IVF實(shí)驗(yàn)室的基本操作2

IVF實(shí)驗(yàn)室的基本操作演示文稿目前一頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)IVF實(shí)驗(yàn)室的基本操作目前二頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室操作原則

防止污染配子標(biāo)本的標(biāo)記；受精、胚胎移植；

兩人核對(duì)毒性測(cè)試；培養(yǎng)液、耗材的使用；實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制和管理無誤無菌無毒目前三頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)輔助生殖技術(shù)基本操作配子、胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)1配子的收集和處理2體外受精技術(shù)3胚胎培養(yǎng)和移植4胚胎冷凍和解凍5目前四頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)培養(yǎng)液的準(zhǔn)備培養(yǎng)液的基本組分無機(jī)鹽離子---維持pH和滲透壓碳水化合物---能量來源蛋白質(zhì)來源抗生素礦物油有利于維持培養(yǎng)液溫度、pH值和滲透壓穩(wěn)定防護(hù)屏障，減少污染吸收脂溶性毒素防止液體蒸發(fā)目前五頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)培養(yǎng)液的準(zhǔn)備取卵前一日下午進(jìn)行原則：高效、方便、安全、經(jīng)濟(jì)四孔培養(yǎng)皿—卵處理精液所需培養(yǎng)液微滴培養(yǎng)—受精卵、胚胎胚胎移植液37℃，5%或6%CO2培箱內(nèi)平衡過夜目前六頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)卵母細(xì)胞的獲取注射hCG后36-38小時(shí)取卵陰道超聲探頭引導(dǎo)下經(jīng)陰道穿刺抽吸卵泡核對(duì)姓名解剖顯微鏡下辨認(rèn)卵冠丘復(fù)合物OCCC37℃,5－6%CO2

培養(yǎng)操作迅速，避光目前七頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)精液處理正常精液：同IUI極度少精：增加離心力死精癥：低滲腫脹實(shí)驗(yàn)附睪穿刺精子：睪丸穿刺或活檢精子：

1ml注射器針頭挑碎組織，離心懸液附睪、睪丸精子的冷凍目前八頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)常規(guī)受精

取卵后4-8h

適應(yīng)癥：精液正常，輕度少、弱精癥受精率：65－80％（MII卵）受精時(shí)間：長(zhǎng)受精、短受精目前九頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)目前十頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)卵母細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微注射適應(yīng)癥：嚴(yán)重少弱精、梗阻性無精、畸精癥、既往IVF常規(guī)受精失敗史、某些不明原因不孕等時(shí)間：取卵后2小時(shí)剝卵：利用透明質(zhì)酸酶（80mIU/ml)和機(jī)械法剝除顆粒細(xì)胞目前十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)卵母細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微注射卵母細(xì)胞成熟度的評(píng)價(jià)GVMIMII目前十二頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)卵母細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微注射操作滴的準(zhǔn)備：7％PVP加精裝針顯微注射受精率：70％目前十三頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)受精方式的選擇ICSI的安全性？逃避了自然選擇過程垂直傳遞遺傳缺陷操作過程對(duì)配子的損傷嚴(yán)格掌握ICSI適應(yīng)癥目前十四頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)非男性因素不孕ICSI治療結(jié)局非男性因素不孕癥，ICSI未顯現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)目前十五頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)檢查受精時(shí)間：受精后15－18小時(shí)機(jī)械法除去顆粒細(xì)胞及放射冠正常受精：兩個(gè)原核，兩個(gè)極體目前十六頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)目前十七頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)目前十八頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)合子形態(tài)評(píng)價(jià)原核的大小、位置及方向核仁前體的數(shù)目、大小、分布胞漿的外觀早期卵裂情況目前十九頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)異常受精－1PN發(fā)生率1－5％卵裂率74%染色體二倍體率5％囊胚形成率29%(Noyes2008)機(jī)制：雌雄原核發(fā)育不同步雌雄原核融合孤雌來源ICSI多見目前二十頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)異常受精－多PN發(fā)生率：IVF5-8%ICSI1%發(fā)生機(jī)制：

2精子進(jìn)入第2極體滯留雙倍體卵母細(xì)胞目前二十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)未見原核－未受精可能機(jī)制

卵母細(xì)胞未成熟卵母細(xì)胞染色體異常卵裂率<10%

染色體二倍體率3%優(yōu)胚率低(12/38)囊胚形成(0/12)(Noyes2008)

目前二十二頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)受精失敗受精率<20%受精率低下所有成熟卵均未受精受精失敗常規(guī)受精周期失敗率10％精子功能障礙卵母細(xì)胞成熟障礙補(bǔ)打ICSI?ICSI周期失敗率2－3％嚴(yán)重精子畸形卵母細(xì)胞激活鈣離子載體？機(jī)械激活？

目前二十三頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)胚胎培養(yǎng)目前二十四頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)胚胎質(zhì)量評(píng)價(jià)胚胎評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞數(shù)碎片:無碎片碎片<10%

碎片10－30％碎片30－50％碎片>50%

卵裂球均勻程度

目前二十五頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)囊胚的評(píng)分體系4AA囊胚腔的大小內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞分級(jí)滋養(yǎng)層分級(jí)三位評(píng)分法1:不到整個(gè)胚胎的一半2:超過了胚胎體積的一半3:完全占據(jù)整個(gè)胚胎4:擴(kuò)張囊胚5:孵化囊胚6:孵化后囊胚A包裹緊密，大量細(xì)胞B結(jié)構(gòu)松散，少量細(xì)胞C極少量細(xì)胞A許多細(xì)胞緊密結(jié)合B少量細(xì)胞，結(jié)構(gòu)松散C極少量細(xì)胞目前二十六頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)

2AA5AA4BA4CC目前二十七頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)胚胎移植操作選擇需要移植的胚胎,移入移植滴內(nèi)

35歲以下，首次移植的病人移植2枚胚胎

35歲以上，或非首次移植的病人移植3枚胚胎確認(rèn)核對(duì)患者姓名D3orD5移植？目前二十八頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)移植液移植液移植液和胚胎氣～20μl 氣胚胎移植操作目前二十九頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)胚胎冷凍意義：提高累計(jì)妊娠率，避免多胎，減少卵巢過度刺激風(fēng)險(xiǎn)溫度的急劇變化形成冰晶機(jī)械性損傷溶質(zhì)性損傷滲透壓損傷核心：避免冰晶形成冷凍方法：慢凍速融法玻璃化冷凍法冷凍保護(hù)劑滲透性保護(hù)劑：EGPRON甘油非滲透性保護(hù)劑：蔗糖大分子物質(zhì)目前三十頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)胚胎的冷凍:慢速冷凍室溫15min室溫5min室溫15minPBS1.5M丙二醇1.5M丙二醇0.1M蔗糖目前三十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)慢凍速融法冷凍程序

20℃→－7℃3℃/min-7℃人工植冰

-7℃→－30℃0.3℃/min-30℃→－120℃30℃/min目前三十二頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)胚胎復(fù)蘇12340.5M丙二醇0.2M蔗糖

5min0.2M蔗糖

5minPBS5min1.0M丙二醇0.2M蔗糖5min預(yù)防冰晶的再形成復(fù)蘇程序：室溫40s→30℃水浴1min目前三十三頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)胚胎凍融損傷復(fù)蘇胚胎評(píng)價(jià)：>50%卵裂球完整存活復(fù)蘇率>90%無損傷胚胎著床率高部分損傷胚胎著床能力下降目前三十四頁\總數(shù)三十六頁\編于十四點(diǎn)玻璃化冷凍原理