皮膚光老化動(dòng)物模型具體步驟及詳細(xì)說(shuō)明

皮膚光老化動(dòng)物模型具體步驟及詳細(xì)說(shuō)明型物種人?來(lái)源UVA,UVB紫外導(dǎo)致皮膚老化?模式動(dòng)物品系SPF級(jí)ICR小鼠，健康，雄性，6~8W。?實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組。?實(shí)驗(yàn)周期4-6weeks?建模方法雄性ICR小鼠，年齡約6周。小鼠在正常溫度下（23±2。0濕度（55%±10%）和光照（12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗，無(wú)紫外線照射）喂養(yǎng)。喂養(yǎng)一周，等小鼠適應(yīng)了環(huán)境，用8%硫化鈉在小鼠的背部剃出超過(guò)2厘米x3厘米的脫毛區(qū)。紫外照射方法：2根UVB燈管和4根UVA燈管（40W，北京電光源研究所）并列穿插安放至自制福照箱中作為紫外福照光源。利用紫外照度儀（UV-B紫外輻照計(jì)、UV-A紫外輻照計(jì)北京師范大學(xué)光電儀器廠）測(cè)定UVA和UVB的輻射強(qiáng)度。造模前，UV燈管預(yù)熱10min，待光源穩(wěn)定后將實(shí)驗(yàn)鼠放入自制的鼠籠內(nèi)（使小鼠間不能相互攀爬、站立），并放入箱照箱內(nèi)，鼠籠與UV燈管相距30cm，根據(jù)預(yù)試所得最小紅斑劑量（MED）及光源強(qiáng)度調(diào)節(jié)福照時(shí)間，照射期間用排氣扇降低箱體溫度。第1周按1個(gè)MED的劑量進(jìn)行照射，每周照射3次，往后每周照射劑量比前周遞增1個(gè)MED，直至第4周4個(gè)MED為止，之后保持4個(gè)MED直至第8周實(shí)驗(yàn)結(jié)束。模型組小鼠背部皮膚出現(xiàn)明顯增厚、皺紋粗深、松弛等光老化皮膚表征，說(shuō)明小鼠皮膚光老化造模成功。MED測(cè)定方法：對(duì)預(yù)實(shí)驗(yàn)小鼠分別采用30mJ/cm2、60mJ/cm2、90mJ/cm2、120mJ/cm2、150mJ/cm2、180mJ/cm2的紫外福照劑量對(duì)其背部皮膚進(jìn)行輻照，照射后24h觀察小鼠背部皮膚出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)紅斑所需劑量為最小紅斑劑量（MED）。?應(yīng)用n/a 模型評(píng)價(jià)） ?1.最小紅斑劑量（MED）劑量的確定：選用2根UVB燈管和4根UVA燈管，造模前，UV燈管預(yù)熱10min，鼠籠與UV燈管相距30cm（此時(shí)輻照儀測(cè)的UVA的總輻照量是3.25uW/cm2左右；UVB的總輻照量是0.134uW/cm2左右；這個(gè)值略有波動(dòng)）。選8只ICR小鼠，用剃毛器將小鼠背部的毛剃掉，再使用8%硫化鈉將殘留的毛發(fā)脫干凈，然后設(shè)置4個(gè)不同輻照的時(shí)間點(diǎn)：分別照射10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)2只小鼠，到輻照時(shí)間點(diǎn)，取出小鼠，正常飼養(yǎng)，第2日觀察小鼠背部的紅斑情況。輻照10分鐘和15分鐘的小鼠，無(wú)明顯紅斑；輻照20分鐘的小鼠能看到輕微的紅斑，輻照30分鐘的小鼠，紅斑很明顯。此處選用輻照20分鐘，作為預(yù)試所得最小紅斑劑量（MED）1個(gè)MED=（3.25uW/cm2+0.134uW/cm2）*20分鐘*60=4mJ/cm2全鼠背部拍照于第4周以及第8周取樣前，拍攝全鼠背部照片，以確定是否出現(xiàn)光老化特征（皺紋粗深、松弛等）。免疫指標(biāo)：脾臟和胸腺指標(biāo)的測(cè)定小鼠稱(chēng)重并執(zhí)行頸椎脫位，并立即從小鼠中取出脾臟和胸腺，立即稱(chēng)重。胸腺和脾臟指數(shù)根據(jù)下述方程計(jì)算：胸腺或脾臟指數(shù)（mg/g）=胸腺或脾臟重量/體重。指數(shù)（丁1）和脾指數(shù)（SI）可作為免疫指標(biāo)。———［組貌蛔力~組織學(xué)分析在最終紫外照射后的24h內(nèi)取皮膚標(biāo)本進(jìn)行組織化學(xué)研究。小鼠皮膚樣品在4%緩沖中性福爾馬林溶液中固定24h，并嵌入石蠟中，連續(xù)切片。標(biāo)志因子水平 —— 抗氧化指標(biāo)皮膚抗氧化指標(biāo)分析取小鼠背部皮膚組織（約2厘米乂3厘米，平均分為8塊，一塊加福爾馬林固定，用于病理檢測(cè)；一塊加RNAlater保存，-80度保存，用于測(cè)序；剩余的6塊，每2塊放在一個(gè)管子里面，-80度保存）。血清中抗氧化活性實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，小鼠禁食12小時(shí)，但允許自由進(jìn)入水。血液從眼球中收集到離心管中。在離心后（7000g,4。弓15分鐘）從血液樣品中獲得血清，