無菌操作 接種技術(shù)（植物組織培養(yǎng)）

項(xiàng)目四無菌操作任務(wù)7外植體選擇任務(wù)8外植體預(yù)處理任務(wù)9無菌接種技術(shù)【知識(shí)點(diǎn)】

掌握無菌接種技術(shù)【技能點(diǎn)】

熟練使用超凈工作臺(tái)與接種器具，會(huì)進(jìn)行初代培養(yǎng)。素質(zhì)要求：培養(yǎng)學(xué)生無菌意識(shí)、創(chuàng)新意識(shí)、團(tuán)隊(duì)合作意識(shí)和生態(tài)環(huán)保意識(shí)；具有任務(wù)執(zhí)行力，規(guī)范操作、注意安全；科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)、實(shí)事求是的工作態(tài)度。任務(wù)9接種技術(shù)模塊三ShanghaiVocationalCollegeofAgricultureForestry無菌培養(yǎng)體系的建立2供體植物材料的確定外植體的選擇外植體的滅菌外植體的培養(yǎng)外植體的接種一、定義植物材料表面滅菌后，切割或分離出器官、組織、細(xì)胞等，并將它們轉(zhuǎn)接到無菌的新培養(yǎng)基上的過程。（1）進(jìn)入緩沖間更換工作服，帶上口罩和帽子，換拖鞋，洗手等。二、接種前準(zhǔn)備工作（2）然后進(jìn)風(fēng)淋室，對(duì)工作人員進(jìn)行消毒滅菌。（有條件的情況下）進(jìn)入接種室打開超凈工作臺(tái)、打開超凈工作臺(tái)的紫外燈，檢查儀器表是否正常。（3）退出接種室后關(guān)門，并打開接種室的紫外燈。（4）脫下工作服、口罩、帽子、拖鞋，退出緩沖間關(guān)門并打開緩沖間紫外燈。（5）等待空間消毒滅菌15-20分鐘，期間準(zhǔn)備好所有外植體消毒的材料、工具和接種工具。（6）待空間消毒滅菌時(shí)間滿后，檢查紫外燈是否關(guān)閉。（7）按照步驟（1）、（2）進(jìn)入接種室。（8）調(diào)整座位高度，以達(dá)到舒適度為宜。（9）消毒工作臺(tái)，噴灑酒精于工作臺(tái)上下左右4面，勿噴出風(fēng)面。（10）取出酒精棉同一方向擦拭5個(gè)面，包括出風(fēng)口。（11）打開酒精燈調(diào)整燈芯長(zhǎng)度為1.5cm。（12）將用酒精棉擦拭接種工具，后插入消毒器滅菌（300℃）。（13）其他用具材料帶入工作臺(tái)前先需噴灑酒精消毒，分別放置于工作臺(tái)面。（14）點(diǎn)燃酒精燈，消毒雙手后開始接種操作。三、接種技術(shù)超凈工作臺(tái)面滅菌：70%酒精擦洗，并用紫外燈照射20min。接種物品的滅菌：接種服、帽子、口罩要常清洗、并用紫外線滅菌。雙手須用肥皂水洗干凈，進(jìn)行操作前再用70%酒精擦洗雙手。5）上工作臺(tái)后，用酒精棉球擦拭雙手及臺(tái)面等，包括指甲縫，最后擦拭工作臺(tái)。案例分析（1）根據(jù)需要取出無菌紙或接種盤1-2個(gè)放置燈焰區(qū)內(nèi)，一紙一瓶及時(shí)更換。（2）取出培養(yǎng)基打開瓶蓋，蓋口向下放置臺(tái)面，瓶身與出風(fēng)面平行，瓶口不能對(duì)著出風(fēng)口或向上，應(yīng)平行或微向下。（3）用冷卻的接種工具接種材料。材料要均勻分布。（4）接完一瓶用酒精棉擦拭工具插入消毒器滅菌，待消毒時(shí)間已滿取出冷卻，以便循環(huán)使用。（一般準(zhǔn)備兩套接種工具）（5）接種完畢，清理工作臺(tái)面，關(guān)閉工作臺(tái)。同時(shí)做好標(biāo)識(shí)。案例分析注意事項(xiàng)：1）防止交叉污染。左右手不能相互交叉；每切割完1瓶母種材料就更換無菌濾紙；接種工具不能碰到臺(tái)面；接種工具要全面充分灼燒。2）在酒精燈火焰的有效范圍內(nèi)操作（直徑10cm）。3）接種人員注意個(gè)人衛(wèi)生，要經(jīng)常勤剪指甲，穿工作服、戴口罩與帽子，并嚴(yán)格滅菌。案例分析酒精棉球擦拭接種工具，將鑷子和剪子從頭至尾過火，尖端燒紅。最后用高溫消毒器。接種時(shí)，接種員雙手不能離開工作臺(tái)，不能說話等。接種完畢，清理工作臺(tái)。接種注意事項(xiàng)接種用具如刀、剪、鑷子每次使用前需滅菌處理，每用一次，需重新滅菌一次。瓶口要在酒精燈火焰附近打開。如不用酒精燈，需將瓶子傾成斜角操作，并盡量在超凈工作臺(tái)靠近里面位置操作。手臂勿在培養(yǎng)基、無菌材料、接種器上方經(jīng)過。幾種接種方式在瓶中將培養(yǎng)材料剪成若干小莖段，然后用鑷子夾出來，直接接種到含有新鮮培養(yǎng)基的容器中。將培養(yǎng)材料用鑷子夾出來，放到無菌的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)盤中，用剪子剪成若干小莖段或用長(zhǎng)柄