酶工程學第九周分子修飾

第六章酶分子修飾——通過各種方法使酶分子的結構發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的技術過程稱為酶分子修飾。當前第1頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第2頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第3頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第4頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第5頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第6頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第7頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第8頁\共有47頁\編于星期一\15點酶分子側鏈基團的化學修飾：使酶分子的側鏈基團發(fā)生改變，從而改變酶分子的特性和功能的修飾方法。定義：當前第9頁\共有47頁\編于星期一\15點?；噭┛杀恍揎椀陌被釟埢鶄孺湲斍暗?0頁\共有47頁\編于星期一\15點例如：丹磺酰氯，二甲氨基萘磺酰氯，DNS當前第11頁\共有47頁\編于星期一\15點烷基化試劑可被修飾的氨基酸殘基側鏈當前第12頁\共有47頁\編于星期一\15點R——X：2，4——二硝基氟苯，DNFB當前第13頁\共有47頁\編于星期一\15點多肽序列分析法：SangerN-端序列分析法，1945年當前第14頁\共有47頁\編于星期一\15點Na2S4O6：連四硫酸鈉當前第15頁\共有47頁\編于星期一\15點四硝基甲烷當前第16頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第17頁\共有47頁\編于星期一\15點二硫二硝基苯甲酸4，4’－二硫二吡啶對氯汞苯甲酸2－氯汞－4－硝基苯酚N-乙基馬來酰亞胺過氧化氫氧化當前第18頁\共有47頁\編于星期一\15點氨基的化學修飾乙酸酐2’4’6－三硝基苯酚2’4－二硝基氟苯碘代乙酸還原烷基化丹磺酰氯當前第19頁\共有47頁\編于星期一\15點碳二亞胺硼氟化三甲鋅鹽酯化當前第20頁\共有47頁\編于星期一\15點焦炭酸二乙酯碘乙酸碘化反應當前第21頁\共有47頁\編于星期一\15點胍基的化學修飾丁二酮1’2－環(huán)己二酮苯乙二醛當前第22頁\共有47頁\編于星期一\15點RNADNA2’－OH脫氧當前第23頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第24頁\共有47頁\編于星期一\15點腺苷酸脫氧腺苷酸當前第25頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第26頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第27頁\共有47頁\編于星期一\15點二、常用的修飾劑右旋糖酐、聚乙二醇、肝素、蔗糖聚合物、聚氨基酸等當前第28頁\共有47頁\編于星期一\15點三、修飾方法修飾酶當前第29頁\共有47頁\編于星期一\15點四、大分子化學修飾的優(yōu)點1.通過修飾提高酶的活性核糖核酸酶Vs右旋糖酐修飾核糖核酸酶1：2.25胰凝乳蛋白酶Vs右旋糖酐修飾胰凝乳蛋白酶1：5.1當前第30頁\共有47頁\編于星期一\15點2.通過修飾增強酶的穩(wěn)定性酶的半衰期t1/2：酶的活力降低到原來活力一半時所經過的時間。很多修飾劑分子具有多個活性基團，常與酶形成多點交聯，使酶的空間結構穩(wěn)定，特別是使酶活性中心的構象得到保護。當前第31頁\共有47頁\編于星期一\15點舉例：超氧化物岐化酶（SOD）O2-+O2-+2H+=H2O2+O2SOD作用：保護DNA，蛋白質和細胞膜SOD藥用：類風濕性關節(jié)炎，白內障，膀胱炎，皮膚炎，紅斑狼瘡等。SOD靜脈注射：t1/2=6~30min右旋糖酐-SOD：t1/2=7h聚乙二醇-SOD：t1/2=35h當前第32頁\共有47頁\編于星期一\15點3.通過修飾降低或消除酶的抗原性當外源蛋白非經口進入人或動物體內后，體內血清中就可能出現與此外源蛋白特異性結合的物質，這些物質稱為抗體，能引起體內產生抗體的物質稱為抗原。大分子化學修飾是降低甚至消除酶抗原性的有效方法之一當前第33頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第34頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第35頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第36頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第37頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第38頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第39頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第40頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第41頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第42頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第43頁\共有47頁\編于星期一\15點當前第44頁\共有47頁\編于星期一\15點豬肝尿酸酶用白