厭氧菌的采集、送檢、培養(yǎng)、分離鑒定及注意事項

厭氧菌的培育方法厭氧菌的培育方法培育基中參與復(fù)原劑培育基中參與復(fù)原劑環(huán)境中的游離氧，以降低氧化復(fù)原電勢。如皰肉培育基、硫基乙酸鈉培育基，牛心腦浸液培育基等。常用的厭氧培育方法有很多，可依據(jù)實際狀況選用。氧環(huán)境，從而將厭氧菌培育出來。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內(nèi)空氣，然后密封袋口。先折斷境。如不突變表示袋內(nèi)已達厭氧狀態(tài)，可以孵育〔較為推舉〕。厭氧手套箱面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內(nèi)進展操作，故名。箱側(cè)有一交換室，具有內(nèi)外二門，內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著。欲放物入箱，先翻開外門，放入交換室，關(guān)上外門進展抽氣和換氣到達厭氧狀態(tài)，然后手伸入手套把交換室內(nèi)門翻開，將物品移入箱內(nèi)，關(guān)上內(nèi)門。箱內(nèi)保成水的原理。該箱可調(diào)整溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi)，還可硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調(diào)整。厭氧盒：原理同厭氧袋，有成品銷售。生二氧化碳，供細菌生長用。我沒見過。NaHCO3粉末或NaOH種細菌的平板倒扣在上面，用溶化的白蠟封邊，造成一個封閉空間。厭氧不嚴(yán)格的厭氧菌的培育，簡潔。如有梭狀芽孢桿菌。和肉湯裝入大試管，液面封凡士林，造成無氧環(huán)境。厭氧菌標(biāo)本的采集與送檢厭氧菌標(biāo)本的采集與送檢所污染;應(yīng)盡量避開接觸空氣。采集：注射器1ml液或復(fù)原性肉湯，然后再抽取標(biāo)本。在緊急狀況下，可用棉拭取材，并用適合的培育基轉(zhuǎn)送。集方法，如針筒抽取等，應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，嚴(yán)禁接觸空氣。送檢方法與處理20～30min2h，以防止標(biāo)本中兼性厭氧菌過度生殖而抑制厭氧菌的生長。如不能而且在低溫時氧的溶解度較高)。針筒運送：一般用無菌針筒抽取標(biāo)本后，排盡空氣，針頭插入送，如血液、膿液、胸腹水、關(guān)節(jié)液等醫(yī).空氣，充以C02即可。用特制運送培育基，確保無氧環(huán)境，確保不被污染，確?？焖偎蜋z。厭氧罐或厭氧袋運送將厭氧罐或厭氧袋內(nèi)裝入可有效消耗氧接種的培育皿等。厭氧菌的分別鑒定及留意事項厭氧菌的分別鑒定及留意事項部位，常引起內(nèi)源性感染。據(jù)文獻報道，約60%的臨床感染有厭氧部位，常引起內(nèi)源性感染。據(jù)文獻報道，約60%的臨床感染有厭氧的診斷、治療都有重要意義。一、厭氧菌樣品的采集標(biāo)本避開正常菌群污染和氧接觸，承受以下方法：盡空針及針頭內(nèi)的氣體)，將針頭插入無菌橡皮塞內(nèi)送檢。肺分泌物和痰標(biāo)本：用支氣刷實行或環(huán)甲膜穿刺術(shù)。尿液標(biāo)本：用無菌注射器從恥骨上緣行膀脫穿刺術(shù)抽取。一端針頭刺入靜脈，待血液流出后將另一端針頭馬上插入培育瓶內(nèi)(瓶內(nèi)負(fù)壓)，使血液直接流入培育瓶內(nèi)。竇道、深部膿腫等的標(biāo)本:可用特別采樣器實行。二、涂片與染色標(biāo)本涂片、革蘭染色、鏡檢，觀看細菌的形態(tài)和染色性，并估量+++“表示。鏡檢不僅能反映各種厭氧菌的特別形態(tài)，同時也能為鑒定厭氧菌供給參考和依據(jù)。如脆弱擬桿菌菌體瘦長，兩端尖：韋榮球菌是微小的革蘭陰性球菌。厭氧菌芽胞的位置、形態(tài)、大小對鑒定很有意義，必要時作芽胞形成試驗。例如，芽胞在菌體極端且大于菌體呈鼓槌狀，是破傷風(fēng)梭菌的特征。依據(jù)厭氧菌的特別形態(tài)，可初步確物。三、標(biāo)本接種35%~l0%CO2的環(huán)境中培育。假設(shè)只要求檢出厭氧菌，只需接種l個1個相應(yīng)的選擇厭氧血瓊脂平板。為便3段劃線接種，在121張甲硝嘩(5mg/片)紙片，假設(shè)消滅模糊抑菌圈，則提示有厭氧菌生長。生與否也有助于鑒定，依據(jù)上述特征，可初步推想?yún)捬蹙姆N類：革蘭陰性桿菌在BBElmm有黑色的暈，可初步鑒定為脆弱擬桿菌。燈照耀有磚紅色熒光者，為產(chǎn)黑素普雷沃菌。菌落沉入瓊脂內(nèi)，使培育基外表留有小坑者，可能是解脲擬桿菌和纖細擬桿菌。菌落外表有小斑點，或如面包屑，結(jié)合涂片所見，可初步鑒定為具核梭桿菌。革蘭陰性球菌菌體很小，排列成雙、短鏈或小堆，菌落小，不透亮，可能是小韋榮球菌。革蘭陽性球菌排列成長短不等的鏈，可能是消化鏈球菌。蘋蘭陽性無芽胞桿菌菌落呈臼齒形、粗糙，結(jié)核膿樣分泌物中有硫黃樣顆粒，可能是放線菌。菌體呈X、Y、V排列，菌落小，灰白，不透亮，可能是丙酸桿菌。5有雙環(huán)溶血，卵黃平皿上卵磷脂酶試驗和Nagler試驗陽性，涂片染色為革蘭陽性短粗桿菌，有芽胞，有莢膜，可鑒定為產(chǎn)氣莢膜梭菌。四、耐氧試驗4~5共性狀不同的菌落，每個菌落21塊厭氧血瓊脂平板(每個瓊脂4~6區(qū)，每區(qū)種一個可疑菌落)，然后將平板分別放置在需氧、二氧化碳和厭氧環(huán)境中培育。專性厭氧菌;在需氧和厭氧環(huán)境中均能生長者為兼性厭氧菌;在需氧和二氧化碳環(huán)境中生長，而在厭氧環(huán)境中不生長者為專性需氧菌;在好的細菌為需二氧化碳菌。五、鑒定試驗查。驗、觸酶試驗、卵磷脂酶試驗、脂酶試驗、明膠液化試驗及膽汁肉湯生長試驗和硫化氫試驗等。目前用于厭氧菌快速鑒定有胞外酶試驗，4h即可觀看結(jié)果;自動微生物鑒定系統(tǒng)，如VITEK-ANIMicroScan-ANI①厭氧菌標(biāo)本在采集和運輸?shù)倪^程中必需與空氣隔絕(厭氧菌30min內(nèi)完成，同時應(yīng)避開正常菌群的污染。②培育基要穎配制，假設(shè)儲存太久，有氧氣溶解在外表