核苷酸和核酸

關(guān)于核苷酸和核酸第1頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的化學(xué)反應(yīng)

1.脫氨基作用（脫氨，deamination）

次黃嘌呤5-甲基胞嘧啶黃嘌呤第2頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月2.脫氧核苷酸的水解——脫嘌呤第3頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月3.紫外線和一些化學(xué)因子、烷化劑對DNA的損傷第4頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月亞硝酸第5頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月烷化劑：乙基甲烷磺酸（EMS）第6頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月紫外線誘導(dǎo)胸腺嘧啶二聚體第7頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月4.與嵌合劑的反應(yīng)第8頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第9頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月溴乙啶丫啶橙

放線菌素D

第10頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月二、DNA的酶法甲基化（methylation）甲基供體：S—腺苷甲硫氨酸甲基受體：被修飾堿基（A、C多于G、T）堿基的甲基化修飾不是隨機(jī)的，而是限于一定的順序或DNA的某一區(qū)域，在甲基化酶的作用下進(jìn)行，甲基化是可逆的。甲基化的意義：幫助細(xì)胞識別和區(qū)分自身DNA和外來DNA；調(diào)節(jié)基因表達(dá)；幫助DNA修復(fù)等。第11頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第八節(jié)

核酸酶和DNA限制性內(nèi)切酶第12頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月一、核酸酶（nuclease）能水解核酸的酶為核酸酶核酸酶都是磷酸二酯酶（phosphodiesterases）第13頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸酶的分類按底物專一性分類：核糖核酸酶(RNase)和脫氧核糖核酸酶(DNase)按作用方式分類：內(nèi)切核酸酶和外切核酸酶內(nèi)切核酸酶：從核酸的內(nèi)部切割核酸鏈，產(chǎn)生核酸鏈片段。外切核酸酶：從核酸鏈的一端逐個切斷磷酸二酯鍵，釋放單核苷酸。按磷酸二酯鍵斷裂方式：3’-核酸酶和5’-核酸酶第14頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第15頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸酶對其底物的作用具有特異性第16頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第17頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月二、限制性內(nèi)切酶（restrictionendonuclease）

限制性內(nèi)切酶是從細(xì)菌中分離的一類專門識別和水解特定核苷酸序列的內(nèi)切酶類。這類酶在原核生物體內(nèi)，用于“防御”外來DNA的入侵，將外來DNA以獨特的方式切成無感染能力的片段，而自身不受損害（甲基化作用）。第18頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月1.限制性內(nèi)切酶的分類Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ

基因工程技術(shù)中常用Ⅱ型第19頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月不需要ATP參加；不對DNA進(jìn)行甲基化或其它方式修飾。專門識別和切割特定的核苷酸序列，這個序列一般含4—6個核苷酸殘基，并具回文結(jié)構(gòu)“落鶴島上島落鶴，垂柳岸邊岸柳垂”。

2.II型限制性內(nèi)切酶

第20頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月Ⅱ類酶識別序列特點

回文結(jié)構(gòu)palindrome第21頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月切口（kerf）：粘端，平端第22頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第23頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第24頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月3.限制性內(nèi)切酶的種類（約1000多種）

第25頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月Hin

dⅢ

屬

系

株序Haemophilusinfluenzaed株流感嗜血桿菌d株的第三種酶命名naming第一個字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬（genus）名，用大寫；第二、第三個字母是該細(xì)菌的種（species）名，用小寫；第四個字母代表株（strain）；用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序（sequence）。第26頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月4.限制性內(nèi)切酶在基因重組中的應(yīng)用

第27頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第28頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月第29頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月三、限制片段的長度和限制圖1.限制片段的長度識別4個核苷酸序列的限制酶產(chǎn)生DNA片段的平均長度：256（44）識別6個核苷酸序列的限制酶產(chǎn)生DNA片段的平均長度：4096（46）第30頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月2.制性內(nèi)切酶圖譜

限制性圖譜是各種限制性內(nèi)切酶切點在某一DNA分子或DNA片段上的排列，由于各酶切點之間的距離是以堿基對（kbp→mbp）表示的，所以可計算出二切