病理組織的固定

病理檢驗技術(shù)

常規(guī)組織病理技術(shù)病理組織的固定病理組織的固定概念：將病理活體組織浸泡在適宜的化學(xué)試劑,而這種化學(xué)試劑能使組織或細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固、沉淀成不溶性,并使組織和細胞盡可能保持原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)和所含的各種物質(zhì)成分,稱為組織固定。組織來源：尸體解剖組織和實驗動物組織一、組織固定的目的

破壞細胞內(nèi)的溶酶體酶：組織固定首先是立即殺死細胞并將溶酶體酶及膜結(jié)構(gòu)固定,防止細胞自溶。殺死外來細菌：細菌生長繁殖,致組織腐敗。盡可能保持細胞活體時的原狀凝固、沉淀細胞內(nèi)原有產(chǎn)物：盡可能保持細胞內(nèi)蛋白質(zhì)、糖、脂類、各種無機鹽和色素等組成的不溶性或不被丟失,以利于在染色后顯示出來。病理組織的固定一、組織固定的目的

使組織保持一定的硬度和彈性：在以后的脫水、透明、浸蠟等過程中不發(fā)生較大的扭曲和變形。有利于區(qū)別各種細胞的折光率：固定使不同細胞或細胞內(nèi)各種物質(zhì)產(chǎn)生不同的折光率,在染色后有利于識別各型細胞的結(jié)構(gòu)。對組織的分析性染色起媒染作用：如用含鉻鹽或苦味酸的固定液固定組織可使結(jié)蹄組織染色特別鮮艷等。保存組織細胞內(nèi)的抗原性：細胞內(nèi)的抗原性能完好保存,有利于作免疫組化染色時的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。病理組織的固定二、組織固定機制組織固定：利用某些化學(xué)試劑(如甲醛)的化學(xué)特性，使組織細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)發(fā)生分子間的交聯(lián)，從而使蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變成不溶性凝膠，這種凝膠使細胞器等良好保存。蛋白質(zhì)：由肽鏈組成，肽鏈中含有很多肽鍵(-CONH-)，甲醛(H-CHO)作用于蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)分子間進行交聯(lián)，形成的亞甲基橋(-CH2-)把許多蛋白質(zhì)分子串連起來，使蛋白質(zhì)變性，破壞蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)，改變蛋白質(zhì)的生物活性，從而達到固定的目的。病理組織的固定三、固定注意事項

1.組織要新鮮，離體后立即投入固定液。2.固定的容器要足夠大，并應(yīng)采用廣口、平底、有蓋的容器，利于取出和保持組織原形。3.固定液的量要足，其體積約為標(biāo)本體積的10～20倍。4.大標(biāo)本如肝、脾、腎、胰腺、心臟、腦、淋巴結(jié)、子宮和腫瘤等，應(yīng)在不妨礙病理檢查情況下切開固定，必要時選取小塊組織另瓶固定。5.固定時應(yīng)先把固定液傾入容器，然后放入標(biāo)本，并把容器輕搖兩下，避免標(biāo)本與容器底部粘貼影響固定。病理組織的固定三、固定注意事項

6.空腔組織如胃、膀胱、膽囊等要切開固定，易漂浮組織標(biāo)本如肺其上端應(yīng)用含固定液的紗布或藥棉覆蓋。7.小塊黏膜和穿刺組織，如胃腸道和呼吸道腔鏡取材黏膜，肝、腎、乳腺、淋巴結(jié)和前列腺穿刺組織，取材后先放在濾紙上，然后再放入固定液，以防組織收縮而丟失或彎曲斷裂。8.固定標(biāo)本瓶或膠袋必須貼有該例患者姓名、性別和年齡等資料的標(biāo)簽。9.固定時間應(yīng)視組織標(biāo)本大小、厚度、當(dāng)時室溫和選用固定液種類而定。如用10%甲醛液固定小標(biāo)本時間為數(shù)小時至一晚，大標(biāo)本時間是1～2天。病理組織的固定四、組織固定良好的判斷

用甲醛液固定組織，根據(jù)組織大小厚薄、致密或疏松,固定時間可由數(shù)小時至3天。如腎穿或肝穿組織，固定1～2小時已足夠；若是闌尾等稍大標(biāo)本，約需固定數(shù)小時；全子宮摘除等大標(biāo)本需固定1～2天；更大的組織，應(yīng)切取小塊固定。任何組織固定時間必須充分，這是制片的關(guān)鍵。判斷組織固定是否良好，可取已固定完畢的組織標(biāo)本用刀從正中切開，如固定良好，其切面呈灰自色，質(zhì)感較硬而具有彈性；若固定不好，切面可見血色，含液體較多，組織仍保留柔軟狀態(tài)。病理組織的固定五、固定后水洗

目的：洗去過多的固定液和盡可能消除組織與固定液作用所生成的分解產(chǎn)物，避免污染組織，延長脫水液使用期。流水沖洗時間：與所用的固定液、固定時間和組織大小有關(guān)。用甲醛液固定的組織，原則上都應(yīng)流水沖洗。如為尸解成教學(xué)制片材料，固定后都應(yīng)流水沖洗數(shù)小時至一晚，但外檢組織標(biāo)本，由于時間關(guān)系或趕在自動脫水機脫水，可不經(jīng)流水沖洗而勤換低濃度乙醇脫水液；若用含重鉻酸鉀的

Zenker固定液，必須經(jīng)流水沖洗12～24小時，不能直接投入乙醇內(nèi)脫水；用

Bouin固定液固定的組織，可用流水作短時沖洗，但也可直接轉(zhuǎn)入低濃度乙醇，經(jīng)乙醇脫水