消毒劑使用及效力驗證

消毒劑使用及效力驗證第一頁，共28頁。

能消除以細胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生物污染的化學(xué)物質(zhì)。消毒劑的習(xí)慣定義：2第二頁，共28頁。消毒劑的分類定義（USP29<1072>）抗菌劑（Antiseptic)化學(xué)殺菌劑(ChemicalDisinfectant)清潔劑(CleaningAgent)消毒劑(Disinfectant)衛(wèi)生洗滌劑(SanitizingAgent)殺孢子劑(SporicidalAgent)滅菌劑(SterilantAgent)3第三頁，共28頁?；瘜W(xué)主份類別舉例醛類殺孢子劑2％戊二醛醇類一般消毒劑，抗菌/病毒70%異丙醇、75％酒精含氯和次氯酸鈉殺孢子劑0.5%次氯酸鈉酚類一般消毒劑500μg/g氯甲酚、氯二甲酚臭氧殺孢子劑8％氣體重量過氧化氫氣態(tài)滅菌劑，液體殺孢子劑，抗菌劑4μg/g，10％～25％溶液，3％溶液替代縮二胍抗菌劑0.5%氯己定（洗必泰）過氧乙酸液態(tài)/氣態(tài)滅菌劑0.2%，1μg/g環(huán)氧乙烷氣態(tài)滅菌劑600μg/g季銨鹽類一般消毒劑，抗菌劑200μg/g苯扎氯銨（潔爾滅）β-丙內(nèi)酯殺孢子劑100μg/g4第四頁，共28頁。消毒劑配制按供應(yīng)商的使用說明進行配制和儲存純化水、注射用水潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境使用，應(yīng)進行除菌過濾。溫度提高，殺菌效力增大。效力驗證時，在常溫下配制。5第五頁，共28頁。影響消毒劑效力的因素：

pH溫度，濃度材質(zhì)和附著物質(zhì)溶劑（水）接觸時間微生物的類型和數(shù)量

6第六頁，共28頁。消毒劑作用機理鈍化胞內(nèi)酶活性，影響細胞的正常代謝酚類阻斷物質(zhì)運輸通道季銨鹽類（＋電荷），附著于細胞膜特定部分（－電荷）破壞微生物細胞（膜）的結(jié)構(gòu)和功能醛類、含氯、過氧化物7第七頁，共28頁。微生物對消毒劑的耐受性形成生物膜粘性多糖物質(zhì)消毒劑的相互作用中和反應(yīng)固有耐受性和概率殘存致死劑量8第八頁，共28頁。微生物抗力由小到大排列一般為：細菌繁殖體真菌繁殖體真菌孢子病毒分枝桿菌細菌芽孢9第九頁，共28頁。消毒劑的選擇需控制的微生物的類型和數(shù)量市售消毒劑的抗菌譜消毒劑的品牌濃度、使用方法和接觸時間待消毒物體的材質(zhì)和對消毒劑的兼容性可能影響殺菌效力的表面有機物數(shù)量反復(fù)使用，對設(shè)備表面的腐蝕程度對操作者的安全性和清潔劑/其它消毒劑的相容性交替使用方案和對產(chǎn)品的影響10第十頁，共28頁。

消毒劑驗證的目的：

通過特定的微生物與某消毒劑在規(guī)定的使用濃度下，接觸規(guī)定的時間后，對微生物進行培養(yǎng)、計數(shù)，考察消毒劑的消毒/殺菌效果。11第十一頁，共28頁。消毒劑驗證的內(nèi)容：使用中稀釋檢測（use-dilutiontests)對不同濃度下，對消毒劑的效力進行篩選針對不同標準菌株和環(huán)境微生物，確認接觸時間表面挑戰(zhàn)試驗（surfacechallengetests)使用標準菌株和典型環(huán)境分離微生物選擇合適的濃度和接觸時間，進行試驗獲得挑戰(zhàn)微生物數(shù)量下降的對數(shù)值對使用新消毒劑前后環(huán)境微生物的檢出頻率和數(shù)量進行統(tǒng)計學(xué)評估（無菌生產(chǎn)區(qū)域、GMP要求）12第十二頁，共28頁。消毒劑驗證步驟：第一步：在實驗室對代表細菌在規(guī)定的使用濃度和規(guī)定的作用時間進行確認。第二步：應(yīng)用不同材質(zhì)的載體，進行模擬試驗第三步：完成驗證報告，形成SOP。

13第十三頁，共28頁。驗證用菌種：金黃色葡萄球菌、銅綠色假單胞菌、沙門氏菌、大腸埃希菌、枯草桿菌、白色念珠菌、黑曲霉、環(huán)境分離菌。菌種選擇的原則:代表性,普遍性,標準菌種。(環(huán)境中常見的污染菌)。菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。驗證菌種：14第十四頁，共28頁。挑戰(zhàn)微生物(USP29)AOAC挑戰(zhàn)菌典型環(huán)境分離菌殺菌劑：大腸埃希菌ATCC11229金黃色葡萄球菌ATCC6538銅綠假單胞菌ATCC15442殺菌劑：藤黃微球菌，表皮葡萄球菌，杰氏棒桿菌，泡囊假單胞菌

殺真菌劑：白色念珠菌ATCC10231或2091產(chǎn)黃青霉ATCC11709黑曲霉菌ATCC16404殺真菌劑：產(chǎn)黃青霉，黑曲霉菌殺孢子劑：枯草芽孢桿菌ATCC19659殺孢子劑：球形芽孢桿菌，蘇云金芽孢桿菌

15第十五頁，共28頁。準備性試驗（一）選擇適合的中和劑Letheen肉湯、D/E中和肉湯（酚類，季銨鹽類）、TAT肉湯基礎(chǔ)＋吐溫20＋卵磷脂＋胰蛋白胨消毒劑中和劑醇類稀釋或吐溫80戊二醛甘氨酸和亞硫酸氫鈉次氯酸鈉硫代硫酸鈉氯己定吐溫80和卵磷脂氯化汞及其它汞制劑硫乙醇酸季銨鹽類吐溫80和卵磷脂酚類稀釋或吐溫80和卵磷脂16第十六頁，共28頁。D/E中和肉湯（每升）配方胰蛋白胨5g酵母膏2.5g葡萄糖10g硫乙醇酸鈉1g硫代硫酸鈉6g亞硫酸氫鈉2.5g吐溫805g卵磷脂7g溴甲酚紫0.02g最終pH7.60.2于25℃

17第十七頁，共28頁。準備性試驗（二）中和劑毒性將10～100CFU的微生物加入到中和劑中薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù)與菌液對照組比較，回收率應(yīng)>70％18第十八頁，共28頁。準備性試驗（三）中和效力將消毒劑和中和劑混合（記錄時間）加入10～100CFU微生物薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù)與菌液對照組比較，回收率應(yīng)>70％19第十九頁，共28頁。驗證方法-薄膜過濾法菌懸液和消毒劑直接混合，在不同的時間間隔條件下過濾，培養(yǎng)后評價。20第二十頁，共28頁。驗證準備：

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測試菌液準備增菌過夜，并調(diào)整至106～108CFU/ml-消毒劑稀釋至規(guī)定濃度。分裝10ml于若干無菌試管中；試管上標注消毒時間：如“1分鐘組”，“5分鐘組”，“10分鐘組”或其他要求的時間段。-配制中和劑（分裝100ml，300ml）21第二十一頁，共28頁。驗證步驟（1）：-接種

接種各驗證菌種至盛有待驗證消毒劑的試管（使接后濃度>104CFU/ml)，混合均勻，并立即開始計時。-中和、過濾

將消毒劑傾入100ml中和劑中，混合，稀釋（如需要），過濾，然后用100ml中和劑清洗濾膜，濾過3次。-陽性對照

用無菌水代替消毒劑，步驟同上。22第二十二頁，共28頁。驗證步驟（2）：

培養(yǎng)和計數(shù)取下濾膜放入規(guī)定的培養(yǎng)基平板，在規(guī)定的溫度、時間培養(yǎng)后，記數(shù)。和陽性對照相比，微生物數(shù)量下降應(yīng)至少3個對數(shù)值（細菌芽孢至少2個對數(shù)值）。23第二十三頁，共28頁。驗證步驟（3）：表面挑戰(zhàn)試驗根據(jù)設(shè)施的實際情況，選擇不同材質(zhì)的載體。玻璃，不銹鋼，塑料薄膜，乳膠，墻面涂料，地面材質(zhì)接種，并確認實際數(shù)量接觸殺菌、中和、過濾……24第二十四頁，共28頁。正確使用消毒劑（1）稀釋消毒劑時應(yīng)用純化水、注射用水設(shè)備使用后作徹底清潔將環(huán)境常見菌列入驗證范疇輪換使用不同的消毒劑，消毒劑間要用無菌水充分清洗25第二十五頁，共28頁。正確使用消毒劑（2）使用消毒劑的人員要接受相關(guān)的培訓(xùn)嚴格遵守“人流”、“物流”的途徑消毒的