì)標(biāo)本的稀釋、濃縮或者其他預(yù)處理用于擴(kuò)展直接分析測(cè)量下的分析物數(shù)值的范圍。2021/5/938文件依據(jù)CLSI頒布的EP6-A文件《定量測(cè)量方法的線性評(píng)價(jià)》2021/5/939儀器要求

應(yīng)有較好的測(cè)定精密度不存在明顯的攜帶污染等。對(duì)儀器應(yīng)進(jìn)行定期維護(hù)及校準(zhǔn)，保證其處于正常狀態(tài)。2021/5/940試劑及校準(zhǔn)品要求試劑應(yīng)注意試劑有效期及批號(hào)，不可采用過期試劑或不同批號(hào)的試劑。校準(zhǔn)品可采用與評(píng)價(jià)試劑配套的校準(zhǔn)品。校準(zhǔn)品的使用應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明，儀器校準(zhǔn)步驟與間隔應(yīng)按照本室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行。2021/5/941樣品類型的選擇為避免基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響，選用的樣品應(yīng)與臨床實(shí)驗(yàn)樣品相似。不可采用含有對(duì)測(cè)定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應(yīng)包括試劑廠商提供的試劑所能達(dá)到的線性范圍。2021/5/942線性范圍樣品制備1.收集臨床檢測(cè)過程中的高值樣品即濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的患者血清（H）和低值樣品(L)，若收集不到低值樣品，可用生理鹽水或蒸餾水替代。

2.將H和L樣品按：1L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、1H關(guān)系各自配制(必要時(shí)可改變比例)混合，形成系列評(píng)價(jià)樣品。2021/5/943線性范圍樣品測(cè)定

進(jìn)行線性范圍確立時(shí)，應(yīng)進(jìn)行7-11個(gè)濃度水平的樣品測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定2-4次；進(jìn)行線性范圍驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)進(jìn)行5個(gè)濃度水平的樣品測(cè)定，并在1個(gè)批次測(cè)量中完成實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品至少重復(fù)測(cè)定2次，測(cè)量次序?yàn)殡S機(jī)；如果測(cè)定方法本身存在明顯的攜帶污染，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況采取恰當(dāng)措施盡量避免對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。2021/5/944線性范圍結(jié)果分析以預(yù)期值為橫坐標(biāo)，以實(shí)測(cè)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到直線回歸方程Y＝aX+b，a在0.97～1.03范圍內(nèi)，r2≥0.95。

2021/5/945可報(bào)告范圍樣品測(cè)定

收集接近線性范圍上限的病人標(biāo)本血清。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，以生理鹽水或蒸餾水為稀釋介質(zhì)，每個(gè)稀釋濃度檢測(cè)兩次，取平均值與理論值進(jìn)行比較。當(dāng)試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時(shí)，可直接驗(yàn)證該建議的稀釋度即可，不必驗(yàn)證其它倍數(shù)。如沒有給出建議的稀釋度，則根據(jù)工作實(shí)際需要稀釋。2021/5/946可報(bào)告范圍判斷指標(biāo)及判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷指標(biāo)：R=檢測(cè)均值/預(yù)期值*100%判斷標(biāo)準(zhǔn)：80%≤R≤120%，則偏倚在允許誤差范圍之內(nèi)。2021/5/947四.分析靈敏度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)2021/5/948基本概念檢測(cè)低限（LLD）指樣品單次檢測(cè)可以達(dá)到的非空白檢測(cè)響應(yīng)量對(duì)應(yīng)的分析物量。功能靈敏度（FS)指檢測(cè)系統(tǒng)可定量報(bào)告分析物的最低濃度?？瞻紫蓿↙oB)指在規(guī)定的可能性條件下，空白樣品被觀察到的最大檢測(cè)結(jié)果。檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。2021/5/949文件依據(jù)CLSI頒布的EP-17A文件進(jìn)行靈敏度性能評(píng)價(jià)。2021/5/950功能靈敏度實(shí)驗(yàn)程序?qū)⑿?zhǔn)品或質(zhì)控品稀釋后，在儀器上分別對(duì)不同濃度的樣品連續(xù)測(cè)定20次，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，以不精密度（CV）≤20%時(shí)對(duì)應(yīng)檢測(cè)限樣品具有的平均濃度即為功能靈敏度。2021/5/951五.抗干擾驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)2021/5/952樣本選擇選取臨床混合血清1例。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應(yīng)盡量選擇該項(xiàng)目正常參考區(qū)間內(nèi)的濃度。2021/5/953干擾物的確定根據(jù)臨床樣品的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)所選干擾物為：結(jié)合膽紅素、游離膽紅素、脂肪乳、維生素C(Vc)、血紅蛋白。2021/5/954樣本制備

將每一系列的干擾樣品根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求配制成4個(gè)不同濃度的樣本血清，按照從低—高、高—低循環(huán)測(cè)定5遍，計(jì)算每個(gè)濃度下的均值與未添加干擾物的樣品的相對(duì)偏差，并求取重復(fù)性的變異系數(shù)。2021/5/955判斷標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)相對(duì)偏差不超過±15%，重復(fù)性變異系數(shù)不超過10%時(shí)，可認(rèn)為對(duì)應(yīng)的干擾物濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果無影響。2021/5/956

六.參考區(qū)間驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)2021/5/957實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

驗(yàn)證已知參考區(qū)間在本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的可接受性。2021/5/958實(shí)驗(yàn)方法1.從健康人群中抽出20個(gè)參考個(gè)體（最好能夠覆蓋各個(gè)年齡段）;2.依照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程檢測(cè)樣本;3.發(fā)現(xiàn)離群值應(yīng)棄用，并用新的參考個(gè)體代替，以確保測(cè)試結(jié)果不含離群值;2021/5/959實(shí)驗(yàn)方法4.如果20例參考個(gè)體中不超過1例（5％的結(jié)果）的檢測(cè)值在參考區(qū)間外，則已知的參考區(qū)間可以接受。若2例以上超出界限，再選擇20個(gè)參考個(gè)體進(jìn)行驗(yàn)證，若少于或等于1個(gè)檢測(cè)值超過已知參考限，則已知參考區(qū)間可以接受。若又有2個(gè)以上超出參考限，則就應(yīng)該重新檢查所用的分析程序，考慮兩個(gè)樣本總體生物學(xué)特征上可能存在差異，并且考慮是否按照大規(guī)模研究指南建立自己的參考區(qū)間。2021/5/960實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)關(guān)鍵在于——篩選“健康人群”參考個(gè)體不應(yīng)該是住院患者或者臨床病人，除非絕對(duì)需要。諸如可能是必需的小兒科或老年人的研究。2021/5/961七.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部各儀器比對(duì)實(shí)驗(yàn)2021/5/962文件依據(jù)CLSI