腸桿菌科鑒定

腸桿菌科鑒定流程主講人：王曦暉腸桿菌科鑒定(全)

9版伯杰鑒定細(xì)菌手冊分為24個(gè)屬，108個(gè)種

現(xiàn)增加到31個(gè)屬,常見的15個(gè)屬

1.占臨床分離菌總數(shù)50%

2.占G-桿菌總數(shù)80%

3.占敗血癥50%

4.占尿路感染70一.分布

腸桿菌科鑒定(全)二.臨床意義

有些菌屬對人類有明顯的致病作用1、鼠疫耶耳森菌--引起烈性傳染病2、埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、耶耳森菌屬可導(dǎo)致腹瀉、食物中毒.傷寒多數(shù)菌屬是腸道正常菌群，也是條件致病菌腸桿菌科鑒定(全)與人類感染有關(guān)的腸桿菌科細(xì)菌有31個(gè)菌屬，其中臨床標(biāo)本中常見的菌屬有15種克雷伯菌屬愛德華菌屬鄰單胞菌屬變形桿菌屬普羅威登斯菌屬沙門菌屬耶爾森菌屬志賀菌屬沙雷菌屬腸桿菌屬埃希菌屬哈夫尼亞菌屬枸櫞酸桿菌屬摩根菌屬多源菌屬

腸桿菌科鑒定(全)三.微生物特性

1.G-桿菌，多數(shù)有鞭毛、菌毛2.發(fā)酵葡萄糖，兼性厭氧3.氧化酶陰性4.還原硝酸鹽為亞硝酸鹽5.觸酶（＋）6.營養(yǎng)條件不高，腸桿菌科鑒定(全)涂片：G-b氧化酶試驗(yàn)非發(fā)酵菌、弧菌－+腸桿菌科細(xì)菌、不動(dòng)、嗜麥芽菌雙糖試驗(yàn)FO不動(dòng)、嗜麥芽腸桿菌科細(xì)菌苯丙，葡鹽,枸,硝,賴,鳥,氨對,山,肌,側(cè),吲哚硝酸鹽還原+－嗜麥芽不動(dòng)四、鑒定流程圖腸桿菌科鑒定(全)種屬鑒定科的特征硝酸鹽還原＋葡萄糖發(fā)酵氧化酶－觸酶＋屬間鑒定特征種間鑒定特征血清學(xué)分型報(bào)告細(xì)菌種名報(bào)告細(xì)菌血清型概述腸桿菌科鑒定(全)五、腸桿菌科的初步分群

可用苯丙氨酸和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)將腸桿菌科分為四大組腸桿菌科鑒定(全)菌屬名苯丙氨酸葡萄糖酸鹽變形桿菌屬+－普魯維登斯菌屬+－摩根氏菌屬+－克雷伯菌屬－+腸桿菌屬－+沙雷菌屬－+哈夫尼亞菌－+埃希菌屬－－志賀菌屬－－沙門菌屬－－枸櫞酸桿菌屬－－愛德華菌屬－－耶爾森菌屬－－腸桿菌科鑒定(全)六.苯丙氨酸陽性組的各屬鑒別

試驗(yàn)變形桿菌屬普魯維登菌屬摩根氏菌屬塔特姆屬H2S+---枸櫞酸鹽+/-+--靛基質(zhì)

+/-++-腸桿菌科鑒定(全)1.變形桿菌屬內(nèi)各種的鑒別

試驗(yàn)普通變形桿菌奇異變形桿菌潘氏變形桿菌產(chǎn)粘液變形桿菌靛基質(zhì)

+---鳥基酸

-+--木糖

+++-腸桿菌科鑒定(全)2.普魯維登菌屬各種的鑒別

試驗(yàn)產(chǎn)堿斯圖雷極普魯維登斯菌普魯維登斯菌普魯維登斯菌側(cè)金盞花醇+-+甘露醇+--腸桿菌科鑒定(全)生化反應(yīng) 雷氏 斯氏 產(chǎn)堿 拉氏 海氏吲哚產(chǎn)生 + + + + -肌醇 + + - - V海藻糖 - + - - -戊五醇

+ - + - +腸桿菌科鑒定(全)

3.摩根菌屬種的鑒定

試驗(yàn)

摩根摩根菌摩根菌(生物1群)賴氨酸

-

+動(dòng)力+-

腸桿菌科鑒定(全)+_－+－+－+－+－+－+苯丙氨酸+H2S枸櫞酸鹽靛基質(zhì)鳥氨酸靛基質(zhì)側(cè)金盞花醇甘露醇普通變形桿菌奇異變形桿菌潘氏變形桿菌產(chǎn)堿普魯維登斯菌雷極普魯維登斯菌斯圖普魯維登斯菌摩根菌塔特姆菌.苯丙氨酸陽性組菌屬鑒別索引圖4-腸桿菌科鑒定(全)七.葡萄糖酸鹽陽性組各屬鑒別

試驗(yàn)克雷伯菌屬沙雷菌屬腸桿菌屬

哈夫尼亞菌屬

動(dòng)力-+++DNA酶

-+--鳥氨酸

-+++枸櫞酸鹽

+++-腸桿菌科鑒定(全)原克雷伯菌屬（klebsiella）有5個(gè)種，2個(gè)亞種肺炎克雷伯菌產(chǎn)酸克雷伯菌解鳥氨酸克雷伯菌分類克雷伯菌屬臭鼻亞種鼻硬結(jié)亞種腸桿菌科鑒定(全)培養(yǎng)特征

血瓊脂上菌落較大，呈黏液狀，以接種環(huán)挑取時(shí)易拉成絲在腸道培養(yǎng)基上呈發(fā)酵乳糖小菌落在液體培養(yǎng)基內(nèi)生長混濁、濃厚、可見菌膜，管底有粘性沉淀物

K.pneumoniae

菌落（血平板）

克雷伯菌屬腸桿菌科鑒定(全)1.克雷伯菌屬各種的鑒別試驗(yàn)產(chǎn)酸克雷伯菌肺炎克雷伯菌臭鼻克雷伯菌鼻硬結(jié)克雷伯菌靛基質(zhì)+－－－甲基紅－－++丙二酸鹽

++－

+腸桿菌科鑒定(全)沙雷菌屬（普通營養(yǎng)平板）

腸桿菌科鑒定(全)2.沙雷菌屬各種的鑒別

試驗(yàn)粘質(zhì)沙雷菌液化沙雷菌紅色沙雷菌鳥氨酸++－阿拉伯糖－++腸桿菌科鑒定(全)分類：現(xiàn)有13個(gè)種2個(gè)生物型原有7個(gè)種2個(gè)生物型產(chǎn)氣腸桿菌(E.aerogenes)陰溝腸桿菌(E.cloacae)杰高維腸桿菌坂崎腸桿菌泰洛腸桿菌中間腸桿菌聚團(tuán)腸桿菌河生腸桿菌生物群1河生腸桿菌生物群2后增加7個(gè)菌阿氏腸桿菌何氏腸桿菌溶解腸桿菌超壓腸桿菌克沃尼腸桿菌考伯腸桿菌帕瑞勒腸桿菌

腸桿菌屬腸桿菌科鑒定(全)3.腸桿菌屬各種的鑒別

試驗(yàn)坂崎桿菌陰溝桿菌產(chǎn)氣桿菌格高菲桿菌賴氨酸－－++山梨醇－++－本菌屬的細(xì)菌生化反應(yīng)不典型，常用的商品化鑒定系統(tǒng)很難達(dá)到90％以上的鑒定正確率腸桿菌科鑒定(全)4.哈夫尼亞菌屬鑒定葡萄糖酸鹽枸櫞酸鹽棉子糖

+－－

腸桿菌科鑒定(全)5.葡萄糖酸鹽陽性菌屬鑒別雙岐索引圖

－－－+－－++－+－－++－－++－+－++--－－++－+葡萄糖酸鹽+側(cè)金盞花醇賴氨酸鳥氨酸賴氨酸鳥氨酸靛基質(zhì)枸櫞酸鹽山梨醇丙二酸鹽陰溝腸桿菌產(chǎn)酸克雷伯菌山梨醇肺炎克雷伯菌產(chǎn)氣腸桿菌紅色沙雷菌多源腸桿菌鼻硬結(jié)克雷伯菌臭鼻克雷伯菌哈夫尼亞菌山梨醇格高菲腸桿菌阿拉伯糖販崎腸桿菌陰溝腸桿菌粘質(zhì)沙雷菌液化沙雷菌腸桿菌科鑒定(全)八.苯丙氨酸葡萄糖酸鹽陰性組的各屬鑒別

試驗(yàn)沙門菌屬志賀菌屬埃希菌屬枸櫞酸桿菌屬耶爾森菌屬愛德華菌屬甘露醇+++++－ONPG－－+++－動(dòng)力+－++++枸櫞酸鹽+/－－－+－－賴氨酸+－+－－+腸桿菌科鑒定(全)枸櫞酸桿菌屬分類枸櫞酸桿菌屬（Citrobacter）包括11個(gè)種弗勞地枸櫞酸桿菌(C.freundii)

差異枸櫞酸桿菌（C.diversus）庫斯枸櫞酸桿菌無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌(C.amalonaticus)（C.koseri）

布拉吉枸櫞酸桿菌（C.braakii）雷登枸櫞酸桿菌（C.rodentium）塞拉克枸櫞酸桿菌（C.sedlakii）魏克曼枸櫞酸桿菌（C.werkmanii）揚(yáng)哥枸櫞酸桿菌（C.youngae）吉樂枸櫞酸桿菌（C.gillenii）穆利枸櫞酸桿菌（C.murliniae）法瑪麗枸櫞酸桿菌（C.farmeri）

腸桿菌科鑒定(全)1.枸櫞酸桿菌屬各種的鑒別

試驗(yàn)費(fèi)勞地枸櫞酸桿菌異型枸櫞酸桿菌丙二酸鹽陰性枸櫞酸桿菌鳥氨酸－++側(cè)金盞花醇－+－注意：很多鑒定系統(tǒng)的數(shù)據(jù)庫中不包括枸櫞酸桿菌屬新種名稱和分類資料腸桿菌科鑒定(全)2.愛德華菌屬各種的鑒別

試驗(yàn)遲緩愛德華菌?？茞鄣氯A菌鯰魚愛德華菌H2S+－－甲基紅++－腸桿菌科鑒定(全)3.埃希菌屬種的鑒別

試驗(yàn)大腸埃希菌大腸埃希菌（不活潑株）葡萄糖產(chǎn)氣+－動(dòng)力+－腸桿菌科鑒定(全)

致瀉性E.coli分為5類：腸毒素型大腸埃希菌(ETEC)

腸致病性大腸埃希菌(EPEC)

腸侵襲型大腸埃希菌(EIEC)

腸出血型大腸埃希菌(EHEC)

腸凝聚型大腸埃希菌(EAggEC)埃希菌屬臨床意義

(ClinicalSignificance)E.coli以腸道外感染多見，主要有泌尿系統(tǒng)感染

E.coli中的致病菌株能引起各種類型的腹瀉，根據(jù)其不同的血清型別、毒力和臨床癥狀腸桿菌科鑒定(全)鑒定要點(diǎn)不活躍大腸埃希菌與志賀菌易混淆，需相互鑒別

醋酸鈉葡萄糖銨利用粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸試驗(yàn)大腸埃希菌＋＋＋志賀菌屬－－－埃希菌屬大腸埃希菌在中國蘭平板上為藍(lán)色菌落大腸埃希菌

在伊紅美藍(lán)平板上為紫黑色菌落大腸埃希菌在麥康凱和SS平板上為紅色菌落腸桿菌科鑒定(全)培養(yǎng)特征

兼性厭氧菌營養(yǎng)要求不高菌落呈中等大小、無色、半透明、光滑在SS平板上，因產(chǎn)生H2S可形成黑色中心的菌落傷寒沙門菌菌落形態(tài)（SS平板）四沙門菌屬腸桿菌科鑒定(全)常用血清：O多價(jià)血清（含A～F群）

O、H、Vi抗原因子血清

方法：從臨床標(biāo)本中分離到菌株經(jīng)純培養(yǎng)后，符合沙門菌屬生物學(xué)特性，則

采用A-F多價(jià)血清初步確定是否為Salmonella1.如陽性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相輔助定型

2.如陰性：應(yīng)考慮是否有Vi抗原?

血清學(xué)分型加熱或傳代去除Vi抗原凝集：做O多價(jià)和單價(jià)凝集不凝集：可能為A～F以外沙門菌屬腸桿菌科鑒定(全)腸桿菌科鑒定(全)

③如是雙相菌，進(jìn)一步用復(fù)合血清1、2、5檢查第2相抗原。

群菌型Ｏ抗原Ｈ1相Ｈ2相A甲型副傷寒1,2,12a－B乙型副傷寒1,4,12b1.2

鼠傷寒1,4,12i1.2C1丙型副傷寒6,7(Vi)C1.5

C1豬霍亂6,7<c>1.5D傷寒1,9(Vi)d－

腸炎1,9,12g,m－

都柏林1,9,12(Vi)g,p－E火雞3,10e,h1.w

山夫頓3,15e,h1.bF河伯丁1,3,19g,t－腸桿菌科鑒定(全)兼性厭氧菌營養(yǎng)要求不高普通平板：中等大小、半透明、光滑鑒別培養(yǎng)基：乳糖不發(fā)酵的菌落培養(yǎng)特性菌落形態(tài)（麥康凱平板）

志賀菌屬腸桿菌科鑒定(全)種屬鑒定菌屬特征發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣賴氨酸（－）H2S（－）尿素（—）動(dòng)力（—）志賀菌屬腸桿菌科鑒定(全)5.志賀菌屬的鑒定先用志賀多價(jià)血清與菌種凝集，如多價(jià)血清凝集為志賀菌，多價(jià)里不包含鮑氏C16-20再進(jìn)一步用因子血清凝集而定群。亞群和種血清型痢疾A1－10福氏B1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5,6鮑氏C1－C15宋氏D腸桿菌科鑒定(全)6、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽陰性組菌屬鑒別

雙歧索引圖

+－－－++－++－－++－－+－－+－++苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽－-甘露醇ONPG枸櫞酸鹽動(dòng)力H2S側(cè)金盞花醇賴氨酸沙門菌屬志賀菌屬遲緩愛德華菌甲基紅異型枸櫞酸桿菌鳥氨酸葡萄糖產(chǎn)氣耶爾森菌屬丙二酸鹽陰性枸櫞酸桿菌費(fèi)勞地枸櫞酸桿菌大腸埃希菌大腸埃希菌（不活潑株）?？茞鄣氯A菌鯰魚愛德華菌腸桿菌科鑒定(全)腸桿菌鑒定選用多少生化反應(yīng)管為好苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽、賴氨酸、鳥氨酸、氨基酸對照、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、側(cè)金盞花醇、山梨醇、甘露醇、ONPG、靛基質(zhì)、雙糖（H2S）腸桿菌科鑒定(全)九.API鑒定系統(tǒng)(20E)菌液制成0.5麥?zhǔn)蠞岫?加入20E板條,腸桿菌科鑒定(全)1.變形桿菌菌落呈遷延性生長十、腸桿菌科某些菌株的特殊性質(zhì)腸桿菌科鑒定(全)2.克雷伯菌自身菌落可拉出絲來腸桿菌科鑒定(全)3.多源聚團(tuán)菌在M-H平板上產(chǎn)生黃色腸桿菌科鑒定(全)4.沙雷菌M-H平板上產(chǎn)生鐵銹紅色腸桿菌科鑒定(全)5.宋內(nèi)志賀菌無色不透明菌落腸桿菌科鑒定(全)6.能產(chǎn)生H2S的菌株變形桿菌愛德華菌傷寒沙