血脂測(cè)定及方法學(xué)評(píng)價(jià)課件

血脂測(cè)定及方法學(xué)評(píng)價(jià)基本內(nèi)容1.基本概念2.血脂測(cè)定的常規(guī)要求3.血漿脂質(zhì)測(cè)定4.血漿脂蛋白測(cè)定5.載脂蛋白測(cè)定6.血漿脂蛋白代謝相關(guān)蛋白質(zhì)與酶的測(cè)定7.基因突變分析基本概念血脂血漿脂蛋白載脂蛋白脂蛋白受體HDL-C、LDL-C、VLDL-C血脂1.定義：指血清/漿中所有脂類物質(zhì)。2.種類：總膽固醇（游離膽固醇FC＋膽固醇酯CE）

甘油三酯磷脂糖脂游離脂肪酸類固醇固醇血漿脂蛋白（lipoprotein,LP）定義共同特征分類血漿脂蛋白（lipoprotein,LP）定義：脂類不溶或微溶于水，無(wú)論是內(nèi)源性或外源性脂類均以溶解度較大的脂蛋白復(fù)合體形式在血液循環(huán)中運(yùn)輸。LP共同特征：

核心：不溶于水的TG和CE

外殼：少量蛋白質(zhì)和極性的PL、FFA

橋梁：PL的極性部分與Prot結(jié)合，非極性部分與其他脂類結(jié)合LP分類：

超速離心法：

CM→VLDL→LDL→HDL→Alb-FFAcomplex

瓊脂糖電泳法：

CM→β→前β→α即：

CM→VLDL→IDL→LDL→LP(a)→HDL

CM

前β

β

前β

α

載脂蛋白

(apolipoprotein,apoprotein,Apo)定義：脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分，具有結(jié)合及轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)、穩(wěn)定LP，作為脂蛋白受體的配體，參與脂蛋白與細(xì)胞表面脂蛋白受體的結(jié)合及其代謝過(guò)程，激活某些與血漿脂蛋白代謝有關(guān)的酶類等作用。分類：

ApoA、B、C、D、E、H、J、（a）

ApoA（AⅠ、AⅡ

、AⅣ）

ApoB（B100、B48）

ApoC（CⅠ、CⅡ、CⅢ0~2）脂蛋白受體定義：一類位于細(xì)胞膜上的糖蛋白。以高度的親和方式與相應(yīng)的脂蛋白配體作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)LP的攝取與代謝，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞外LP的水平。類型：

LDL受體

VLDL受體清道夫受體HDL-C、LDL-C、VLDL-C在LP中有prot、ch、PL等，其中ch含量較為穩(wěn)定，目前以測(cè)定LP中ch含量的方法作為L(zhǎng)P的定量依據(jù)。血脂測(cè)定的常規(guī)要求在顯著改變飲食習(xí)慣后應(yīng)等待3~6個(gè)月測(cè)血脂，同時(shí)要求體重恒定。采血前12h不要飲酒、咖啡、奶病人禁食12h以上，采取靜脈血（止血帶使用不多于1min），采血時(shí)病人取坐位或半臥位（抽血前至少靜坐5min，站立使血脂↑）血脂與年齡、性別、種族等生物因素有關(guān)血脂與飲食習(xí)慣、吸煙、運(yùn)動(dòng)及應(yīng)激等生活方式有關(guān)血脂與臨床（疾病、藥物）有關(guān)血脂與血標(biāo)本采集與處理有關(guān)一般多用血清標(biāo)本，用血漿時(shí)選用EDTA-Na2抗凝，不用肝素四個(gè)基本指標(biāo)（TC、TG、HDL-C、LDL-C）在4℃保存3天，-20℃穩(wěn)定數(shù)周，-70℃以下長(zhǎng)期保存一次檢查結(jié)果可疑應(yīng)幾周后復(fù)查再作診斷血漿脂質(zhì)測(cè)定1.總脂質(zhì)測(cè)定2.總膽固醇（TC）測(cè)定3.甘油三酯（TG）測(cè)定4.磷脂測(cè)定5.游離脂肪酸測(cè)定總脂質(zhì)測(cè)定

方法：

1.脂質(zhì)抽提法

2.直接測(cè)定法總膽固醇（TC）測(cè)定CE占70%，F(xiàn)C占30%分布：LDL中最多其次是HDL和VLDLCM最少意義：

TC高低通常反映LDL-C的高低，但在一定程度上也受HDL-C和VLDL-C水平的影響?？偰懝檀迹═C）測(cè)定方法同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）：決定性方法化學(xué)法：其中ALBK法為參考方法酶法：其中膽固醇氧化酶法為常規(guī)方法TC測(cè)定的化學(xué)試劑顯色法

（強(qiáng)酸試劑顯色法）步驟：

1.抽提（正己烷、乙醇、石油醚等）

↓

2.皂化（KOH）

↓

3.洋地黃皂苷沉淀純化

↓

4.顯色比色

Zak反應(yīng)：

ch+濃h2so4+Fe3++冰醋酸→紫色（563nm）

L-B反應(yīng)：

ch+濃h2so4+醋酸酐+冰醋酸→綠色（410nm）

四步法三步法（正己烷抽提L-B反應(yīng)顯色為公認(rèn)的參考方法）二步法一步法：其中LB反應(yīng)直接法為常規(guī)方法TC測(cè)定的膽固醇氧化酶法原理：

CE膽固醇酯酶（CHE）FC＋FFA

ch＋O2

膽固醇氧化酶（COD）

膽烷-4-烯-3-酮＋H2O2

氧電極

240nm比色

Trinder反應(yīng)

（即CHOD-PAP法，最常用）評(píng)價(jià)：快速、準(zhǔn)確、標(biāo)本用量少，便于自動(dòng)化。

TG測(cè)定分布：主要存在于CM及VLDL中，但空腹血中出現(xiàn)CM是少見的，故空腹血中TG↑代表VLDL↑。方法：化學(xué)法：操作煩瑣，影響因素多，準(zhǔn)確性差，現(xiàn)較少采用。

酶法：操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確，可在自動(dòng)化儀器上批量測(cè)定?；瘜W(xué)法測(cè)定TG基本步驟：

抽提：提取TG，去除PL、游離甘油、Glu等干擾常選用正壬烷/正庚烷-異丙醇-稀硫酸抽提劑

皂化：

KOH

水解

甘油TG甘油甲醛＋甲酸HIO4氧化：顯色：A.變色酸顯色法：氯仿提取變色酸顯色法為常規(guī)方法B.乙酰丙酮顯色法：較簡(jiǎn)便，常用方法C.鹽酸苯肼-高鐵氰化鉀法D.三氮唑法乙酰丙酮顯色法Hantgsch反應(yīng)：甲醛＋乙酰丙酮NH4+3,5-二乙酰-1,4-二氫二甲基吡啶（帶黃色的熒光物質(zhì)，λ412nm)CDC認(rèn)為變色酸法與乙酰丙酮熒光法可以為參考方法酶法測(cè)TG小結(jié)：TGLPL甘油甘油激酶法：（GK)甘油＋ATPGK3-磷酸甘油＋ADP磷酸甘油脫氫酶法磷酸甘油氧化酶法丙酮酸激酶-LDH法甘油脫氫酶法甘油氧化酶法磷酸甘油氧化酶法測(cè)TG

原理：TG+H2O脂蛋白酯酶（LPL）甘油＋FFA甘油＋ATP甘油激酶（GK）Mg2+甘油-3-P

＋ADP

甘油-3-P＋O2磷酸甘油氧化酶（GPO）磷酸二羥丙酮+H2O2H2O2＋4-AAP+4-氯酚POD醌亞胺＋H2O＋HCL評(píng)價(jià)：準(zhǔn)確、靈敏，試劑穩(wěn)定，線性范圍較寬。但要設(shè)空白去除FG的干擾。其中兩步法為中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)的推薦方法。甘油氧化酶法測(cè)TG第一步反應(yīng)：去除游離甘油（FG）FG+O2甘油氧化酶(GlyOD)甘油醛+H2O2H2O2+EMAEPOD無(wú)色物質(zhì)第二步反應(yīng)：測(cè)定TG。在第一步反應(yīng)3～5min后進(jìn)行TG+3H2OLPL甘油+FFA甘油+O2甘油氧化酶(GlyOD)甘油醛+H2O2H2O2+4-AAP+EMAEPOD有色物質(zhì)磷脂測(cè)定化學(xué)法酶法FFA測(cè)定酶法滴定法比色法AASHPLC血漿脂蛋白測(cè)定通常認(rèn)為HDL是動(dòng)脈粥樣硬化的防御因素通常認(rèn)為L(zhǎng)DL是動(dòng)脈粥樣硬化的致病因素這兩類LP的測(cè)定是測(cè)其所含的膽固醇（HDL-C與LDL-C）LP(a)的水平高是心腦血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素血漿脂蛋白測(cè)定1.超速離心分離純化法：多為CDC的參考方法2.電泳分離法：主要用于定性3.血漿靜置實(shí)驗(yàn)：詳見臨床生化理論課4.血漿脂蛋白膽固醇測(cè)定：

1)HDL-C2)LDL-C3)LP(a)沉淀分離LP原理：由于LP的組成與理化性質(zhì)不同，在不同的聚陰離子（PEG、肝素、磷鎢酸等）和不同2價(jià)金屬離子以及不同PH值條件下，使LP與聚陰離子結(jié)合形成復(fù)合物沉淀，以達(dá)到分離測(cè)定的目的。舉例：肝素-Mn2+沉淀LDL與VLDL

磷鎢酸鈉-Mg2+沉淀LDL與VLDL

聚乙烯硫酸鹽沉淀LDLHDL-C測(cè)定化學(xué)沉淀法：磷鎢酸-Mg2+沉淀法為常規(guī)方法均相測(cè)定法免疫法LDL-C測(cè)定計(jì)算法：LDL-C=TC-[HDL-C+(TG