GB乳酸菌檢驗(yàn)演示文稿

GB乳酸菌檢驗(yàn)演示文稿目前一頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)定義

乳酸菌是指一群通過發(fā)酵糖類產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌通稱。乳桿菌屬雙歧桿菌屬鏈球菌屬的嗜熱鏈球菌目前二頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T4789.35-2008相比，主要變化如下：——修改了乳酸菌總數(shù)、乳桿菌、雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌的計數(shù)方法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：——GB4789.35-1996、GB/T4789.35-2003、GB/T4789.35-2008。目前三頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)GB/T4789.35－2003乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗(yàn)流程目前四頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)SN/T1941.1-2007:檢驗(yàn)方法有三部分：第1部分：分離與計數(shù)方法；第2部分：PetrifilmTM測試片法；第3部分：乳桿菌的PCR法目前五頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)SN標(biāo)準(zhǔn)目前六頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)GB/T4789.35－2008

乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗(yàn)修訂本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T4789.35－2003相比主要修改如下：——將選擇性分離培養(yǎng)基由改良TJA培養(yǎng)基（改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基）改為MRS培養(yǎng)基；——增加API50CH診斷試劑條；——乳酸菌計數(shù)由傾注法改為涂布法。目前七頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)

2010版目前八頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)樣品制備7.1.3固體和半固體食品：以無菌操作稱取25g樣品，置于裝有225mL生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，制成1:10樣品勻液；或置于225mL生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min制成1:10的樣品勻液。7.1.4液體樣品：液體樣品應(yīng)先將其充分搖勻后以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分振搖，制成1:10的樣品勻液。目前九頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)乳酸菌計數(shù)乳酸菌總數(shù)根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計，選擇2個～3個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1mL樣品勻液分別置于2個MRS瓊脂平板，使用L形棒進(jìn)行表面涂布。36℃±1℃，厭氧培養(yǎng)48h±2h后計數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。從樣品稀釋到平板涂布要求在15min內(nèi)完成。目前十頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)乳酸菌計數(shù)雙歧桿菌計數(shù)根據(jù)對待檢樣品雙歧桿菌含量的估計，選擇2個～3個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1mL樣品勻液于莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）改良MRS瓊脂平板，使用滅菌L形棒進(jìn)行表面涂布，每個稀釋度作兩個平板。36℃±1℃，厭氧培養(yǎng)48h±2h后計數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。目前十一頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)乳酸菌計數(shù)嗜熱鏈球菌計數(shù)根據(jù)待檢樣品嗜熱鏈球菌活菌數(shù)的估計，選擇2個～3個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1mL樣品勻液分別置于2個MC瓊脂平板，使用L形棒進(jìn)行表面涂布。36℃±1℃，需氧培養(yǎng)48h±2h后計數(shù)。嗜熱鏈球菌在MC瓊脂平板上的菌落特征為：菌落中等偏小，邊緣整齊光滑的紅色菌落，直徑2mm±1mm，菌落背面為粉紅色。目前十二頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)乳酸菌計數(shù)乳桿菌計數(shù)乳酸菌總數(shù)結(jié)果減去

雙歧桿菌與

嗜熱鏈球菌計數(shù)結(jié)果之和即得乳桿菌計數(shù)。目前十三頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)報告（GB/T4789.35-2008）根據(jù)菌落計數(shù)結(jié)果出具檢測報告。最終確定的乳酸菌菌落在30～300之間的平板計數(shù)，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，修約保留兩位有效數(shù)字，之后的數(shù)字，采用10的指數(shù)表示。參照GB/T4789.2規(guī)定。每克（或毫升）食品中所含有的乳酸菌數(shù)以CFU/g（mL）表示。

目前十四頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)報告（GB4789.35-2010）7.3.1選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。7.3.2其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。7.3.3當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。目前十五頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)結(jié)果的表述7.4.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）中菌落總數(shù)結(jié)果。7.4.2若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式（1）計算：目前十六頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)目前十七頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)7.4.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。7.4.4若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。7.4.5若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。7.4.6若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU～300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU時，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。目前十八頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)菌落數(shù)的報告7.5.1菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。7.5.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。7.5.3稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。目前十九頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)目前二十頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)目前二十一頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)目前二十二頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)3Mpetrifilm目前二十三頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)乳酸菌的鑒定純培養(yǎng)挑取3個或以上的可疑菌落，嗜熱鏈球菌接種于MC瓊脂平板，乳桿菌屬接種于MRS瓊脂平板，兼性厭氧，置36℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h。雙歧桿菌屬鑒定按照GB/T4789.34。目前二十四頁\總數(shù)二十九頁\編于十三點(diǎn)涂片鏡檢乳桿菌屬細(xì)胞形態(tài)多樣，從長的桿狀和細(xì)長桿狀到彎曲桿狀及短桿狀，一般形成鏈。通常不運(yùn)動。無芽胞，革蘭氏染色陽性。嗜熱鏈球菌形態(tài)為球形或球桿狀，直徑為0.5μm～2.0μm，細(xì)胞成對或成鏈排列，無芽胞，革蘭氏染色陽性。目前二十五頁\總數(shù)二十九頁\編