hplc1260操作與維護課程cn201104v

2023年5月30日AgilentLC1260化學工作站操作培訓2第一天第一章AgilentLC1260系統(tǒng)硬件概觀第二章AgilentLC1260系列在線脫氣機第三章AgilentLC1260系列泵第四章AgilentLC1260手動、自動進樣器工作午餐第五章AgilentLC1260柱溫箱第六章AgilentLC1260檢測器第七章Agilent

InstrumentUtilities軟件小練習一熟悉InstrumentUtilities軟件第二天第八章化學工作站的初步認識及熟悉小練習二“視圖”菜單的熟悉第九章方法的編輯和保存實驗一方法編輯及數(shù)據采集工作午餐第十章譜圖處理及優(yōu)化第十一章積分參數(shù)優(yōu)化實驗二譜圖處理實驗三積分的優(yōu)化第三天第十二章校正及定量基礎第十三章建立校正表實驗四外標法定量工作午餐實驗五

內標法定量第十四章設定報告格式實驗六校正曲線的重新校正和報告的設定附錄一高級功能簡介第四天第十五章日常維護與常見色譜故障實驗七AgilentLC1260的日常維護和保養(yǎng)結業(yè)午餐自由討論練習作息時間為09:00~12:00;13:00~17:00最后一天下午為自由討論，自愿參加AgilentLC1260化學工作站培訓日程安排

第一章AgilentLC1260硬件概觀3G1312BG1312C二元泵二元泵VLG1311B四元泵G1311C四元泵VLG1316A標準柱溫箱G1316C高性能柱溫箱G1322A標準真空脫氣機G1379B微量真空脫氣機G1314FG4212BG1321BG1362A可變波長檢測器二極管陣列檢測器熒光檢測器示差折光檢測器G1329BG1367E標準自動進樣器高性能自動進樣器典型LC1260的堆積方式脫氣機溶劑柜泵自動進樣器柱溫箱檢測器4優(yōu)化流路減小死體積流路自上而下5儀器背面連線每個模塊有獨立的電源LC1260各模塊(脫氣機除外)均由CAN線連接檢測器與化學工作站之間用網線(LAN線)連接脫氣機與泵之間用遙控線連接(錯誤信號輸出)外設板用于外圍設備(例如：樣品瓶條形碼讀取器等）網卡CAN線遙控線外設板6指示燈狀態(tài)通過LED顯示儀器六種狀態(tài)：關機（未通電）就緒（已開機）未就緒正在運行出現(xiàn)故障固件升級出現(xiàn)嚴重故障燈熄滅燈熄滅黃燈綠燈紅燈黃燈閃爍紅燈閃爍管線接頭Agilent系統(tǒng)的所有連接口都與Swagelok兼容例外：手動進樣閥的連接口G1328A/B/C(Rheodyne型號7725i)與Rheodyne兼容）7如果接頭過長，則可能漏液不能完全密合混合腔如果接頭過短，則有死體積存在，相當于一個混合腔，導致色譜峰形變差0.090in.0.130in.0.090in.0.170in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090in.0.080in.2.3mm4.3mm8Agilent

LC毛細管的顏色9第二章AgilentLC1260在線真空脫氣機 AgilentLC1260在線脫氣機微量真空脫氣機：G1379B標準真空脫氣機：G1322A四元泵內嵌式真空脫氣機10AgilentLC1260真空脫氣機

—G1322A或G1379B建議:低壓混合進行梯度洗脫，提高泵的可靠性能。提高泵在低流速下的操作性能用于需要脫氧的檢測器性能/用途:與He脫氣相比，更方便，更節(jié)省費用。高性能脫氣，避免了煩瑣的操作，提高儀器穩(wěn)定性。內部延遲體積小，便于快速進行溶劑切換。四通路系統(tǒng)，操作靈活。與LC1260其它組件堆積在一起，用遙控線連接，用于傳輸錯誤信號。11AgilentLC1260真空脫氣機

（G1379B）12控制組件及壓力傳感器電磁閥真空泵真空室AgilentLC1260真空脫氣機構造（G1379B）注意G1379型脫氣機不能用注射器抽！13在線真空脫氣機工作原理脫氣機單元前視圖真空腔每個真空腔中管路的體積為1.5mlLC1260四元泵內嵌式真空脫氣機真空泵壓力傳感器1415不進行溶劑脫氣處理使用氦氣進行溶劑脫氣使用安捷倫真空脫氣機吸光值123456789時間(分鐘)溶劑:甲醇;紫外檢測波長:210nm使用真空脫氣機可以降低噪音16溶解酵素分析

2425262728296050403020100mAU第一次實驗最后一次實驗(30小時后)使用氦氣脫氣脫氣機在線脫氣2425262728296050403020100mAU最后一次實驗(30小時后)第一次實驗使用真空脫氣機可以保證保留時間的重現(xiàn)性17AgilentLC1260泵單元泵：G1310B四元泵：G1311B四元泵VL：G1311C二元泵：G1312B二元泵VL型：G1312C第三章AgilentLC1260泵18密封金墊藍寶石插件紅寶石球彈簧內插件入口出口往復式活塞泵自溶劑瓶至液相系統(tǒng)溶劑傳輸系統(tǒng)工作原理19單向閥P單向閥可以消除相位干擾通常也需要阻尼器增加了單向閥的使用數(shù)量傳統(tǒng)的溶劑傳輸系統(tǒng)——并聯(lián)柱塞泵20單向閥脈沖阻尼器減少了單向閥用量同樣需要阻尼器可以使用壓縮因子補償Agilent溶劑傳輸系統(tǒng)——串連柱塞泵主泵腔副泵腔21特征/用途流量范圍寬0.2~10

ml/min最高耐壓：600bar雙柱塞，可變沖程，阻尼器可以減小流量脈沖。改進的閥系統(tǒng)可以延長使用壽命，降低維修成本。容易維護和維修。直接與溶劑瓶，清洗閥和管路連接，便于快速啟動?？梢陨壷了脑?。建議...常規(guī)質量控制分析簡單混合物的分析用于體積排阻色譜半制備工作AgilentLC1260單元泵—G1310B22AgilentLC1260單元泵前視圖阻尼器出口單向閥沖洗閥入口單向閥泵頭23單元泵工作原理入口單向閥241.寶石活塞桿2.活塞外框架(包括彈簧)3.支持環(huán)4.泵頭密封墊5.泵腔6.入口單向閥7.出口單向閥8.塑料鎖定螺栓9.沖洗閥10.泵頭固定螺絲泵頭結構圖AgilentLC1260單元泵和四元泵的閥25PTFE過濾芯閥體密封金墊出口單向閥入口單向閥沖洗閥密封金墊密封金墊PTFE過濾芯:p/n01018-2270726墊圈清洗密封圈組件密封墊當流動相中鹽濃度>0.1mol/L時，使用泵頭密封墊清洗裝置可以減小密封墊的磨損對于AgilentLC1260系列泵為可選件用10%異丙醇水溶液沖洗蠕動泵AgilentLC1260泵頭密封墊沖洗裝置

－SealWash（可選部件）273.SealWash支撐環(huán)4.WashSeal密封墊5.SealWash墊圈6.SealWash固定架和支撐環(huán)背環(huán)7.活塞密封墊8.泵腔14.Seal

Wash蠕動泵帶有泵頭密封墊清洗裝置(SealWash)的泵頭結構圖28建議...可使用常規(guī)柱子，也可使用2.1-4.6mm內徑的柱子開發(fā)快速液相方法應用于研究和常規(guī)分析特征/優(yōu)點四通路/低壓混合能靈活地進行等度或梯度洗脫。流量范圍從0.2~10ml/min最高耐壓：600bar無需消耗昂貴的He而能進行高性能真空脫氣。自動沖程調節(jié)，混合非常均勻，降低基線噪音。對于高鹽流動相，可選擇泵頭密封墊清洗裝置清洗密封墊。AgilentLC1260四元泵—

G1311B29AgilentLC1260四元泵前視圖溶劑瓶組件脫氣機進口溶劑柜溶劑管路脫氣機出口到自動進樣器的管路四元比例閥廢液管沖洗閥30四元泵工作原理示意圖入口單向閥31優(yōu)點/特征對于有強紫外吸收的流動相，使用靜態(tài)混合器可以降低基線噪音最高耐壓：600bar可以選擇溶劑切換閥自動進行溶劑切換對于高鹽流動相，可選擇泵頭密封墊清洗裝置流量范圍：0.001~5ml/min可以對溶劑的壓縮因子進行校正AgilentLC1260二元泵—

G1312BAgilentLC1260二元泵流路圖32標準配置低延遲體積配置預混合器阻尼器混合器壓力傳感器ABAB33系統(tǒng)耐壓高達600bar

使用不銹鋼加固的主動閥、單向閥、沖洗閥

壓力傳感器與阻尼器獨立設計

標準配置延遲體積為600~800mLBA600bar阻尼器400μL混合器壓力傳感器緩沖毛細管AgilentLC1260二元泵——流路標準配置Agilent1260型二元泵——流路低延遲體積配置34延遲體積僅120μL！僅需斷開此處!BA壓力傳感器沖洗閥600barDamper400μlMixer壓力傳感器沖洗閥預混合器流路在低流量下如果要快速變化系統(tǒng)的溶劑梯度，可以不連接阻尼器和混合器，以便將系統(tǒng)的延遲體積從600-800μL減小至120

μL。35AgilentLC1260二元泵——溶劑切換閥（可選部件）A泵B泵沖洗閥溶劑切換閥靜態(tài)混合器AgilentLC1260二元泵的閥36PTFE過濾芯閥體密封金墊出口單向閥入口單向閥沖洗閥PTFE過濾芯:p/n01018-22707入口閥過濾芯密封金墊37第四章AgilentLC1260手動、自動進樣器AgilentLC1260進樣器標準自動進樣器型：G1329B高性能自動進樣器：G1367E雙通道自動進樣器PS:G2258A微量多孔板自動進樣器:G1377A制備型自動進樣器:G2260A手動進樣器：G1328C38充樣位置(Load)進樣位置(Inject)至廢液定量環(huán)（固定體積）來自泵至色譜柱進樣針至色譜柱來自泵至廢液進樣器基本原理——六通閥39充樣位置進樣位置1.樣品環(huán)6.廢液5.放空管4.樣品環(huán)3.色譜柱2.接泵出口廢液管（孔5和6）廢液管末端與進樣口水平(Load)(Inject)手動進樣器的實際流路連接圖40性能/優(yōu)點進樣體積重復性高(5-100μl

RSD<0.25%；1-5μlRSD<1.0%)進樣動態(tài)范圍寬連續(xù)沖洗流路并有洗針功能－降低樣品殘留，一般小于0.05%。所有驅動均采用電子驅動可以容納不同規(guī)格的樣品瓶靈活的進樣程序編制可以進行樣品前處理（例如柱前衍生）

使用旁路可以降低延遲體積AgilentLC1260標準自動進樣器—

G1329B推薦…進樣體積從0.1μL到100μL,經過擴展，進樣量可擴展至1800μL最多可容納100個樣品瓶自動樣品前處理41樣品容量100x2mL樣品瓶，100位樣品盤40x2mL樣品瓶，40位樣品盤15x6mL樣品瓶，15位樣品盤117x2mL樣品瓶，擴展樣品盤微量樣品瓶用于小體積樣品分析進樣量標準進樣體積:0.1-100μL使用多次吸樣，可以擴展至1.8mL進樣量擴展的單次進樣體積:0.1-900μL精度進樣量5-100μL時，RSD<0.25%進樣量1-5μL時，RSD<1%殘留不使用洗針功能 殘留量<0.1%使用洗針功能 殘留量<0.05%延遲體積主路狀態(tài)時：300μL+進樣體積旁路狀態(tài)時：6.2μLAgilentLC1260標準自動進樣器技術參數(shù)42來自泵至柱溫箱計量泵標準自動進樣器管路連接43計量泵六通閥(旁路位置)Bypass定量環(huán)來自泵系統(tǒng)至廢液口計量泵活塞桿回歸零位針座毛細管去往色譜柱去往色譜柱來自泵系統(tǒng)計量泵抽取樣品六通閥(旁路位置)Bypass來自泵系統(tǒng)去往色譜柱六通閥(主路位置)Mainpass1.六通閥切換到旁路位置2.計量泵活塞桿回歸零位3.抬起進樣針4.將樣品抓至針座上5.針扎入樣品瓶6.計量泵抽取樣品7.針從樣品瓶中拔出8.將樣品瓶抓離針座9.針扎入針座毛細管10.六通閥切換到主路位置11.將樣品瓶放回樣品盤標準自動進樣器進樣過程44min05101520253035mAU020406080100#1#10#5#810μL樣品，每次進樣1μL，進樣十次AgilentLC1260標準自動進樣器進樣測試45洗針功能把樣品殘留降低到最小限度多次吸液

用于進樣量大于100μL的情況

程序進樣可以非常靈活地執(zhí)行用戶的進樣程序要求Agilent1260標準自動進樣器特殊功能46min510mAU04樣品:0.01mol/L咖啡因,普里米酮，非那西汀進樣量:1μL

洗針后的空白進樣(1μL)不洗針后的空白進樣(1μL)樣品殘留峰使用洗針功能可以降低樣品殘留47樣品殘留(%)進樣體積(μL)00.050.10.150.20.250.30.350.10.515普里米酮00.050.10.150.20.30.350.10.515非那西汀0.25進樣體積(μL)樣品殘留(%)不洗針洗針(不帶瓶墊)洗針(帶瓶墊)洗針對樣品殘留的影響（清洗瓶蓋帶瓶墊/不帶瓶墊）48進樣量:0.1-900μL使用多次吸樣裝置可以擴展進樣量至1800μL900μL計量裝置至廢液來自泵至色譜柱1500L針座毛細管900μL針900μL定量環(huán)

帶有多次吸樣裝置的標準自動進樣器49用于樣品衍生或樣品前處理計量裝置至廢液來自泵至色譜柱樣品試劑標準自動進樣器的程序進樣功能50AgilentLC1260進樣器控溫模塊—G1330B

推薦...對于熱依賴性的樣品使用生化、制藥行業(yè)臨床實驗室性能/優(yōu)點半導體控制，可以非常方便、準確的升溫和降溫控溫范圍:4-40℃(室溫為25℃)可容納100個樣品瓶(冷卻)可更換樣品盤自動進樣器控溫模塊控溫原理51室溫空氣入口熱空氣出口加熱/冷卻部件熱交換器半導體部件52性能/優(yōu)點：定量環(huán)前置（易于拆卸更換）進樣體積0.1-100μL

(可擴展至1800μL)惰性PEKK針通過進樣針外部清洗，最大限度地減少了交叉污染設置進樣后自動進樣器切換旁路，減小延遲體積，適合快速梯度和快速平衡有不同類型的樣品容器，如多孔板和樣品瓶，使樣品處理更靈活、更方便。用384孔板可以在無人值守的情況下分析768個樣品。AgilentLC1260高性能自動進樣器—G1367E高性能自動進樣器的內部結構

針座進樣針組件樣品環(huán)53計量泵蠕動泵進樣閥清洗孔高性能自動進樣器進樣過程54進樣前：主路（Mainpass）進樣：主路（Mainpass）吸取樣品：旁路（Bypass）洗針：旁路（Bypass）55AgilentLC1260柱溫箱柱溫箱：G1316A柱溫箱：G1316C第五章AgilentLC1260柱溫箱56推薦...溫度控制范圍：

低于室溫10℃~80℃保留時間的再現(xiàn)性需要穩(wěn)定

的溫度如果需要在高于或低于室溫

進行分離操作時，需要使用

柱溫箱特征/優(yōu)點大空間，可以容納三根長色譜柱更換柱子非常方便降溫非常方便可以記錄進樣次數(shù)使用切換閥可以進行柱切換(可選)兩個單獨的加熱區(qū)可以分別控制溫度可以進行程序升溫內部死體積小(左側3μL，右側6μL)AgilentLC1260柱溫箱—G1316A57推薦…溫度控制范圍：

低于室溫10℃~100℃保留時間的再現(xiàn)性需要穩(wěn)定

的溫度如果需要在高于或低于室溫進行分離操作時，需要使用柱溫箱特征/優(yōu)點大空間，可以容納三根長色譜柱更換柱子非常方便降溫非常方便可以記錄進樣次數(shù)使用切換閥可以進行柱切換(可選)兩個單獨的加熱區(qū)可以分別控制溫度可以進行程序升溫內部死體積小(左側3μL，右側6μL)，可配置低延遲體積工具包AgilentLC1260柱溫箱—G1316C58色譜柱:250x1mmVydacTP218;流動相:Water/Acetonitrile+TFA

70.4070.5070.6070.7070.8070.9071.0071.1071.2071.3012345678910Hoursretentiontime白天夜晚傳統(tǒng)普通柱溫箱Agilent1260柱溫箱使用Peltier半導體冷熱控溫模塊白天AgilentLC1260柱溫箱與普通柱溫箱對比圖59樣品： PNAEPA標樣色譜柱： 250x2.1mmPAH,5μm色譜柱溫度： 18℃流量： 0.4ml/min流動相： A:水B:乙腈 A:B=50:50流動相梯度： 在22.5分鐘時，B從50%變?yōu)?5%123456min510152025mAU051015202530789101112131415在低于室溫的條件下改善了化合物的分離性能柱溫箱的控溫性能60min510152025mAU0102030213546978101112141315161718°C25°C30°C柱溫通過改變柱溫實現(xiàn)PNAs分析條件的優(yōu)化樣品： PNAEPA標樣色譜柱： 250x2.1mmPAH,5μm色譜柱溫度： 18，25和30℃流量： 0.4ml/min流動相： 水:乙腈=50:50流動相梯度： 在22.5分鐘時，B從50%變?yōu)?5%G1316A柱溫箱前視圖

61來自自動進樣器至流通池入口毛細管柱識別卡套柱切換閥泄漏傳感器低延遲體積柱前預熱器柱切換閥G1316C柱溫箱前視圖

62柱識別系統(tǒng)

63柱識別卡套必須安裝在距離識別傳感器2mm范圍之內，且柱識別卡套的Agilent圖標朝前64柱切換閥(可選)常用柱切換閥：2pos/6port閥2pos/10port閥65AgilentLC1260檢測器可變波長檢測器(VWD)：G1314F G1314B

VL G1314C

VL+二極管陣列檢測器(DAD)：G4212B G4212A G1315D

VL G1315C

VL+

示差折光檢測器(RID)：G1362A熒光檢測器(FLD)：G1321B蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)：G4218A第六章AgilentLC1260檢測器66推薦…產品開發(fā)及質量控制需要高靈敏度檢測器的應用特征/優(yōu)點從190~600nm波長范圍，噪音小，基線穩(wěn)定(±0.75x10-5AU)*可變波長檢測，可以對不同物質的檢測獲取最大靈敏度。更換氘燈及清洗檢測池非常方便根據不同需要選擇不同的流動池。內置鈥玻璃可以非?？焖俜奖愕剡M行波長校準。AgilentLC1260可變波長檢測器（VWD）67可變波長檢測器VWD前視圖流動池的后壓非常重要，一定要使用適當?shù)某隹谶B接管。氘燈流通池68氘燈光源透鏡濾光片（鈥玻璃/遮光）入射狹縫反射鏡1＃反射鏡2＃光柵分光器參比光電二極管樣品光電二極管流通池VWD光路圖69min02468101214mAU020040060080010001260204nm254nm368nm1-羥基-苯并-三氮唑Hydroxybenzotriazole三甲氧芐氨嘧啶Trimethoprim呋氮唑酮(痢特靈)Furazolidone氯霉素Chloramphenicol萘啶酸NalidixicAcidVWD檢測器的選擇性和靈敏度70VWD的氘燈斷開電纜線接頭，松開固定螺絲，就可將氘燈拆出71VWD流通池標準池(10mm,14μL)池螺母彈簧墊片壓縮墊片石英窗密封墊圈2134572AgilentLC

1260二極管陣列檢測器(DAD)性能/優(yōu)點靈敏度高有四種類型的DAD模塊選擇具有1024個二極管和可變狹縫可根據需要選擇不同的流動池可以進行自動峰檢索利用紫外譜圖可以進行色譜峰定性推薦...用于研究及方法開發(fā)用于多波長檢測色譜峰純度檢查色譜峰確認（定性）G4212A和G4212BDAD的前視圖73氘燈流通池模塊編號采集頻率狹縫寬度最大波長G4212A160Hz1,2,4,8nm640nmG4212B80Hz4nm640nm氘燈流通池二極管陣列光柵反光鏡狹縫折疊鏡G4212A和G4212BDAD光路圖74G4212A和G4212B

DAD的流通池新型流通池卡套式流通池有射頻標簽光程長度10mm光程長度60mm最大壓力60bar可選配在線壓力緩解組件（與LC/MS聯(lián)用）卡套式測試流通池有射頻標簽無流路連接隨G4212A/B

DAD標配DAD測試時使用

75進出進出最大壓力60bar!!流通池類型對靈敏度的影響(60mmvs.10mm)76min00。20。40。60。811。21。41。61。8mAU0510152025303540

DAD1B，DAD1A，DAD:SignalA，251nm/Bw:10nmRef360nm/Bw:100nm(F:\AE4-ANTHRACENE\ANTHRA-STD-CEL7。D)

DAD1B，DAD1A，DAD:SignalA，251nm/Bw:10nmRef360nm/Bw:100nm(F:\AE4-ANTHRACENE\ANTHRA-HS-CEL07。D)卡套式流通池(10mm，1.0μl)

S/N:612樣品:蒽，16.4pg/μl色譜柱:2.1x50mmBEHC18，1.8μm流動相:水/乙腈=30/70流速:0.5ml/min檢測波長251，峰寬>0.05min，進樣體積:1μl柱溫:36°C

卡套式流通池(60mm，1.3μl)

S/N:2339~靈敏度高出四倍77G1315C和G1315D

DAD前視圖模塊編號采集頻率狹縫寬度最大波長G1315C80Hz1,2,4,8,16nm950nmG1315D20Hz1,2,4,8,16nm950nm流通池入口管路氘燈流通池室鎢燈78鎢燈耦合透鏡氘燈光源透鏡(消色差透鏡)氧化鈥濾光片支撐透鏡流通池光譜透鏡光柵二極管陣列狹縫G1315C和G1315D

DAD光路圖79標準池G1315C和G1315D

DAD的流通池池螺母彈簧墊片壓縮墊片石英窗支撐環(huán)石英窗密封墊圈123456DAD的氘燈8081數(shù)據恢復卡*專利數(shù)據恢復卡*-DRC所有的信號，譜圖和數(shù)據都緩存于高容量的植入式的壓縮閃存卡，適用于21CFR部件11。儀器和計算機通訊故障時，防止數(shù)據的丟失。一旦暫時通訊失敗，自動運行恢復。一旦一直通訊失敗，在軟件，計算機，或儀器重啟后，手動運行恢復。DRC：DataRecoveryCard82無線電射頻鑒別標簽RFID標簽記錄了所有與重現(xiàn)儀器條件相關的數(shù)據。能最小化產生錯誤的危險，因為所有測試條件都有文件證明。RFID標簽中數(shù)據與每一個原始數(shù)據一起保存，能為操作者提供明確的答案。“此色譜圖是使用哪一種類型的流通池產生的–什么是光程長和池體積?”“燈的累計工作時間是否超過了預先設定的限度?”流通池

光程長池體積最大壓力最后測試通過的數(shù)據產品編號序列號生產日期紫外燈

累計工作時間實際工作時間點燃次數(shù)最后測試通過的數(shù)據產品編號序列號生產日期DAD鑒別標簽

RFID:RadioFrequencyIdentification831nm2nm4nm8nm16nm狹縫對光譜分辨率的影響841nm2nm4nm8nm狹縫對色譜靈敏度的影響85定性分析——探索三維立體影像86氙燈激發(fā)光柵發(fā)射光柵透鏡透鏡反射鏡樣品池參比二極管光電倍增管狹縫狹縫狹縫散射器熒光檢測器FLD示意圖871.流路入口2.加熱器3.熱交換器4.樣品池5.沖洗閥(PurgeValve)6.循環(huán)閥(RecycleValve)7.廢液桶8.參考池9.溶劑瓶示差折光檢測器RID示意圖第七章Agilent

InstrumentUtilities軟件本章主要內容：Instrument

Utilities軟件界面介紹使用Instrument

Utilities軟件進行LC模塊測試使用Instrument

Utilities軟件進行LC模塊校正Instrument

Utilities軟件的其它功能88AgilentInstrumentUtilitiesAgilentLabAdvisor更多的測試和診斷工具更全面的用戶權限管理儀器硬件用戶文檔儀器故障警告提示AgilentInstrumentUtilities標準維護測試功能儀器硬件用戶文檔狀態(tài)報告免費軟件付費軟件89啟動InstrumentUtilities90雙擊桌面快捷鍵或開始>>所有程序>>AgilentTechnologies>>AgilentInstrumentUtilities第一次進入InstrumentUtilities軟件時，如下圖所示InstrumentUtilities—配置儀器9112345InstrumentUtilities—配置儀器926在Active項下，出現(xiàn)綠色對勾表明軟件已經開始監(jiān)控儀器。要停止監(jiān)控，點擊Disconnect（斷開）InstrumentUtilities—查看儀器狀態(tài)93InstrumentUtilities—系統(tǒng)信息94儀器細節(jié)模塊狀態(tài)模塊信息InstrumentUtilities—測試(Tests)點擊需要測試的模塊選擇模塊的測試項目點擊立即運行測試95123InstrumentUtilities—泵的測試96InstrumentUtilities—G4212A/B

DAD的測試97G4212A/B

DAD常用的測試項目會使用卡套式測試池(G4212-60011)InstrumentUtilities—校正98點擊需要校正的模塊選擇模塊的校正項目點擊立即運行校正123InstrumentUtilities—泵的校正泵：泵的溶劑校正泵的彈性校正99InstrumentUtilities—G4212A/B

DAD的波長校正100檢測器：檢測器的波長校正InstrumentUtilities—工具101點擊需要控制的模塊選擇所需的工具點擊開始，在測試和維護過程中控制和監(jiān)控儀器123更換自動進樣器的進樣針和針座毛細管。選擇自動進樣器模塊的MaintenancePosition（維護位置），進入自動進樣器的位置調整界面。例子：使用工具進行自動進樣器的維護102InstrumentUtilities—早期維護反饋（EMF）點擊需要設置監(jiān)控的模塊設置模塊維護反饋限值點擊保存改變103123化學工作站中的EMF提示警告但不阻止你繼續(xù)工作104InstrumentUtilities—狀態(tài)報告填寫報告名稱選擇報告中包含儀器實際值輸入注釋點擊創(chuàng)建報告選擇報告中要包含的信息10512456選擇報告打印的紙張類型3InstrumentUtilities—文檔106在線查看用戶手冊107模塊部件維護周期措施/說明泵沖洗閥的PTFE濾芯每月重新裝回沖洗閥之前一定要檢查密封金墊，如果損壞應該及時更換。溶劑入口過濾頭每半年切忌在沒有安裝過濾頭的情況下使用系統(tǒng)。泵頭密封墊，金密封墊，塑料蓋帽，SealWash密封墊和墊圈每年更換泵頭密封墊時請檢查活塞桿表面是否有劃痕或沉積物。請勿再次使用用過的泵頭密封墊?；钊麠U，入口和出口單向閥每兩年可用乙醇或牙膏清洗活塞桿；只能使用原裝、長壽的安捷倫活塞桿。更換主動閥過濾芯后，應泵入幾毫升流動相直到系統(tǒng)穩(wěn)定。自動進樣器針頭、針座、轉子密封墊每年請核對您使用的轉子密封墊的耐用pH值范圍Vespel：pH0~10Tefzel：pH0~14PEEK：pH0~14(不耐濃硝酸/硫酸)計量泵密封墊、分隔密封墊每兩年色譜柱保護柱(根據需要選購)每100~500次進樣臟的樣品每25~50次進樣、非常干凈的樣品每500次進樣后換保護柱色譜柱入口接頭(不銹鋼接頭)(PEEK接頭)每更換5~10根色譜柱PEEK接頭使用更方便；不銹鋼接頭更可靠，可耐受更高壓力檢測器DAD/MWD燈使用1000或2000小時后基線噪聲過大可能的原因之一就是燈的能量不足，應該換燈。VWD燈1000小時流通池每半年檢查潔凈情況流通池臟導致光強度降低日常維護計劃表小練習：熟悉InstrumentUtilities請熟悉InstrumentUtilities軟件，并聯(lián)機嘗試以下練習：熟悉InstrumentUtilities的各個界面,查看儀器狀態(tài)和系統(tǒng)信息掌握DAD或VWD的Intensity

Test（強度測試）、Cell

Test（流通池測試）及Wavelength

Verification

Test（波長確證測試）掌握DAD或VWD的Wavelength（波長校正）查看日志（在LabAdvisor軟件中可查看）熟悉EMF功能，并設置合理的儀器性能警告值生成儀器狀態(tài)報告108第八章化學工作站的初步認識及熟悉本章主要內容：安捷倫化學工作站軟件結構如何啟動化學工作站軟件化學工作站的資源管理器及視圖菜單化學工作首選項如何設置用戶訪問權限如何實用化學工作站日程表如何維護計算機系統(tǒng)109110儀器編號光譜庫報告模板紫外光譜色譜信號運行日志DEFAULT.DACQRES.REGDAD1.UVDAD1A.CHGLPSAVE.REGLCDIAG.REGRUN.LOGSAMPLE.MAC005-0101.DDEMODATAMETHODSSEQUENCETEMPVERIFY1BACKUPCoreREPSTYLESPECLIBSChem32C:SINGLE.B方法文件序列文件………數(shù)據文件化學工作站軟件的目錄及結構ChemStationB.02及更高版本的數(shù)據組織結構當序列執(zhí)行時，會在指定子目錄下以獨有的名字自動創(chuàng)建一個新的文件夾（序列存儲器）。對序列數(shù)據、序列模板(*.S)和所有用到的方法(*.M)都被復制并保存于序列存儲器。副本稱作“序列方法”以區(qū)別于原始的基本方法。所有與序列相關的任務都在這些序列和方法的副本下運行。因此，序列模板和基本方法在未來序列的執(zhí)行中保持不變。每個數(shù)據文件中包含兩個用于創(chuàng)建運行的方法。ACQ.M在方法的采集部分完成后被直接保存，DA.M在數(shù)據處理部分完成后被保存。111112化學工作站的序列數(shù)據結構運行序列時自動生成的序列文件夾格式可以在化學工作站的首選項中更改子目錄序列文件名

日期時間C:\Chem32\1\DATA\03-15-06\CLASSSEQUENCE2006-03-1510-46-09序列文件的備份主方法的備份所采集的數(shù)據批處理文件序列運行日志化學工作站文件命名規(guī)則113禁止在文件名中使用以下字符：./\:<space>[]|+;,?=*<>”@#%適用于B.01版及更高版本化學工作站軟件注意：A.0X版化學工作站中，各個文件名均不得超過8個字符文件類型允許的最大長度自動后綴示例數(shù)據文件38.DDemodad.d數(shù)據文件的前綴15.Dlongname000001.d方法文件40.Mdef_lc.m序列文件40.Sdef_lc.s超級序列文件40.HYPdef_lc.hyp批處理文件40.Bbatch.b譜庫文件40.UVLdemodad.uvl用戶化報告模板文件40.FRPareapct.frp數(shù)據文件子目錄40

demo數(shù)據序列子目錄40

demo序列數(shù)據文件夾40

test_date_time維護計算機系統(tǒng)定期刪除臨時文件，僅使用清潔、無毒的磁盤

使用磁盤檢查的功能進行磁盤檢查和修復

進行硬盤的碎片整理

使用防病毒軟件

創(chuàng)建系統(tǒng)緊急恢復盤114附件右鍵單擊磁盤盤符工作站軟件及文件的維護定期拷貝有用的文件1.數(shù)據文件(xxx.D)2.方法文件(xxx.M)3.序列文件(xxx.S)4.簡單序列設置文件(xxx.EST)5.簡單序列文件(xxx.ES)定期拷貝這些文件后，清除工作站子目錄下的這些文件，以節(jié)省硬盤空間，使運算速度正常。禁止使用盜版軟件運行英文工作站的同時，不要使用中文系統(tǒng)或軟件115選擇儀器類型儀器配置116選擇儀器連接方式配置路徑117可以使用首選項對話框配置其它路徑數(shù)據文件,方法文件和序列文件的默認路徑配置顏色118AgilentHPLCChemStation軟件119可以通過桌面快捷方式或程序列表啟動化學工作站配置-進入ChemStation時120模塊配置121方法和運行控制界面122系統(tǒng)視圖在線色譜信號導航面板化學工作站資源管理器導航按鈕樣品視圖化學工作站資源管理器界面123化學工作站的各個界面124全部菜單和短菜單視圖切換定制導航面板125化學工作站的首選項126儀器設置：序列號127顯示當前連接的所有安捷倫LC1260模塊儀器>版本及序列號(R)察看各個模塊的序列號設置色譜柱128儀器>色譜柱…存儲安裝的色譜柱的信息。信息設定與數(shù)據文件一起存儲色譜柱死體積用于系統(tǒng)適用性計算中色譜柱進樣次數(shù)129化學工作站視圖菜單顯示當前工作日志，察看錯誤信息等內容全部菜單/短菜單切換改變訪問權限130管理者–可以使用所有功能操作者–不可以編輯、保存方法化學工作站日程表的使用131輸入命令后要注意保存選擇在線信號窗口的監(jiān)測信號132從視圖菜單，選擇在線信號，單擊改變，在編輯信號圖譜窗口選擇要監(jiān)控的信號。查看工作日志133從視圖菜單選擇工作日志，單擊當前工作日志即可顯示當前日志的內容。Chemstation上的錯誤信息提示134將鼠標放在Error上獲取信息Chemstation中的日志信息135顯示/隱藏當前日志第九章方法的編輯和保存本章主要內容：方法中所包含的內容如何編輯采集參數(shù)如何填寫樣品信息如何顯示在線信號136方法的組成：方法信息儀器參數(shù)/采集條件數(shù)據分析參數(shù)運行時選項表

方法是一個參數(shù)集，它包括分析一個樣品所需要的所有參數(shù)：數(shù)據采集參數(shù)、數(shù)據分析參數(shù)及命令或宏指令等內容。方法的概念137如果只編輯方法中的儀器參數(shù)138如果編輯一個完整方法1392.選擇方法菜單下的編輯完整方法，即可開始編輯一個完整的方法。1.選擇方法菜單下的新建方法，調用化學工作站的默認方法DEF_LC.M。指定要編輯方法哪一部分內容140方法信息(MethodInformation)141儀器參數(shù)設置——單元泵(G1310B)的參數(shù)設置142儀器參數(shù)設置——四元泵(G1311B/C)的參數(shù)設置143儀器設置允許的數(shù)值144不正確的數(shù)值生成警告按F1得到幫助儀器參數(shù)設置——二元泵(G1312B)的參數(shù)設置145146儀器參數(shù)設置——二元泵(G1312B)的參數(shù)設置二元泵高級參數(shù)147二元泵G1312B的特殊設置

——將溶劑壓縮因子導入到Chemstation中1481234567149儀器參數(shù)設置——標準自動進樣器(G1329B)

參數(shù)設置150Meteringdevice6-portvalveSamplingunitFrompumpTocolumnTowaste準備位置抓取樣品瓶吸取樣品進樣和運行位置標準進樣過程原理示意圖151可以通過交迭進樣來降低進樣間的時間。謹慎設置沖洗時間，設置清洗進樣針減少殘留。BP–旁路模式MP–主流路模式優(yōu)化高通量進樣進樣1(切到主流路)0切到BP或BP>MP>BP重疊進樣：吸取下一樣品且進樣針移到沖洗位開始進樣針外部清洗第一次分析結束進樣針移至進樣部位1.2min72sec樣品從進樣器中沖洗出來的時間t1進樣2(切到主流路)1.3min152儀器參數(shù)設置——高性能自動進樣器(G1367E)

參數(shù)設置153儀器參數(shù)設置——標準自動進樣器的程序進樣154進樣器配置如安裝了擴展進樣升級工具或多次吸取工具，必須更改配置參數(shù)。儀器儀器配置選擇模塊配置參數(shù)標準自動進樣器高性能自動進樣器155儀器參數(shù)設置——柱溫箱(G1316A)參數(shù)設置156儀器參數(shù)設置——柱溫箱參數(shù)(G1316C)157儀器參數(shù)設置——DAD

(G4212B)參數(shù)設置光學單元——DAD(G4212A/B)光路圖

158氘燈卡套式流通池光電二極管陣列光柵反光鏡狹縫折疊鏡159儀器參數(shù)設置——DAD(G1315C/D)參數(shù)設置160鎢燈耦合透鏡氘燈光源透鏡(消色差透鏡)氧化鈥濾光片支撐透鏡流通池光譜透鏡光柵二極管陣列狹縫光學單元——DAD(G1315C/D)光路圖161min0.10.20.30.40.5080HzPW=0.30sec40HzPW=0.33sec20HzPW=0.42sec10HzPW=0.67sec5HzPW=1.24sec樣品:PhenoneTestMix色譜柱:ZorbaxSB-C18，4.6x30，1.8um梯度:50-100%ACNin0.3min柱溫:50°流速:5ml流通池:5ul狹縫:8nm信號:245nm，帶寬:10nm參比:360nm，帶寬:80nm設置峰寬(Peakwidth)162儀器參數(shù)設置——VWD檢測器參數(shù)氘燈光源透鏡濾光片（鈥玻璃/遮光）入射狹縫反射鏡1＃反射鏡2＃光柵分光器參比光電二極管樣品光電二極管流通池光學單元——VWD光路圖163儀器參數(shù)設置——MWD參數(shù)設置164儀器參數(shù)設置——FLD參數(shù)設置165166氙燈激發(fā)光柵發(fā)射光柵透鏡透鏡反射鏡樣品池參比二極管光電倍增管狹縫狹縫狹縫散射器光學單元——FLD光路圖儀器參數(shù)設置——RID參數(shù)設置1671681.流路入口2.加熱器3.熱交換器4.樣品池5.Purge閥6.Recycle閥7.廢液桶8.參比池9.溶劑瓶光學單元——RID光路圖169選擇在方法中要執(zhí)行的項目或輸入需要使用的命令運行時間選項表(RunTimeChecklist)170從方法菜單選擇保存方法或方法另存為，以保存或另存方法。也可以點擊保存方法的快捷圖標直接快速保存方法。保存或另存方法171每次保存或另存方法時，都會彈出左圖窗口，請在其中輸入必要的方法修改歷史的描述信息，以便日后察看該方法的發(fā)展、修改、優(yōu)化的過程。點擊方法菜單下的方法審計跟蹤，即可看到下圖窗口，察看審計跟蹤歷史。保存或另存方法儀器的準備——檢查流動相H2OACN172儀器的準備——設置瓶填充173儀器準備–液相泵的準備沖洗閥確認真空脫氣機打開(如果配有)。打開沖洗閥。分別以5mL/min的流速進行各個通道的初始化，以置換流動相和排出氣泡。將泵的流量及比例調至實驗值，

或調出預先編輯好的方法，使泵按設定值控制流動相。旋緊沖洗閥，使流動相平衡體系。174175儀器準備–UV燈打開點擊此控制按鈕打開紫外燈，在進行第一個分析之前至少預熱十幾分鐘。儀器就緒176177從視圖菜單,選擇在線信號,單擊改變，在編輯信號圖譜窗口選擇要監(jiān)控的信號。選擇OnlineSignal窗口的監(jiān)測信號178OnlineSignal信號顯示如果要采集單個樣品數(shù)據，選擇運行控制菜單中的樣品信息，先輸入樣品信息，然后再運行方法，采集數(shù)據。

樣品信息包括：操作者姓名、數(shù)據文件命名方式、樣品參數(shù)及備注等內容。運行方法、完成進樣分析179開始運行方法180181關閉系統(tǒng)記住將系統(tǒng)內的緩沖液沖洗干凈在沒有色譜柱流動相流動的情況下，不要使柱溫箱長時間保持高溫第十章譜圖處理及優(yōu)化本章主要內容：譜圖調用

譜圖優(yōu)化譜圖加標注183在DataAnalysis界面，F(xiàn)ile菜單下選擇LoadSignal或點擊快捷圖標以調用數(shù)據文件。調用數(shù)據文件184調用數(shù)據文件時使用SignalDetails的規(guī)定185顯示數(shù)據文件雙擊導航表中的某行數(shù)據或直接雙擊單次運行數(shù)據顯示數(shù)據文件。數(shù)據瀏覽表186通過數(shù)據瀏覽表調用信號雙擊數(shù)據文件行，調用信號或點擊右鍵調用菜單。點擊+展開信號細節(jié)187數(shù)據瀏覽表打開/關閉導航表數(shù)據瀏覽工具重疊多個數(shù)據文件要重排欄，拖動欄頭到新的位置右擊欄頭得到這個菜單例子：通過方法分組使用過濾器篩選運行188選擇瀏覽信號方式–信號/預覽選項189信號選項使用信號選項，設定調用信號時信號的顯示方式190譜圖優(yōu)化的快捷工具欄點擊該圖標，彈出右側譜圖優(yōu)化快捷工具欄123456789101112131415191進行文字標注設置：字體和字型字體大小字體顏色、旋轉角度等譜圖優(yōu)化的菜單選項192譜圖處理工具I.切換到譜圖處理界面II.得到譜圖處理圖標1234567891011第十一章積分參數(shù)優(yōu)化本章主要內容：如何進行自動積分

如何進行積分參數(shù)設置如何使用手動積分194檢查色譜峰開始和結束區(qū)域，確定噪音賦予初始“斜率靈敏度”和“峰寬”值對第一次積分賦予一個臨時峰寬值設置“最小峰面積”為0執(zhí)行測試性積分，有可能重復幾次基于較早洗脫出的色譜峰寬計算峰寬值優(yōu)化“斜率靈敏度”和“峰寬”值調整“最小峰面積”值自動積分的過程195當前所選信號的積分事件初始值信號選項框是否自動使用手動積分參數(shù)對所有信號均適用的積分事件初始值進入積分事件表的快捷鍵積分參數(shù)設置——積分事件表196積分事件表添加積分事件刪除積分事件積分工具欄(詳見下頁)197積分工具欄(積分事件表打開的狀態(tài)下)積分自動積分積分事件12345678切換到積分界面198對所有信號均適用的積分事件初始值B版化學工作站使用新型的12Tone積分器增加了對所有信號均適用的積分事件表AgilentB版化學工作站新增的積分參數(shù)199初始積分事件有效值及默認值

參數(shù)說明拖尾峰撇去高度比

(總是和“撇去峰/谷比”配合使用)

≥

0默認值:0.00（默認不撇去）“拖尾峰撇去高度比”和“撇去峰/谷比”共同決定是否對溶劑峰(或其它大峰)之后的小拖尾峰進行切線撇去。前伸峰撇去高度比

(總是和“撇去峰/谷比”配合使用

≥0默認值:0.00（默認不撇去）“前伸峰撇去高度比”和“撇去峰/谷比”共同決定是否對溶劑峰(或其它大峰)之前的小前伸峰進行切線撇去。撇去峰/谷比(總是和“拖尾峰撇去高度比”或“前伸峰撇去高度比”配合使用)≥0默認值:20.00計算所得的“撇去峰/谷比”必須小于規(guī)定值，才可以進行前伸峰或拖尾峰的撇去處理新的初始積分事件表1200拖尾峰撇去高度比(Hp/Hc比值)必須大于用戶的設定值。撇去峰/谷比(Hc/Hv比值)必須小于用戶的設定值。兩個條件同時滿足才會進行拖尾峰撇去處理，否則將使用垂線分離(Drop)的方式對大、小兩個峰進行分離。以上兩個條件必須同時滿足，才會進行撇去計算拖尾峰撇去高度比計算撇去峰/谷比拖尾峰撇去高度比201以上兩個條件必須同時滿足，才會進行撇去前伸峰撇去高度比(Hp/Hc比值)必須大于用戶的設定值。撇去峰/谷比(Hc/Hv比值)必須小于用戶的設定值。兩個條件同時滿足才會進行前伸峰撇去處理，否則將使用垂線分離的方式對大、小兩個峰進行分離。前伸峰撇去高度比202初始積分事件有效值/默認值

參數(shù)說明切線撇去模式直線指數(shù)

新指數(shù)

標準默認值:標準設置切線撇去的模式基線校正

高級

經典

無貫穿

默認值:經典設置基線校正的模式峰谷比（當基線校正選擇“高級”模式時才適用）≥0默認值:500用于決定兩個沒有分離的峰使用垂線分離方式還是使用峰谷積分方式進行積分。新的初始積分事件表2203新指數(shù)模式

直線模式

指數(shù)模式

標準模式

默認模式切線撇去模式204經典：是A版工作站的經典基線跟蹤模式。無貫穿：首先化學工作站自動尋找基線滲透點，然后移動峰的起止點，直到不再有基線滲透為止，最后進行積分。

高級：化學工作站首先去除基線滲透現(xiàn)象，然后優(yōu)化峰的起止點位置，為峰簇重新繪制基線，最后得到積分結果。經典

無貫穿

高級

基線校正205峰谷比計算方法:當H1≥H2時：峰谷比=H2/Hv當H1<H2時：峰谷比=H1/Hv峰谷比低于設定值峰谷比高于設定值峰谷比206積分實例—默認參數(shù)默認的積分參數(shù)不一定總是用戶分析時的最佳參數(shù)可能存在的問題將噪音選擇為峰基線跟蹤困難垂線不合適207實例—初始積分參數(shù)設置初始值，然后重新積分208實例—第一次積分結果有改進，但仍需改進感興趣的峰沒有被積分基線問題209實例—調整初始參數(shù)降低斜率靈敏度以檢測更小更寬的峰在這里，斜率靈敏度從50降到20更小更寬的峰被檢測到210實例—插入時間事件用積分快捷下拉菜單選擇需要的事件在感興趣的時間點點擊色譜圖或者使用插入時間事件工具用刪除時間事件工具刪除一個事件211實例—插入時間事件插入時間事件后積分插入時間事件之前212實例—完成積分使用“最小峰面積”和“最小峰高”去除不感興趣的峰面積2131.將積分事件保存到方法中2.保存方法保存積分參數(shù)214積分工具欄(積分事件表關閉的狀態(tài)下)

——手動積分工具欄12345678保存手動積分–保存到數(shù)據文件215216手動積分在“積分”菜單下同樣可以找到手動積分命令217點擊“積分結果”即可得到當前數(shù)據的積分結果表積分結果和峰類型符號218

BBBBB=基線BVBV=峰谷點B

PBP=基線滲透BHHH=水平基線基線符號第十二章校正及定量基礎

本章主要內容：校正的概念

校正的必要性如何進行校正工作站中各種定量方法的原理校正的概念及校正的必要性校正即是利用某個峰的峰高或峰面積來確定其對應組分的濃度或含量當檢測器靈敏度針對不同的組分而變化時需要進行校正檢測器對同一組分不同含量響應值發(fā)生變化時需要進行校正220校正的過程準備一個混合標樣，其中感興趣組分的濃度須準確知道運行標準樣品建立校正表運行待測樣品并使用校正表分析它需要時進行重新校正221單級校正對每一峰只做一次校正單級校正中做了如下假設：

響應曲線必須是直線

響應曲線必須通過原點222223含量響應值(A或H)單級校正工作曲線多級校正對每一峰需做至少兩次校正可以補償檢測器的非線性響應響應曲線可以不通過原點224多級校正的過程首先準備一個混合標樣，其濃度應高于欲分析物濃度將濃標樣等梯度稀釋，運行每一級稀釋好的標樣在每一級上進行校正繼續(xù)稀釋混合標樣，使其包含感興趣樣品的濃度范圍，并輸入每一級對應的含量值運行待測樣品并使用校正表分析它需要時進行重新校正225226含量響應值(A或H)多級校正工作曲線——分段連接227含量響應值(A或H)多級校正工作曲線——線性擬合228含量響應值(A或H)含量響應值(A或H)多級校正工作曲線——非線性擬合229化學工作站的六種定量方法百分比法(Percent)歸一化法(Norm%)

外標法(ESTD)內標法(ISTD)外標百分比法(ESTD%)內標百分比法(ISTD%)面積百分比法假定

檢測器響應都相同

所有組分都流出

所有組分都被檢測到優(yōu)點

無需做校正

簡單、快速的定量過程

進樣量不要求嚴格缺點

以上所有的假定需

測量所有的組分230231響應因子與組分的含量及其它組分的存在無關在分析條件一定的條件下，響應因子為物質的特性響應因子可以校正檢測器響應含量 100 100200面積 3000 2500 4000響應因子歸一化法假定

所有組分都流出

所有組分都被檢測到優(yōu)點

進樣量不要求嚴格 缺點

所有組分峰都要流出

需測量所有的組分

必須校正所有的峰232外標法假定

待測組分在標樣中和未知樣中的響應因子相同優(yōu)點

可以校正檢測器的響應

只對欲分析的組分峰做校正

無需所有峰都能被檢測到缺點

進樣量必須準確

儀器必須有良好的穩(wěn)定性

需定期做重新校正233內標法假定

響應因子的比值(相對響應因子)恒定優(yōu)點

進樣量不嚴格要求

只對欲分析的組分峰做校正

校正檢測器的響應缺點

必須加一個組分進到樣品234選擇內標物的標準樣品中不存在可迅速容易得到化學性質與樣品相似與樣品有相似的響應值(濃度范圍)不會與樣品發(fā)生反應在感興趣組分附近流出可得到分離良好的、干凈利落的峰色譜性質穩(wěn)定235236 百分比法

歸一化法

外標法內標法 A組分26.2%31.8%28.0ng30.8ng B組分23.4%24.4%21.5ng23.7ng C組分20.6%19.0%16.7ng18.4ng D組分29.9%24.8%21.8ng24.0ng使用不同的定量方法，同一個未知樣品的定量結果也有所不同。各種定量方法比較237各種定量方法總結優(yōu)點缺點百分比法無需校正進樣量不嚴格要求檢測器的響應必須一致所有組分峰都需流出所有組分峰都需被檢測到所有面積都需準確歸一化法進樣量不嚴格要求所有組分峰都需流出所有組分峰都需測定必須校正所有的峰外標法校正檢測器的響應只對感興趣峰做校正無需所有峰都流出無需所有峰都被檢測到報告可選擇各種含量單位進樣量必須準確儀器需要有很好穩(wěn)定性內標法進樣量不嚴格要求只對感興趣峰做校正校正檢測器的響應報告可選擇各種含量單位必須在所有樣品中加入一個組分樣品和標樣的準備工作復雜繁瑣238請注意：如果使用外標百分比法或內標百分比法算，采樣前需輸入“樣品量”的信息，并在報告設定時選擇“外標百分比法”或“內標百分比法”計算外標百分比法、內標百分比法化學工作站定量過程概述1.調用標樣數(shù)據文件2.進行譜圖顯示優(yōu)化3.進行積分優(yōu)化（自動積分、積分事件表、手動積分）4.建立校正表（在表中輸入化合物名稱、濃度、指定內標物等。如果是多級校正則重復1、2、3步驟）5.檢查校正設置（規(guī)定保留時間窗口、曲線類型及濃度單位等）6.設定報告并保存方法（規(guī)定定量方法、報告類型等）7.打印報告239第十三章建立校正表本章主要內容：如何建立外標法、內標法校正曲線如何進行校正設置如何進行重新校正241指定用于定量的色譜信號如果每個數(shù)據中只存儲了一張色譜圖，則不需進行此項設置！242進行校正設置243調用標樣數(shù)據進行積分參數(shù)優(yōu)化244建立一級校正曲線245校正表的建立填入:化合物名稱化合物含量選擇:參比峰內標峰內標峰號246在校正表中添加第二級標樣數(shù)據2.選擇“校正”>>“添加級別”3.依次輸入二級標樣含量1.調用二級標樣數(shù)據添加級別快捷鍵247在校正表中添加更多濃度級別標樣數(shù)據線性相關系數(shù)調用三級標樣數(shù)據，輸入相應濃度按上述方式，在校正表中逐級添加各個濃度的標樣數(shù)據。從窗口右下角的小圖中看到所得工作曲線及其線性相關系數(shù)。248當控制樣品的濃度超出允許的誤差范圍時，就需要進行重新校正。重新校正方法如下：采集所需濃度的標樣數(shù)據在數(shù)據分析界面調出此數(shù)據文件在“校正”菜單下，選擇“重新校正”在彈出的窗口中選擇該數(shù)據對應的濃度級別，并規(guī)定重新校正的方式（“平均”或“替換”），單擊“確定”即可?；瘜W工作站會自動進行再校正。進行定期重新校正第十四章設定報告格式本章主要內容：如何指定報告的定量模式

如何指定報告的輸出方式如何選擇各種報告類型250報告參數(shù)的設定設定報告快捷鍵251報告輸出目的地的選擇定量報告可以直接在打印機上打印輸出、也可以顯示在計算機屏幕上或者以文件的形式輸出。報告可以輸出成下列格式的文件：.PDF—輸出可以移植文件格式.TXT—只輸出報告的文本內容，以純文本形式輸出。.CSV—將報告以逗點分隔數(shù)據庫文件(CSV)形式輸出，可以用Excel等程序打開該文件。(CommaSeparatedValues)EMF—將報告以EMF圖形文件形式輸出。.DIF—將報告以數(shù)據交換文件(DIF)形式輸出，可以用Excel等程序打開該文件。(DataInterchangeFormat).HTM—將報告以超文本文件形式輸出，可以使用IE瀏覽器打開該文件。.XLS—將報告以EXCEL文件形式輸出252定量方法及報告類型的選擇六種定量方法的選擇報告類型的選擇百分比外標法和外標百分比法歸一化法內標法和內標百分比法253定量方法及報告類型的選擇（續(xù)）254儀器參數(shù)曲線編輯儀器曲線顯示選擇噪音范圍編輯255報告參數(shù)的保存256打印報告直接在打印機上輸出報告按照指定方式輸出報告預覽報告第十五章日常維護與常見色譜故障本章主要內容：日常維護保養(yǎng)高效液相色譜儀的注意事項溶劑及樣品的準備色譜柱的保護方法系統(tǒng)初始化及平衡方法常見色譜故障的原因及解決方案溶劑準備——溶劑的過濾過濾溶劑的目的：

防止固體顆粒損傷儀器或柱頭過濾溶劑的裝置： 可以使用抽濾裝置，用孔徑<0.5μm的濾膜溶劑的基本要求： 請使用色譜純的溶劑258溶劑準備——定期更換溶劑

不干凈的溶劑或在溶劑瓶中長菌的溶劑會阻塞溶劑過濾器，降低泵的操作性能。遵從下列建議可以提高性能，延長溶劑過濾器的壽命：避免溶劑瓶直接日照。每兩天更換或過濾溶劑。用濾膜過濾溶劑去除微生物。259

260目的排除溶解在流動相中的氧氣和氮氣脫氣方法氦氣脫氣真空脫氣回流加熱脫氣超聲脫氣(最為常用)溶劑準備——溶劑脫氣溶劑準備——避免的溶劑避免使用下列對不銹鋼有腐蝕性的溶劑：鹵化物堿金屬溶液和相應的酸溶液。高濃度的無機酸例如：硝酸和硫酸。能夠形成鹵素自由基或酸的氯化試劑及其混合物。含有過氧化物的色譜級醚必須用氧化鋁干燥劑。在有機溶劑中的有機酸溶液。含有強絡合劑的溶液。四氯化碳和異丙醇或四氫呋喃混合液。261262可以相互混溶不可相互混溶溶劑準備——溶劑混溶性263溶劑的截止波長是指以空氣為參考，樣品池光程長度為1cm，溶劑的吸光度為1AU時對應的波長值。溶劑截止波長(nm)Acetonitrile乙腈190Water水Cyclohexane環(huán)己烷210Hexane正己烷200Methanol甲醇210Ethanol乙醇210DiethylEther二乙醚260Dichloromethane二氯甲烷230Chloroform氯仿190245CarbonTetrachloride四氯化碳265Tetrahydrofuran四氫呋喃220Toluene甲苯285溶劑準備——溶劑的截止波長264泵的初始化： 移走溶劑與系統(tǒng)中的氣泡 使溶劑組成變化更容易色譜柱平衡： 確保分析結果再現(xiàn)性 對于反相柱使用5~10倍柱體 積流動相平衡色譜柱系統(tǒng)的初始化和平衡265保護柱的作用是保護分析柱不受樣品污染從泵來的流動相進樣口保護柱分析柱至檢測器保護色譜柱——使用保護柱保護色譜柱過濾所有的溶劑和樣品使用保護柱儀器在使用完畢，要沖洗整個系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中緩沖液在適當?shù)娜軇┲斜４嬷又釉诓皇褂脮r，兩端密封保存注意色譜柱的pH值使用范圍不要高壓沖洗柱子不要高溫下過長時間使用硅膠鍵合相266色譜柱測試使用一根新色譜柱之前，應在流動相組成不變的情況下進行性能測試實驗，打印性能報告：記錄理論塔板數(shù)、色譜柱長度及內徑記錄測試樣品的名稱及K值記錄所用固定相和流動相記錄流動相的流速記錄測試樣品的進樣量記錄實驗的溫度條件記錄