微生物實驗常用的36種培養(yǎng)基的配制說明

第1頁共12頁微生物實驗常用的36種培養(yǎng)基的配制說明1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基〔用于細(xì)菌培養(yǎng)〕 22.高氏1號培養(yǎng)基(用于放線菌培養(yǎng)) 23.馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基(用于從土壤中分離真菌) 24.馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培養(yǎng)) 25.察氏培養(yǎng)基(蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基)(用于霉菌培養(yǎng)) 2 27.麥?zhǔn)?McClary)培養(yǎng)基(醋酸鈉培養(yǎng)基) 38.葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基(用于V.P反應(yīng)和甲基紅試驗) 39.蛋白胨水培養(yǎng)基(用于吲哚試驗) 310.糖發(fā)酵培養(yǎng)基(用于細(xì)菌糖發(fā)酵試驗) 311.RCM培養(yǎng)基(強化梭菌培養(yǎng)基)、〔用于厭氧菌培養(yǎng)〕 312.TYA培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng) 4 4 415.CaCO?明膠麥芽汁培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng)) 416.BCG牛乳培養(yǎng)基〔用于乳酸發(fā)酵〕 417.乳酸菌培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵 418.酒精發(fā)酵培養(yǎng)基〔用于酒精發(fā)酵 519.柯索夫培養(yǎng)基(用于鉤端螺旋體培養(yǎng)) 5 521.LB(Luria—Bertani)培養(yǎng)基(細(xì)菌培養(yǎng)，常在分子生物學(xué)中應(yīng)用) 522.復(fù)紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基) 523.乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基(用于水體中大腸菌群測定) 624.乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于多管發(fā)酵法檢測水體中大腸菌群) 625.三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于水體中大腸菌群測定) 626.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基)(用于水體中大腸菌群測定和細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)) 627.加倍肉湯培養(yǎng)基(用于細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)) 728.半固體素瓊脂(用于細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)) 829.豆餅斜面培養(yǎng)基(用于產(chǎn)蛋白酶霉菌菌株篩選) 830.酪素培養(yǎng)基(用于蛋白酶菌株篩選) 831.細(xì)菌基本培養(yǎng)基(用于篩選營養(yǎng)缺陷型) 8 1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于細(xì)菌培養(yǎng))牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,水1000mL,pH=7.4~7.6。2.高氏1號培養(yǎng)基(用于放線菌培養(yǎng))可溶性淀粉20g,KNO?1g,NaCl0.5g,K?HPO?·3H?O0.5g,MgSO?·7H?O0.5g,FeSO?·7H?O0.01g,水1000mL,pH=7.4~7.6。配制時注意：可溶性淀粉要先用冷水調(diào)勻后再加入到以上培養(yǎng)基中。3.馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基(用于從土壤中分離真菌)K?HPO?1g,MgSO?·7H?O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,1/3000孟加拉紅水溶液100mL,水900mL,自然pH=,121℃濕熱滅菌30min。待培養(yǎng)基融化后冷卻55~60℃時加入鏈霉素(鏈霉素含量為30μg/mL)。4.馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培養(yǎng))馬鈴薯(去皮)?00g,蔗糖(或葡萄糖)?0g,水1000mL,配制方法如下：將馬鈴署去皮，切成約2cm2的小塊，放入1500mL的燒杯中煮沸30min,注意用玻棒攪拌以防糊底，然后用雙層紗布過濾，取其濾液加糖，再補足至1000mL,自然pH=,霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。5.察氏培養(yǎng)基(蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基)(用于霉菌培養(yǎng))蔗糖30g,NaNO?2g,K?HPO?1g,MgSO?·7H?O0.5g,KCl0.5g,第3頁共12頁第4頁共12頁酸鹽酸鹽0.5g,NaCl3g,NaAc3g,水1000mL,pH=8.5,刃天青3mg/L,pH=6.5,121℃濕熱滅菌30min。玉米粉65g,自來水1000mL,混勻，煮10min成糊狀，自然pH=,葡萄糖40g,胰蛋白胨6g,酵母膏2g,牛肉膏2g,醋酸銨3g,麥芽汁(6波美)1000mL,水1000mL,CaCO?10g,明膠10g,pH=6.8,液1mL,80℃滅菌20min。(B)溶液：酵母膏10g,水500mL,瓊脂20g,pH=6.8,121℃濕熱滅菌牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,葡萄糖10g,乳糖5g,NaCl5g,水第5頁共12頁18.酒精發(fā)酵培養(yǎng)基(用于酒精發(fā)酵)KH?PO?0.5g,水100mL,自然pH=。19.柯索夫培養(yǎng)基(用于鉤端螺旋體培養(yǎng))KH?PO?0.09g,NaH?PO?0.48g,蒸餾水500mL,無菌兔血清40mL。20.豆芽汁培養(yǎng)基黃豆芽500g,加水1000mL,煮沸l(wèi)h,過濾后補足水分，121℃濕熱滅菌用于細(xì)菌培養(yǎng)：10%豆芽汁200mL,葡萄糖(或蔗糖)50g,水800mL,用于霉菌或酵母菌培養(yǎng)：10%豆芽汁200mL,糖50g,水800mL,自然中應(yīng)用)為1L,121℃濕熱滅菌30min。素，至終濃度為80~100mg/L。22.復(fù)紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基)第6頁共12頁蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,瓊脂20g,乳糖10gK?HPO?0.5g,無水亞硫酸鈉5g,5%堿性復(fù)紅乙醇溶液20mL,蒸餾水制作過程：先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到900mL水中，加熱溶解，再加入K?PO?,溶解后補充水至1000mL,調(diào)pH=至7.2~7.4。隨后加入乳糖，混勻溶解后，于115℃濕熱滅菌20min。再稱取亞硫酸鈉至一無菌空試管中，用少許無菌水使其溶解，在水浴中煮沸10min后，立即滴加于20mL的5%堿性復(fù)紅乙醇溶液中，直至深紅色轉(zhuǎn)變?yōu)榈奂t色為將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態(tài)蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母膏5g,乳糖10g,瓊脂5g,蒸餾水1000mL,pH=7.2~7.4,分裝試管(10mL/管),115℃濕熱滅菌20min。蛋白胨10g,牛肉膏3g,乳糖5g,NaCl5g,蒸餾水1000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lmL。調(diào)pH=至7.2,分裝試管(10mL/管),并放入倒置杜氏小管，115℃濕熱滅菌20min。25.三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于水體中大腸菌群測定)將乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中各營養(yǎng)成分以擴(kuò)大3倍加入到1000mL水中，制法同上，分裝于放有倒置杜氏小管的試管中，每管5mL,115℃濕熱滅菌第7頁共12頁蛋白胨10g,乳糖10g,K?HPO?2g,瓊脂25g,2%/伊紅Y(曙紅)水溶液20mL,0.5%美藍(lán)(亞甲藍(lán))水溶液13mL,pH=7.4。pH=至7.4,115℃濕熱滅菌20min,然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍(lán)液，充分混勻，防止產(chǎn)生氣泡。待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右倒平皿。如培養(yǎng)基太熱會產(chǎn)生過多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱備用牛肉膏6g,蛋白胨20g,NaCl10g,水1000mL,pH=7.4~7.6。明膠蛋白胨牛肉浸粉1.稱取本品13g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝試管每管10ml,并加入倒管121℃高壓滅菌15分鐘。4.在36±1℃培養(yǎng)24±2小時，記錄實驗結(jié)果。接種以下質(zhì)控菌株，在36±1℃培養(yǎng)24±2小時：菌株編號第8頁共12頁傷寒沙門氏菌渾濁大腸埃希氏菌渾濁，產(chǎn)氣銅綠假單胞菌渾濁瓊脂1g,水100mL,121℃濕熱滅菌30min。豆餅100g加水5~6倍，煮出濾汁100mL,汁內(nèi)加入KH?PO?0.1%,MgSO?0.05%,(NH?)?SO?0.05%,可溶性淀粉2%,pH=6,瓊脂2%~2.5%。分別配制A液和B液。B液：稱取KH?PO?0.36g,加水溶解。A、B液混合后，加入酪素水解液0.3mL,加瓊脂20g,最后用蒸餾水定容至1000mL。酪素水解液的配制：1g酪蛋白溶于堿性緩沖液中，加入1%的枯草芽孢桿菌蛋白酶25mL加水至100mL,30℃水解1h。用于配制培養(yǎng)基時，其用量為1000mL,培養(yǎng)基中加入100mL以上水解液。水1000mL,pH=7.0,115℃濕熱滅菌30min。殖使用的混合營養(yǎng)物制品。培養(yǎng)基一般pH為7.2~7.6,少數(shù)的細(xì)菌按生長要求調(diào)整pH偏酸或偏堿。許多細(xì)菌在代謝過程中分解糖類產(chǎn)酸，故常在培養(yǎng)基中第9頁共12頁基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basicmedium)含有多數(shù)細(xì)菌生長繁殖所需的基本營養(yǎng)成菌生長的增菌培養(yǎng)基(enrichmentmedium)在這種培養(yǎng)基上生長的是營養(yǎng)要求相同的細(xì)菌群。它包括通用增菌培養(yǎng)基和專用增基中添加合適的生長因子或微量元素等，以促使某些特鏈球菌、肺炎鏈球菌需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長；菌培養(yǎng)基，即除固有的營養(yǎng)成分外，再添加特在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，使之抑制某些細(xì)菌生細(xì)菌生長，從而將后者從混雜的標(biāo)本中分離出來，這 蘭陽性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使容易分離到。若在培養(yǎng)基中加入抗生素，也可起到亞甲藍(lán)瓊脂等。也有一些培養(yǎng)基將選擇和鑒別功能結(jié)第10頁共12頁低，并加入亞甲藍(lán)作為氧化還原指示劑。其中心腦浸液和肝塊、肉渣含有不飽和脂肪酸，能吸收培養(yǎng)基中的氧；硫乙醇酸鹽和半胱氨酸是較強的還原劑；維生素K氯化血紅素可以促進(jìn)某些類桿菌的生長。常用的有庖肉培養(yǎng)基(cookedmeatmedium)硫乙醇酸鹽肉湯等，并在液體培養(yǎng)基表面加入凡士林或液狀石蠟以隔絕空氣。此外，還可根據(jù)對培養(yǎng)基成分了解的程度將其分為兩大類：化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基(definedmedium),又稱為合成培養(yǎng)基(syntheticmedium);化學(xué)成分不確定的培養(yǎng)基(undefinedmedium),又稱天然培養(yǎng)基(complexmedium)也可根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)的不同分為液體、固體和半固體培養(yǎng)基三大類。在液體培養(yǎng)基中加入15g/L的瓊脂粉，凝固成固體培養(yǎng)基；瓊脂粉含量在3~5g/L時，則為半固體培養(yǎng)基。瓊脂在培養(yǎng)基中起賦形劑作用不具營養(yǎng)意義。液體培養(yǎng)基可用于大量繁殖細(xì)菌，但必須種入純種細(xì)菌；固體培養(yǎng)基常用于細(xì)菌的分離和純化；半固體培養(yǎng)基則用于觀察細(xì)菌的動力和短期保存細(xì)酵母粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,蒸餾水1000mL,pH=6.0,115℃濕熱滅菌20min。YPD培養(yǎng)基又稱YEPD培養(yǎng)基，可用于多種細(xì)菌培養(yǎng)，主要用于酵母常規(guī)生長的復(fù)合培養(yǎng)基。LeageneYPD培養(yǎng)基主要由胰蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖等組成，其濃度比常規(guī)LB培養(yǎng)基高，不含瓊脂，經(jīng)高壓滅菌處理20min。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。YPD培養(yǎng)基又稱YEPD培養(yǎng)基，可用于多種細(xì)菌培養(yǎng)，主要用于酵母常規(guī)生長的復(fù)合培養(yǎng)基。尚寶生物YPD培養(yǎng)基主要由胰蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖等組成，其濃度比常規(guī)LB培養(yǎng)基高，不含瓊脂，經(jīng)高壓滅菌處理20min。第11頁共12頁名稱YPD/YEPD培養(yǎng)基(無菌)2.如需制備平板，加入