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職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫第一章血液一般檢驗第四節(jié)血涂片染色一、血涂片染色血涂片染色是為了使血細胞著色,染料將細胞的胞膜、胞質(zhì)、胞核等染成不同的顏色,便于在顯微鏡下觀察識別。(一)方法1.瑞特染色法(1)染色原理:細胞的著色既有物理的吸附作用,又有化學(xué)的親和作用。(2)試劑①瑞特染液酸性染料伊紅(伊紅化鈉

)堿性染料美藍(氯化美藍)復(fù)合物溶于甲醇。②磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH6.4~6.8)

(3)簡要操作6血涂片制備

干燥、標記加瑞特染液覆蓋血膜固定約1分鐘加等量緩沖液混勻→靜置5~10分鐘流水沖洗、干燥(4)染色效果7正常情況下,經(jīng)瑞特染色后血膜外觀呈淡紫紅色。顯微鏡下:紅細胞呈粉紅色圓盤狀;白細胞的細胞核染紫紅色,核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚,胞質(zhì)中顆粒清楚,并顯示出各種細胞特有的色;血小板染成紫紅色。82.吉姆薩染色法(1)原理:吉姆薩染色原理與瑞特染色相同,但提高了噻嗪類染料亞甲藍的質(zhì)量,加強了天青的作用。與瑞特染色法比較,該法對細胞核著色效果較好,但對中性顆粒著色較差。(2)試劑:由吉姆薩染料、甲醇和甘油組成。(3)簡要操作:同瑞特染色法。3.瑞-吉復(fù)合染色法可取長補短,使血細胞獲得滿意的染色效果。(二)質(zhì)量保證1.瑞特染液質(zhì)量在密封條件下,貯存時間愈久,亞甲藍轉(zhuǎn)化的天青B愈多,染色效果愈好??捎梦舛缺戎担≧A)作為瑞特染液的質(zhì)量評價指標RA=A650/A525,RA降至1.3±0.1即可使用。瑞特染液需適當加入甘油,密封嚴實,以防止甲醇揮發(fā)或氧化,影響染液質(zhì)量。2.pH如環(huán)境pH<PI(PI為該蛋白質(zhì)的等電點),易與酸性伊紅結(jié)合,染色偏紅;當環(huán)境的pH>PI則帶負電荷增多,易與亞甲藍結(jié)合,染色偏藍。3.染色時機血涂片干透后才能染色,否則易脫落。4.染液用量以剛好覆蓋血膜為宜。用量過多,會造成深染;過少,會導(dǎo)致血涂片局部未著色,或易干使染料沉積。5.混勻染液與緩沖液需充分混勻,否則細胞著色不均。6.染色時間環(huán)境溫度越低、細胞越多,染色時間越長;反之亦然。7.沖洗用小流水將染液沖洗干凈,不能先倒掉染液再用流水沖洗,以免染料沉著于血涂片上,干擾血細胞形態(tài)觀

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