天然藥物提取方法演示

（優(yōu)選）天然藥物提取方法當(dāng)前第1頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)基本操作技術(shù)與應(yīng)用天然藥物活性成分的研究（了解內(nèi)容）天然產(chǎn)物的提取方法（掌握內(nèi)容）天然產(chǎn)物的分離方法（掌握內(nèi)容）色譜分離法（掌握內(nèi)容）天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)測(cè)定（熟悉內(nèi)容）當(dāng)前第2頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)研究途徑臨床調(diào)查收集原料成分提取分離成分預(yù)試驗(yàn)活性篩選文獻(xiàn)資料調(diào)研結(jié)構(gòu)確定動(dòng)物試驗(yàn)臨床試驗(yàn)當(dāng)前第3頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)提取的基本知識(shí)什么是提??？提取的思路（已知成分、未知成分）提取前預(yù)處理（一般過2號(hào)篩為宜，同時(shí)注意酶的影響）基本原理—相似相溶影響因素（溶劑的選擇、方法選擇、時(shí)間、溫度、粉碎度等）極性當(dāng)前第4頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)極性常用溶劑極性排列順序：石油醚<苯<無水乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水官能團(tuán)的極性排列順序：烷烴<鹵代烴<醚<酯<酮<醛<酰胺<胺<醇<水<酚<羧酸當(dāng)前第5頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)溶劑分類與特點(diǎn)（一）水：價(jià)廉，安全，對(duì)細(xì)胞的穿透能力強(qiáng)。適用于無機(jī)鹽、糖類、鞣質(zhì)、氨基酸與蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽、苷類化合物的提取。親水性有機(jī)溶劑：甲醇、乙醇、丙酮等。特點(diǎn)：可與水任意比混溶，毒性低、價(jià)廉、回收方便，對(duì)細(xì)胞的穿透能力強(qiáng)。適用于多種成分的提取，其中，乙醇又稱為“萬能溶劑”。當(dāng)前第6頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)溶劑分類與特點(diǎn)（二）親脂性有機(jī)溶劑：石油醚、乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯等。特點(diǎn)：選擇性強(qiáng)、回收方便、但易燃、有毒、價(jià)貴。適用于揮發(fā)油、油脂、葉綠素、樹脂、游離生物堿、苷元等成分的提取。當(dāng)前第7頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)提取技術(shù)與方法（一）溶劑法：僅限于低分子量、含量高的成分的提取。根據(jù)“相似相溶”的原則進(jìn)行提取。（二）其他方法根據(jù)化合物的特殊性質(zhì)選擇特殊的提取方法。水蒸氣蒸餾法升華法共9種方法當(dāng)前第8頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)溶劑提取法浸漬法滲漉法煎煮法回流法連續(xù)回流法超聲提取法超臨界流體萃取法當(dāng)前第9頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)浸漬法分為冷浸法（室溫）和溫浸法（40~60℃）。常用溶劑：水、酸水、堿水、稀醇等。適用于遇熱易被破壞的成分或含大量淀粉、粘液質(zhì)、果膠、樹膠等多糖類成分的提取。缺點(diǎn)：提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑用量大、提取效率低、用水作溶劑時(shí)易發(fā)霉。當(dāng)前第10頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)滲漉法適用范圍與提取溶劑同浸漬法。步驟：浸潤(rùn)、裝筒、排氣、浸漬、滲漉。優(yōu)點(diǎn)：提取效率較高。缺點(diǎn)：提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑用量大。當(dāng)前第11頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)煎煮法藥房及家庭中最為常用的中藥提取方法。常用溶劑：水適用于對(duì)熱穩(wěn)定的成分的提取。含多糖類成分量大的藥材因煎煮后呈糊狀，不宜用本法。當(dāng)前第12頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)回流法最常用的提取方法。對(duì)熱不穩(wěn)定的成分不適用。提取效率較高。選擇什么試劑？適用于什么成分？當(dāng)前第13頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)連續(xù)回流法浸漬法和回流法的特點(diǎn)兼有。對(duì)熱不穩(wěn)定的成分慎用。提取時(shí)間長(zhǎng)。當(dāng)前第14頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)超聲提取法利用超聲波振動(dòng)產(chǎn)生的能量在提取液中產(chǎn)生“空化現(xiàn)象”提取有效成分。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，幾乎適用于各種溶劑的提取，提取時(shí)間短，效率高。當(dāng)前第15頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)超臨界流體萃取法超臨界流體（supercriticalfluid，SF）：當(dāng)某物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力以上時(shí)可形成一種既非液體又非氣體的單一相態(tài)，將這一狀態(tài)的物質(zhì)稱為超臨界流體。目前最常用的是CO2-SFE技術(shù)。當(dāng)前第16頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)水蒸氣蒸餾法適用于具有揮發(fā)性，可與水蒸氣一起蒸餾出來，與水不反應(yīng)，又難溶于水的化合物的提取。當(dāng)前第17頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)升華法適用于有升華性，升華溫度適當(dāng)，遇熱較穩(wěn)定的化合物的提取。可分為常壓升華和減壓升華兩種。當(dāng)前第18頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)關(guān)于提取問題小結(jié)極性（溶劑的極性、化合物的極性）提取溶劑的分類與特點(diǎn)提取的原理提取的方法與適用范圍當(dāng)前第19頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)分離方法（一）分離前處理（二）結(jié)晶與重結(jié)晶（三）分離方法系統(tǒng)溶劑分離法兩相溶劑萃取法沉淀法

6.透析法

9.色譜法吸附法（補(bǔ)充）7.分餾法鹽析法（補(bǔ)充）8.升華法當(dāng)前第20頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)分離前處理提取液一般體積較大，目標(biāo)成份濃度低，需要先濃縮提高濃度，然后再進(jìn)行分離工作。濃縮的方法常壓蒸餾減壓蒸餾薄膜蒸發(fā)當(dāng)前第21頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)常壓蒸餾適用于有效成分受熱不易分解，低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑（氯仿、乙醚、石油醚等）的提取液的濃縮。當(dāng)前第22頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)減壓蒸餾適用于溶劑沸點(diǎn)高，有效成分受熱易分解的提取液的濃縮。當(dāng)前第23頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)薄膜蒸發(fā)濃縮效率高，受熱時(shí)間短，特別適用于濃縮水或稀醇為溶劑的提取液。當(dāng)前第24頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)結(jié)晶與重結(jié)晶（一）結(jié)晶的條件（掌握)（二）結(jié)晶溶劑的選擇

(熟悉）（三）制備結(jié)晶的方法

1.晶核的形成

2.晶鏈的延長(zhǎng)（四）結(jié)晶純度的判斷(重點(diǎn)掌握）當(dāng)前第25頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)結(jié)晶的條件被分離化合物純度高；呈過飽和狀態(tài)；最適結(jié)晶溫度：5~10℃；充分放置。當(dāng)前第26頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)結(jié)晶溶劑的選擇（理想溶劑）一不與結(jié)晶物質(zhì)起化學(xué)反應(yīng)；雜質(zhì)與結(jié)晶物質(zhì)在溶劑中的溶解度相差大；目的物在溶劑中的溶解度隨溫度不同有顯著差別；溶劑沸點(diǎn)不宜太高或太低（可在60℃

）；溶劑沸點(diǎn)低于化合物的熔點(diǎn)；溶劑沸點(diǎn)低于結(jié)晶溫度；能給出較好的晶形，無劇毒。當(dāng)前第27頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)結(jié)晶溶劑的選擇二常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯等。其他不常用溶劑：二甲基亞砜、乙腈、甲酰胺、二甲基甲酰胺、冰醋酸等?；旌先軇咳绾芜x擇與使用水--乙醇；乙醇—乙醚；石油醚—苯；水—丙酮；乙醚—乙酸乙酯—乙醇等。當(dāng)前第28頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)結(jié)晶純度的判斷一定的晶形、均勻的色澤；有固定的熔點(diǎn)，熔距較??；TLC：經(jīng)過三種以上展開劑展開得均一圓形的斑點(diǎn)。當(dāng)前第29頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)系統(tǒng)溶劑分離法目前是研究成分不明的天然產(chǎn)物的最常用方法。選擇3~4種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步對(duì)粗提物進(jìn)行分離。手續(xù)復(fù)雜、對(duì)化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，容易引起分解、異構(gòu)化的產(chǎn)物應(yīng)特別注意。當(dāng)前第30頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)兩相溶劑萃取法（一）基礎(chǔ)知識(shí)原理分配系數(shù)與分離因子（二）萃取方法當(dāng)前第31頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)基礎(chǔ)知識(shí)一、原理利用混合物中各成分在兩種互不混溶的溶劑中分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的目的。二、分配系數(shù)與分離因子分配系數(shù)（K）K=C有機(jī)相/C水相分離因子（β）β=KA/KB當(dāng)前第32頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)假設(shè)KA=10，KB=0.1，則β=100當(dāng)β≥100時(shí)，一次簡(jiǎn)單的萃取就可以完成分離；當(dāng)10<β≤100，需萃取10~12次；當(dāng)β≤2時(shí)，需要完成100次以上的萃??；當(dāng)β≈1時(shí)，理論上無法完成萃取分離的目的。當(dāng)前第33頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)萃取方法簡(jiǎn)單萃取法（掌握）pH梯度萃取法（重點(diǎn)掌握）（補(bǔ)充）逆流連續(xù)萃取法（了解）逆流分溶法（countercurrentdistributionCCD)（了解）液滴逆流分配法（dropletcountercurrentchromatogrophyDCCC）（了解）當(dāng)前第34頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)簡(jiǎn)單萃取法適用于分離因子較大的情況的分離。提取液的密度最好在1.1~1.2?！暗攘慷啻巍痹瓌t（掌握）乳化現(xiàn)象（熟悉）當(dāng)前第35頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)等量多次原則證明設(shè)Vml水中含有Wg溶質(zhì)，用Sml有機(jī)溶劑萃取后，在水中尚有W1g溶質(zhì)沒有被萃取出來，則分配系數(shù)KD為：整理得當(dāng)前第36頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)第2次再用Sml有機(jī)溶劑萃取水中的溶質(zhì)后仍有W2g沒有被萃取出來，則因此，若每次用Sml有機(jī)溶劑萃取，最后剩在Vml水中的溶質(zhì)Wn為若一次用nSml有機(jī)溶劑萃取，剩余在水中的溶質(zhì)當(dāng)前第37頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)結(jié)論用總量相同的溶劑，分多次萃取的效率要比1次萃取的效率高。當(dāng)前第38頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)乳化現(xiàn)象產(chǎn)生原因天然產(chǎn)物中含有皂苷、蛋白質(zhì)、植物膠質(zhì)、鞣質(zhì)等表面活性物質(zhì)；兩相互不相溶的溶劑；振搖；少量輕質(zhì)的沉淀等。當(dāng)前第39頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)解決方案較長(zhǎng)時(shí)間靜置；2.將乳狀液分出，再換新溶劑萃取；3.將乳狀液加溫或冷凍；4.將乳狀液抽濾；5.加入少量電解質(zhì)（如NaCl等）；6.加入少量低級(jí)醇（如乙醇、戊醇等）。當(dāng)前第40頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)pH梯度萃取法是分離酸性、堿性、兩性有機(jī)化合物常用的手段。原理：由于溶劑系統(tǒng)PH的改變，改變了化合物的存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變了化合物在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)。酸性化合物：pH=pka-2游離；

pH=pka+2

解離。堿性化合物相反。當(dāng)前第41頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)以酸性化合物HA為例酸性化合物在水中電離：電離常數(shù)取負(fù)對(duì)數(shù)當(dāng)前第42頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)逆流連續(xù)萃取法操作簡(jiǎn)便；萃取完全，不易乳化；適合于兩相互不混溶的溶劑的密度相差較大的系統(tǒng)的分離。當(dāng)前第43頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)逆流分溶法（CCD)適用于性質(zhì)相似的異構(gòu)體或同系物的分離。特點(diǎn)：條件溫和，樣品易于回收。注意：溶質(zhì)濃度越低分離效果越好。當(dāng)前第44頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)液滴逆流分配法（DCCC）CCD的改進(jìn)方法，不易乳化。特別適用于皂苷類化合物的分離。需要?jiǎng)恿Ρ?。?dāng)前第45頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)沉淀法可以分為酸堿沉淀、試劑沉淀、鉛鹽沉淀。酸堿沉淀：適用于酸性、堿性物質(zhì)的分離。試劑沉淀沉淀試劑沉淀有機(jī)溶劑沉淀3.鉛鹽沉淀中性醋酸鉛堿性醋酸鉛當(dāng)前第46頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)吸附法（補(bǔ)充）選擇適宜吸附劑（如硅膠、Al2O3、活性炭）去除雜質(zhì)或選擇性篩選目標(biāo)成分。如用活性炭去除在提取液中的葉綠素等脂溶性成分。當(dāng)前第47頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)鹽析法（補(bǔ)充）在水提液中加入NaCl、MgCl2等無機(jī)鹽促進(jìn)極性稍大組分析出的方法。如鹽酸小檗堿易溶于熱水，在冷水中溶解度小，但在結(jié)晶冷卻過程中不易析出結(jié)晶，可通過加入NaCl固體的方法促進(jìn)析晶。當(dāng)前第48頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)透析法當(dāng)前第49頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)色譜法吸附色譜(adsorptionchromatography)分配色譜/液相色譜(patitionchr.)離子交換色譜(ionexchangechr.)大孔吸附樹脂法(macro-reticularresinemethod)凝膠色譜法(gelfiltrationchr.)氣相色譜法(gaschromatography)高效液相色譜（highperformanceliquidchromatography)當(dāng)前第50頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)吸附色譜基本原理：利用混合物中不同組分分子、溶劑分子與吸附劑表面分子間的作用力不同，引起不同的吸附性能而進(jìn)行分離。吸附劑色譜結(jié)果操作方式當(dāng)前第51頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)

極性吸附劑：硅膠、氧化鋁吸附劑非極性吸附劑：活性炭聚酰胺硅膠：微酸性，不宜直接用于堿性物質(zhì)的分離。顆粒表面的硅醇基起吸附作用，需在105~110℃活化。氧化鋁：微堿性，不宜直接用于含醛基、羰基、酯基化合物的分離?；钚蕴浚憾嘤糜谒嵋褐兄苄噪s質(zhì)的分離。當(dāng)前第52頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)4、聚酰胺：酰胺基可以與羥基、羧基、硝基等形成氫鍵。分離規(guī)律（P67）

：氫鍵越多，吸附越牢，Rf越小。如易形成分子內(nèi)氫鍵，Rf增大。芳香化程度越高，吸附越牢。各種溶劑的洗脫能力：水<甲醇<丙酮<NaOH水溶液<甲酰胺<二甲基甲酰胺<尿素水溶液當(dāng)前第53頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)操作方式薄層色譜（thinlayerchromatography,TLC)

操作步驟：制板點(diǎn)樣展開定位柱色譜操作步驟：吸附劑與洗脫劑選擇裝柱上樣洗脫分離注意活化當(dāng)前第54頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)分配色譜（一）基本原理：根據(jù)被分離物質(zhì)在兩相中的溶解性不同而進(jìn)行分離（CCD）。（二）正相色譜與反相色譜（掌握）（三）支持劑：硅藻土、纖維素粉、濾紙、含水17%的硅膠等。（四）操作方式

1.紙層析(PC)2.TLC3.柱層析當(dāng)前第55頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)正相色譜：固定相的極性大于流動(dòng)相的極性。固定相多為強(qiáng)極性溶劑，如水、緩沖液等。反相色譜：固定相的極性小于流動(dòng)相的極性。固定相多為親脂性溶劑。當(dāng)前第56頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)支持劑的要求無吸附作用；不溶于兩相溶劑中；不與被分離物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；并能吸著一定的固定相；可以使流動(dòng)相自由通過而不改變其組成。當(dāng)前第57頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)離子交換色譜（IEC）（一）分離原理：利用離子交換樹脂在水溶液中可以解離，并與溶液中其它離子產(chǎn)生可逆性的交換，達(dá)到分離離子型化合物的目的。（二）離子交換樹脂（熟悉）（三）分離結(jié)果（重點(diǎn)掌握）（四）離子交換樹脂的選擇（了解）（五）操作（了解）當(dāng)前第58頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)離子交換樹脂陽離子交換樹脂：能與溶液中陽離子進(jìn)行交換，按交換活性分為強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂和弱酸型陽離子交換樹脂兩類。如：RSO3H+NaClRSO3Na+HCl陰離子交換樹脂：能與溶液中陰離子進(jìn)行交換，按交換活性分為強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂和弱堿型陰離子交換樹脂兩類。如：RNOH+NaClRNCl+NaOH當(dāng)前第59頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)樣品強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂酸性及中性物質(zhì)強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂稀NH4OH洗脫洗脫液（堿性及兩性）

中性物質(zhì)稀堿洗脫洗脫液（酸性物質(zhì)）強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂堿性物質(zhì)稀酸洗脫洗脫液（兩性物質(zhì)）流出液流出液流出液當(dāng)前第60頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)離子交換樹脂的選擇根據(jù)被分離物質(zhì)選擇樹脂，如分離生物堿選擇陽離子交換樹脂。根據(jù)被分離物質(zhì)的解離常數(shù)選擇，如堿性強(qiáng)選擇弱酸型陽離子交換樹脂。根據(jù)化合物大小選擇，如分離大分子化合物可選擇交聯(lián)度3~6%的樹脂。當(dāng)前第61頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)操作預(yù)處理：水浸泡（溶脹）酸堿處理（洗去雜質(zhì)）水洗至中性裝柱上樣與洗脫再生當(dāng)前第62頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)大孔吸附樹脂法

主要用于水溶性化合物的提取分離。大孔吸附樹脂（吸附性與范德華力、氫鍵有關(guān)）大孔吸附樹脂類型影響因素：1.分子極性大??；2.分子體積大小；3.pH值的影響。預(yù)處理與再生當(dāng)前第63頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)大孔吸附樹脂的特點(diǎn)吸附性和篩選性相結(jié)合的分離材料選擇性好吸附容量大機(jī)械強(qiáng)度高再生處理方便吸附速度快解吸容易不易受到無機(jī)鹽等離子或小分子化合物的影響當(dāng)前第64頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)大孔吸附樹脂類型非極性吸附樹脂（芳香族吸附劑）：以苯乙烯為單體，二乙基苯為交聯(lián)劑。中極性吸附樹脂（脂肪族吸附劑）：以甲基丙烯酸酯作為單體和交聯(lián)劑。極性吸附樹脂：結(jié)構(gòu)中含有硫氧、酰胺、氮氧等極性基團(tuán)。當(dāng)前第65頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)預(yù)處理與再生預(yù)處理：水洗、溶脹后用甲醇或95%的乙醇浸泡24小時(shí)，至洗滌液加水后不呈白色渾濁，最后用蒸餾水洗掉有機(jī)溶劑。再生：蒸餾水、甲醇、乙醇反復(fù)洗滌，必要時(shí)可用3%的鹽酸水溶液或3%的氫氧化鈉溶液再生。當(dāng)前第66頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)凝膠色譜法（GFC）原理：“分子篩”凝膠的種類1.葡聚糖凝膠（SephadexG）2.羥丙基葡聚糖凝膠（LH-20）當(dāng)前第67頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)氣相色譜法：適用于沸點(diǎn)低，易揮發(fā)，對(duì)熱穩(wěn)定的化合物的分離。HPLC電泳技術(shù)當(dāng)前第68頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)結(jié)構(gòu)測(cè)定(一)鑒定天然產(chǎn)物化學(xué)成分的一般步驟1.化合物純度測(cè)定2.初步推測(cè)化合物類型3.測(cè)定分子式、計(jì)算不飽和度4.確定官能團(tuán)或結(jié)構(gòu)片斷5.確定分子的平面結(jié)構(gòu)6.確定分子的立體結(jié)構(gòu)(二)結(jié)構(gòu)測(cè)定中波譜知識(shí)回顧當(dāng)前第69頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)純度測(cè)定方法1.結(jié)晶的性質(zhì)2.層析行為（PC、TLC）3.GC4.HPLC5.電泳……當(dāng)前第70頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)分子式測(cè)定方法、不飽和度的計(jì)算分子式測(cè)定方法（MS）：1.元素定性分析2.高分辨質(zhì)譜法（HR-MS)不飽和度的計(jì)算

U=(2+2n4+n3-n1)/2當(dāng)前第71頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)例1：元素定性分析定量分析結(jié)果：C：79.35%，H：10.21%所以，O=100-79.35-10.21=10.44%三元素在結(jié)構(gòu)中所占比例為：C=79.35/12.01=6.6110.16H=10.21/1.008=10.1315.58O=10.44/16.00=0.651分子式為（C10H16O1）n如MS的分子離子峰為456，則n=3當(dāng)前第72頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)例2：高分辨質(zhì)譜法以12C=12.000000為基準(zhǔn)，1H=1.00782514N=14.00307，16O=15.99491故：C8H12N4164.1063C9H12N2O164.0950C10H12O2164.0837C10H16N2164.1315分子量均為164，但精確質(zhì)量不一樣，可用于區(qū)別化合物。當(dāng)前第73頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)常用波譜知識(shí)回顧紫外光譜(UV)紅外光譜(IR)核磁共振(NMR)質(zhì)譜(MS)練習(xí)當(dāng)前第74頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)紫外光譜用不同波長(zhǎng)的紫外光為光源（200~400nm），依次照射一定濃度的樣品溶液，分別測(cè)定其吸光度（A），并用波長(zhǎng)對(duì)吸光度（或摩爾吸光系數(shù)）作圖，得紫外吸收光譜圖。應(yīng)用：定性鑒別、純度檢查、單組分的定量分析以及結(jié)構(gòu)解析（輔助手段）。只能顯示分子中部分結(jié)構(gòu)的特征。當(dāng)前第75頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)可鑒定的結(jié)構(gòu)片斷某種發(fā)色團(tuán)的存在；順反異構(gòu)體的鑒定；吸收帶R帶：雜原子的不飽和基團(tuán)，波長(zhǎng)>270nm,弱吸收；可隨溶劑極性的不同而移動(dòng)。K帶：共軛結(jié)構(gòu)，強(qiáng)吸收。B帶：芳香化合物，似掌狀，256nm左右，弱吸收。E帶：芳香化合物，強(qiáng)吸收，可分為E1（180nm)和E2(200nm)兩個(gè)峰。當(dāng)前第76頁(yè)\共有85頁(yè)\編于星期六\23點(diǎn)紅外光譜廣泛用來鑒定化合物的結(jié)構(gòu)，簡(jiǎn)單迅速，可靠。用波長(zhǎng)2.5-15um（4000-667cm-1）的光波為光源依次照射樣品，以波數(shù)（或波長(zhǎng)）為橫坐標(biāo)，百分透光度為縱坐標(biāo)