血細胞計數(shù)培訓課件(最終)

血細胞計數(shù)培訓課件(最終)第一頁，共79頁。血細胞的生成及分化第二頁，共79頁。第三頁，共79頁。血液涂片的制備1、每份樣本制作3張血涂片。要求所用玻片清潔、干燥、無塵，大小為25mm×75mm，厚度為0.8～1.2mm。并有明確標記。如果樣本中白細胞數(shù)量少時，需要制備更多血涂片（如6張）。2、使用EDTA－K2抗凝血液樣本時，應在采集后4小時內制備血涂片。在制片前，樣本應充分混勻。注意，樣本不能冷藏。3、用楔形技術制備血涂片。在玻片近一端1/3處，加一滴（約0.05ml）充分混勻的血液，握住另一張較狹窄的、邊緣光滑的推片，以30o～45o角使血滴沿推片迅速散開，快速、平穩(wěn)地推動推片至玻片的另一端。4、在1小時內，用Romanowsky類型染液染色；或在1小時內，用無水甲醇（含水量﹤3%）固定后染色。第四頁，共79頁。推片技巧

推片傾斜45°±1，推成血膜長度25～35mm，寬度18～20mm，血膜四周留有空隙區(qū)，血膜終尾離玻片終端至少10mm，血膜均勻，薄如蟬翼，尾端形如弧狀，迅速扇（搖）干，血膜具有頭、體、尾不同厚薄區(qū)域。此外，涂片時，還要考慮患者的血液狀態(tài)，如貧血程度、血液粘稠度、WBC或有核細胞多少等因素，調整推片技巧。第五頁，共79頁。血膜至玻片邊緣約5mm血膜至玻片一端約為總長1/3血涂片頭部，涂片厚血涂片體部的檢查區(qū)域血涂片尾部，涂片太薄第六頁，共79頁。良好血涂片的要求血膜至少長25mm，至玻片兩側邊緣的距離至少為5mm。血膜邊緣要比玻片邊緣窄，且邊緣光滑，適用于油鏡檢查。血細胞從厚區(qū)到薄區(qū)逐步均勻分布，末端呈方形或羽毛狀。血膜末端無粒狀、劃線或裂隙。所有這些情況會使白細胞集中在這些區(qū)域內。在鏡檢區(qū)域內，白細胞形態(tài)應無人為異常改變。通常，隨著保存時間的延長，抗凝血會造成白細胞形態(tài)的改變，如胞漿內形成空泡，核分解破裂等。應將抗凝血液保存時間的影響減小到最低限度。除部分淋巴細胞增生性疾病外，鏡檢區(qū)域內破損白細胞量應<2％。無人為污染。第七頁，共79頁。瑞氏染色-姬姆薩（Wright’s-Giemsa’s）

混合染色瑞氏染色的染料配方濃度對細胞核著色程度適中,細胞核結構和色澤清晰艷麗,對核結構的識別較佳,但對胞漿著色偏酸,色澤偏紅,對細胞漿內顆粒特別是嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差。姬姆薩染色對胞漿著色能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別對嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒著色較清晰,色澤純正,而對胞核著色偏深,核結構顯示較差。故采用以瑞氏染液為主，姬姆薩染液為輔的混合染色。第八頁，共79頁。染色步驟先用瑞氏染液將涂膜面充分覆蓋；稍等片刻再加姬姆薩染液2-3滴加減(根據(jù)涂片上細胞多少及增升程度酌情而定)；稍等1-2分鐘后,再加磷酸鹽緩沖液,加時應緩慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液形成表面張力而終止染色液加入；染色30-40分鐘；分色：用自來水緩緩沖洗至少3分鐘以上,待干，勿用濾紙吸干,以免濾紙纖維污染涂片。第九頁，共79頁。血涂片檢查的方法和程序

將血液充分混勻，盡早推成血片并染色。先用低倍或高倍鏡觀察。了解血片染色和細胞分布情況、有無血小板或紅細胞聚集（成串、成堆），尾部有無大型、成堆異常細胞等；繼續(xù)用油鏡在涂片厚薄適中處瀏覽血片，仔細觀察紅細胞、白細胞及血小板的形態(tài)，并估計其數(shù)量。如果觀察結果與儀器報告相符，不需進行任何補充試驗，即可按儀器測定的結果發(fā)出報告。如為貧血或其他血液病患者，其紅細胞數(shù)量及相關的指標（如MCV、MCH、MCHC）紅細胞體積分布寬度（RDW）、直方圖或散點圖出現(xiàn)異常，則著重觀察紅細胞的大小、形態(tài)、內涵物、著色性、大小一致性以及有無有核紅細胞等。如有異常，應加以描述并報告。正常情況下，在血片厚薄適中區(qū)域（每個紅細胞彼此相互接觸但雙不重疊），每個油鏡視野，約有血小板8～15個；或每10～30個紅細胞見到一個血小板。第十頁，共79頁。血細胞形態(tài)檢查的臨床意義正常人的血液及造血器官中，各種血細胞的數(shù)量有一定的正常范圍，不同血細胞及細胞發(fā)育的不同階段有一定形態(tài)結構特點。觀察血細胞形態(tài)、數(shù)量及其比例的變化是診斷造血系統(tǒng)疾病最基本的檢查方法。造血系統(tǒng)疾病，引起血細胞形態(tài)學的量和質的改變。血細胞形態(tài)學檢查為臨床提供診斷依據(jù)。血細胞形態(tài)學檢查應包括外周血和骨髓兩部分。外周血細胞改變往往反映骨髓病變的重要信息，有利于診斷。第十一頁，共79頁。外周血細胞的主要成分白細胞紅細胞血小板第十二頁，共79頁。白細胞計數(shù)WBC計數(shù)的正常范圍：4.0~10.0×109/L;WBC正常限度以下:

輕度減少(<4.0～3.0×109/L),

中度減少(<3.0～2.0×109/L),

極度減少(<2.0×109/L);WBC正常高限度以上:

輕度增多(>10.0～20.0×109/L),

中度增多(>20.0～40.0×109/L),

明顯增多(>40.0～80.0×109/L)

極度增多(>80.0×109/L)。第十三頁，共79頁。白細胞分類正常成人白細胞分類范圍：

縮寫百分比絕對值/109L中性粒細胞NETU50～70%2.0～7.0×109

淋巴細胞LYM20～40%0.8～4.0×109

單核細胞MON3～8%0.12～0.8×109

嗜酸性粒細胞EO0.5～5%0.02～0.5×109嗜堿性粒細胞EASO0～1%0～1×109第十四頁，共79頁。外周血中常見的五種白細胞分葉核細胞大小為10～15μm。細胞核與細胞漿比率為1:3。細胞呈圓形或卵圓形。細胞核分葉，葉間有絲狀連接，分為2～5葉。核染色質聚集。無核仁。細胞漿染成淡粉紅色，含大量特異性顆粒。桿狀核細胞大小為10～18μm。細胞核與細胞漿比率為1:1.5～1:2。細胞呈圓形或卵圓形。細胞核呈S形，C形,U形或分葉形，可見峽狀染色質。核染色質粗顆粒狀聚集。無核仁。細胞漿豐富，染成粉紅色；含大量特異性顆粒，罕見嗜天青顆粒。中性粒細胞第十五頁，共79頁。“成熟的粒系白細胞，具有彎曲、帶狀的核形，核葉間沒有線樣絲（threadlikefilament）形成，稱為桿狀核；如果連接核葉之間的橋（bridge）內有染色質，這種橋就不算細絲，也是桿狀核”；“如果細胞核扭曲（twist）、纏繞，造成一部分核壓在另一部分核之上，以至整個核的外形看不清楚，應判為分葉核”分葉核與桿狀核細胞的區(qū)分第十六頁，共79頁。第十七頁，共79頁。第十八頁，共79頁。中性粒細胞的毒性變化所謂中性粒細胞的“毒性”變化，它是指白細胞在細菌、病毒等抗原，在毒素的刺激下，造成的一種形態(tài)學變化。如胞漿內出現(xiàn)“毒性顆粒”、杜爾（Dohle）小體、空泡、脫顆粒以及胞質腫脹等現(xiàn)象；胞核出現(xiàn)固縮（pyknotic）腫脹等。檢查這種變化，首先要制備厚薄適中，染色良好的血片。因為血片太厚，細胞縮小，胞質的內容物不易看清；染色太深，會將正常中性粒細胞漿內的顆粒也染得很深而粗，會誤認為毒性顆粒；胞質內的空泡和杜爾小體等也被掩蓋而不易看清。杜爾小體是一種常在胞漿邊緣部出現(xiàn)的淡藍色小體，實際上是一小塊含RNA的胞質，故亦稱RNA包涵體。此類小體在重度細菌感染的血片中甚多見，但往往被檢驗者忽略。在EDTA抗凝血片中杜爾小體往往染呈灰色而不是淡藍色；如血液儲存過久，杜爾小體甚至會消失。

注意，血液在體外如儲存過久，粒細胞等胞質內也會出現(xiàn)空泡，核也會扭曲、固縮，會誤認為毒性變化。第十九頁，共79頁。第二十頁，共79頁。第二十一頁，共79頁。第二十二頁，共79頁。第二十三頁，共79頁。第二十四頁，共79頁。第二十五頁，共79頁。細胞大小為6～15μm。細胞核與細胞漿比率為5:1～2:1。細胞呈圓形或卵圓形。細胞核通常呈圓形或卵圓形；偶見核凹陷或輕度切跡。核染色質散在致密或粗顆粒狀聚集；副染色質無或少量。無核仁；有時，可見小的、淡的核小體。細胞漿少至中等量；淡藍色至中度嗜堿性；可見核周淡染區(qū)；有時有副核窩；小淋巴細胞無顆粒；大淋巴細胞的細胞漿較多，含少數(shù)粗大嗜天青顆粒。異型淋巴細胞細胞大小為10～25μm。細胞核與細胞漿比率為3:1～1:2。細胞形態(tài)各異，呈圓形，卵圓形或不規(guī)則形。細胞核形態(tài)各異，呈圓形，卵圓形，凹陷形，折疊形，裂隙形或分葉形。核染色質可以細致、中度致密或粗顆粒；副染色質無或少量。核仁無或多個；大小和染色性各異。細胞漿中等至大量；染灰色、淡藍色或深藍色；可見細胞邊緣染色深，核周淡染；漿細胞樣淋巴細胞常有核周淡染區(qū)或核窩；有時可見細小嗜天青顆粒；偶見空泡。

淋巴細胞第二十六頁，共79頁。第二十七頁，共79頁。第二十八頁，共79頁。異型淋巴細胞外周血中的淋巴細胞，是一類高度異質性的細胞。在病毒、毒素等抗原的刺激下，其中有一部分會發(fā)生增殖并向漿細胞或幼稚細胞（母細胞）轉化，從而導致多種多樣的形態(tài)變化。如細胞體積增大；胞質量變多，藍染加深，有的含有空胞；核呈不規(guī)則的形狀，染色質變得疏松，偶爾隱約可見核仁或絲狀分裂。凡此種種，經常被一些缺乏經驗的檢驗者誤認為是白血病的幼稚細胞。過去由于對這類淋巴細胞的本質了解不夠，曾有很多命名。我國統(tǒng)稱其為異常淋巴細胞，顯然欠妥。因為這類細胞都是正常淋巴細胞對抗原物質的反應，與白血病等出現(xiàn)的惡性（異常）淋巴細胞有根本性區(qū)別。目前國外一般稱之為不典型淋巴細胞（atypicallymphocytes）,NCCLS則建議稱其為變形淋巴細胞（variantlymphocytes）。第二十九頁，共79頁。第三十頁，共79頁。第三十一頁，共79頁。第三十二頁，共79頁。細胞大小為12～20μm。細胞核與細胞漿比率為4:1～2:1。細胞呈圓形，可有偽足。細胞核形態(tài)各異，呈圓形、卵圓形、馬蹄形、切跡形或分葉形。核染色質輕度聚集。無核仁。細胞漿含藍灰色顆粒，少量空泡。單核細胞第三十三頁，共79頁。第三十四頁，共79頁。成熟型細胞大小為13～15μm，幼稚型細胞大小為10～18μm。成熟型細胞核與細胞漿比率為1:3，幼稚型細胞核與細胞漿比率為1:2～2:1。細胞呈圓形或卵圓形。細胞核分葉狀，通常2-3葉，由細絲狀染色質連接。分葉核和桿狀核的核染色質致密、塊狀；幼稚型的核染色質疏松、細致。無核仁。嗜酸性粒細胞第三十五頁，共79頁。第三十六頁，共79頁。嗜堿性粒細胞★細胞大小為10～15μm?！锛毎伺c細胞漿比率為1:2～1:3?！锛毎蕡A形或卵圓形。★細胞核分葉狀，常被顆粒覆蓋。★核染色質聚集?！餆o核仁。★細胞漿含粗大、致密、深紫色或黑色顆粒。第三十七頁，共79頁。第三十八頁，共79頁。臨床意義臨床表現(xiàn)白細胞特點白細胞絕對值（×109/L）細胞百分率（％）急性炎癥粒細胞增多≥9.0>80細菌感染左移*（桿狀核）≥0.9>6慢性炎癥單核細胞增多≥0.8>10寄生蟲感染，過敏反應嗜酸性粒細胞增多≥0.5>7病毒感染淋巴細胞增多≥3.5>50傳染性單核細胞增多癥，巨細胞病毒感染，傳染性肝炎

異型淋巴細胞≥0.7再障，化療粒細胞減少≤1.5<10HIV感染淋巴細胞減少≤1.0<7急性白血病幼稚細胞≥0.1>2嚴重貧血，骨髓病性貧血有核紅細胞≥0.02>2第三十九頁，共79頁。外周血中的紅細胞正常紅細胞直徑7.2~7.6mm，厚度2mm圓盤狀，兩面凹陷，中央較薄，著色較淺，在涂片中形態(tài)基本一致。正常RBC在體內能經受通過微血管的嚴重變形而不受損害。在高度粘稠血液中的RBC變成橢圓形，紅細胞膜圍繞著所含Hb旋轉，像坦克的踏板（Tread）。脾臟可篩選缺乏彈性的紅細胞、紅細胞異常變形或喪失彈性的紅細胞，并加強對這些紅細胞的清除。參考值：成年男性（4~5.5）×1012/L；成年女性（3.5~5.0）×1012/L第四十頁，共79頁。第四十一頁，共79頁。紅細胞形態(tài)學診斷RBC/Hb、網(wǎng)織RBC、MCV、MCH、MCHC及RBC體積分布寬度（RDW）是判定貧血類型重要依據(jù)：

(1)Hb/RBC比值：正常人：Hb/RBC比值為3gHb/L=100萬RBC/μL即3:1。AA、溶血性貧血及繼發(fā)性貧血等屬此類。>3:1者即為大細胞高色素性貧血,<3:1者為小細胞低色素性貧血.(2)網(wǎng)織RBC是新生的RBC，可反映造血機能的好壞：正常情況下為0.5~1.0%,代償性反應者多>5%。其網(wǎng)織RBC內嗜堿性網(wǎng)織增多，代償性功能減低者，低于正常水平。多見于AA，但有不典型AA（1/4）患者可有網(wǎng)織RBC增高。網(wǎng)織RBC計數(shù)1000個RBC中有多少網(wǎng)織RBC，以其%數(shù)表示，是一個比值數(shù)，不是絕對值。精確應計算絕對值或用流式細胞儀計數(shù)更為確切。(3)MCV、MCH、MCHC反映RBC病理變化：可將貧血分為大細胞性貧血、正常細胞性貧血、小細胞低色素性貧血及單純小細胞性貧血（即小細胞性正常色素性貧血），其診斷標準及其病因。第四十二頁，共79頁。影響RBC形態(tài)學人為因素

(1)觀察RBC形態(tài)一般以外周血涂片較為可靠。(2)RBC形態(tài)與排列（如重疊、緡錢狀）與涂片技術、涂片部位及厚薄有很大關系。這點在鏡檢時應予注意。(3)即是合格涂片，RBC形態(tài)依然與涂片部位及厚薄等多種因素有關：

★如取涂片中心區(qū)域，RBC中心淡染，多>1/3細胞面積大小;

★取自涂片薄處或尾部，RBC形態(tài)誤給人以“球形”，失去雙凹盤形，中心淡染消失，所謂類球形改變；

★取厚片或制片干燥過慢，RBC未攤開，收縮變形，甚至出現(xiàn)人工中心染色過淡等；

★取厚片RBC則重疊堆積，呈假“緡錢狀”，不便查清形態(tài)；

★玻片不清潔，油脂過多或骨髓脂肪過多，制片干燥不快，RBC則會形成人工的中心淡染區(qū)或空白區(qū)。第四十三頁，共79頁。異常紅細胞第四十四頁，共79頁。第四十五頁，共79頁。第四十六頁，共79頁。第四十七頁，共79頁。第四十八頁，共79頁。第四十九頁，共79頁。第五十頁，共79頁。第五十一頁，共79頁。第五十二頁，共79頁。第五十三頁，共79頁。第五十四頁，共79頁。第五十五頁，共79頁。第五十六頁，共79頁。第五十七頁，共79頁。第五十八頁，共79頁。第五十九頁，共79頁。第六十頁，共79頁。第六十一頁，共79頁。第六十二頁，共79頁。第六十三頁，共79頁。外周血中的血小板血小板是無核細胞，形如圓盤狀，直徑只有2～4μm，在血中存活10天左右。鏡下可見血小板多為圓形或橢圓形，亦有少數(shù)梭形及不整形者，可有翻轉及布朗運動，一般有1～3個突起，血小板可分為透明區(qū)與顆粒區(qū)，二者沒有明顯分界，顆粒呈深藍色或藍綠色折光，散布于顆粒區(qū)內，可不斷運動，透明區(qū)為淺綠色折光。小型血小板占33％～47％；中型血小板占44.3％～49％；大型血小板占8％～16％；巨型血小板占0.7％～2％。第六十四頁，共79頁。在顯微鏡下觀察懸浮的微粒，或在無風情形觀察空氣中的煙粒、塵埃時都會看到這種運動。這種運動會隨著溫度的升高而越激烈。

它是1827年植物學家R-布朗首先發(fā)現(xiàn)的。作布朗運動的粒子非常微小，直徑約10-7～10-5米，在周圍液體或氣體分子的碰撞下，產生一種漲落不定的凈作用力，導致微粒的布朗運動。什么是布朗運動？第六十五頁，共79頁。第六十六頁，共79頁。第六十七頁，共79頁。血小板分布情況功能正常的血小板在外周血涂片上?？删奂蓤F或成簇。原發(fā)性血小板增多癥，血小板集團可以大至占滿整個油鏡視野。再生障礙性貧血時，血小板集團明顯減少。在血小板無力癥，則不出現(xiàn)聚集成堆的現(xiàn)象。第六十八頁，共79頁。細胞的手工計數(shù)第六十九頁，共79頁。血細胞計數(shù)板第七十頁，共79頁。第七十一頁，共79頁。

計數(shù)池的規(guī)格

計數(shù)池共有9個大方格；每個大方格內分為16中方格，每一中方格又分為25小方格。第七十二頁，共79頁。細胞計數(shù)板使用方法★實驗原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數(shù)目。★具體操作：1.