2023學(xué)年完整公開課版革蘭氏染色

水處理微生物革蘭氏染色徐晨偉助教知識(shí)點(diǎn)主要內(nèi)容革蘭氏染色的原理革蘭氏染色操作步驟革蘭氏染色

細(xì)菌的染色原理細(xì)菌細(xì)胞微小而透明，通過染色增加其背景反差，易于觀察其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。細(xì)菌在通常培養(yǎng)情況下總是帶負(fù)電荷，故用帶正電的堿性染料染色。革蘭氏染色A簡(jiǎn)單染色法：即用一種染液染色菌體，一般菌體被染上染料顏色。此法常用來觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小和排列方式。B復(fù)合染色法：即用兩種染料染色，以區(qū)別細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)或抗酸性反應(yīng)，或?qū)⒕w和某一結(jié)構(gòu)染成不同顏色。常用的染色法革蘭氏染色

C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細(xì)菌的染色方法根據(jù)此染色法，細(xì)菌可分為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色革蘭氏染色

革蘭氏染色步驟1、用堿性染料結(jié)晶紫對(duì)菌液涂片進(jìn)行初染2、用碘溶液進(jìn)行媒染，其作用是提高染料和細(xì)胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。3、用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫色。在經(jīng)歷脫色后仍將結(jié)晶紫保留在細(xì)胞內(nèi)的為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，而革蘭氏陰性細(xì)菌的結(jié)晶紫被洗掉，細(xì)胞呈無色。4、用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對(duì)涂片進(jìn)行復(fù)染。例如蕃紅，它使原來無色的革蘭氏陰性細(xì)菌最后呈現(xiàn)紅色，而革蘭氏陽(yáng)

性細(xì)菌繼續(xù)保持深紫色革蘭氏染色革蘭氏染色陽(yáng)性菌陰性菌菌體顏色變化革蘭氏染色（1）與等電點(diǎn)有關(guān)：

革蘭氏陽(yáng)性菌pH2～3，陰性菌pH4～5，加碘液媒染，等電點(diǎn)降低，陽(yáng)性菌降低的更低，與結(jié)晶紫結(jié)合得更牢固；陰性菌結(jié)合力弱，易被乙醇脫色。革蘭氏染色機(jī)制：革蘭氏染色（2）與細(xì)胞壁有關(guān)：革蘭氏染色機(jī)制：肽聚糖磷壁酸多糖孔蛋白質(zhì)脂質(zhì)磷壁酸

外膜

肽聚糖革蘭氏陽(yáng)性菌革蘭氏陰性菌革蘭氏染色特征強(qiáng)度厚度肽聚糖層數(shù)肽聚糖含量磷壁酸脂多糖脂肪蛋白質(zhì)G–疏松薄，5～10nm少，1～3層少（10～20％）－＋含量較高含量較高G+堅(jiān)韌厚，20～80nm多，多達(dá)50層高（50～90％）＋－一般無無革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌細(xì)胞壁構(gòu)造的比較革蘭氏染色（2）與細(xì)胞壁有關(guān)：一般認(rèn)為在革蘭染色的過程中，細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成了一種不溶性的深紫色的結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物，這種復(fù)合物可被乙醇從G-菌中浸出，但不易從G+菌中浸出。這是由于G+菌細(xì)胞壁較厚，肽聚糖含量較高，網(wǎng)格結(jié)構(gòu)緊密，含脂量又低，當(dāng)用乙醇脫色時(shí)，肽聚糖網(wǎng)孔由于縮水會(huì)明顯收縮，從而使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)，故菌體呈深紫色。而G-細(xì)胞壁薄，肽聚糖含量低，且網(wǎng)格結(jié)構(gòu)疏松，故遇乙醇后，其網(wǎng)孔不易收縮，加上G-菌的脂類含量高，當(dāng)用乙醇脫色時(shí)，脂類物質(zhì)