菌種的衰退復(fù)壯和保藏

作物生產(chǎn)技術(shù)專業(yè)/教學(xué)資源庫菌種的衰退、復(fù)壯和保藏性狀穩(wěn)定的菌種是微生物學(xué)工作最重要的基本要求，否則生產(chǎn)或科研都無法正常進(jìn)行。影響微生物菌種穩(wěn)定性的因素：a）變異；b）污染；c）死亡.一、菌種的衰退(degenration)

1.衰退的表現(xiàn)

1）原有形態(tài)形狀變得不典型；2）生長速度變慢；3）代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力下降；4）致病菌對宿主侵襲力下降；5）對外界不良環(huán)境的抵抗力下降。

2.衰退的原因

1）根本原因在于基因自發(fā)突變；2）傳代次數(shù)的影響，使負(fù)突變株的比例逐漸占了優(yōu)勢；3）與培養(yǎng)條件有關(guān)。

衰退是發(fā)生在微生物細(xì)胞群體中的一個由量變到質(zhì)變的逐步演變的過程。二、衰退的防止與復(fù)壯（一）防止衰退的措施1.減少傳代次數(shù)；2.創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件；3.利用不易衰退的細(xì)胞傳代4.采用有效的菌種保藏方法；（二）菌種的復(fù)壯（rejuvenation）1.從衰退的菌種群體中把少數(shù)個體再找出來，重新獲得具有原有典型性狀的菌種(狹義復(fù)壯，消極措施)。2.有意識地利用微生物會發(fā)生自發(fā)突變的特性，在日常的菌種維護(hù)工作中不斷篩選“正變”個體(廣義復(fù)壯，積極措施)。a）純種分離;b）通過寄主體進(jìn)行復(fù)壯；純種的分離方法

平板劃線分離法

菌落純平板涂布分離法平板傾注分離法用“分離小室”進(jìn)行單細(xì)胞分離

細(xì)胞純顯微操縱器進(jìn)行單細(xì)胞分離菌絲尖端切割法進(jìn)行單細(xì)胞分離三、菌種保藏在一定時間內(nèi)使菌種不死、不變、不亂基本要求：基本方法：生活態(tài)休眠態(tài)培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)寄主傳代培養(yǎng)冷凍干燥斜面、平板液氮、低溫冰箱沙土管、冷凍真空干燥1.原理

人為地創(chuàng)造有利于微生物長期休眠的條件，主要是低溫、干燥、缺氧。2.保藏方法

7種常用方法

（1）斜面冰箱保藏法（2）半固體冰箱保藏法（3）石蠟油封藏法（4）甘油懸液保藏法（5）沙土管保藏法（6）冷凍干燥保藏法（7）液氮保藏法ATCC采用的菌種保藏法：（AmericanTypeCultureCollection

，美國典型菌種保藏中心）

冷凍干燥保藏法液氮保藏法CCCCM采用的菌種保藏法：

（ChinaCommitteeforCultureCollectionsofMicroorganism，中國微生物菌種保藏委員會）斜面?zhèn)鞔ɡ鋬龈稍锉２胤ㄒ旱２胤ㄓ捎谖⑸锏亩鄻有?，不同的微生物往往對不同的保藏方法有不同的適應(yīng)性，迄今為止尚沒有一種方法能被證明對所有的微生物均適宜。因此，在具體選擇保藏方法時必須對被保藏菌株的特性、保藏物的使用特點及現(xiàn)有條件等進(jìn)行綜合考慮。對于一些比較重要的微生物菌株，