年產(chǎn)3200噸杏鮑菇、雙孢菇綜合深加工生產(chǎn)線項目可行性研究報告

年產(chǎn)3200噸杏鮑菇、雙孢菇及深加工生產(chǎn)線可行性研究報告杏鮑菇深層發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化摘要:本文用液體培養(yǎng)法，以菌絲生物量為主要指標(biāo)，對影響杏鮑菇生長的四個主要營養(yǎng)因子及最佳配方進(jìn)行試驗研究。試驗表明，液體培養(yǎng)杏鮑菇最佳碳源為玉米淀粉，最佳氮源為麥麩，最佳無機(jī)鹽為KH2PO4，最佳維生素為復(fù)合VB。液體培養(yǎng)杏鮑菇的最佳培養(yǎng)基配方為：3%玉米淀粉、2%麥麩、0.1%KH2PO4、70μg/ml復(fù)合VB,起始PH為6～7。用優(yōu)選培養(yǎng)條件培養(yǎng)杏鮑菇菌絲，每100mL培養(yǎng)液平均可產(chǎn)干菌絲2.945g。關(guān)鍵詞:杏鮑菇；深層發(fā)酵；培養(yǎng)基；優(yōu)化StudyontheMediumofSubmergedFermentationforPleorotuseryngiiAbstract：Usingliquidculturemethodinthispaper,fourmainnutritionfactorswhichaffectthegrowthofPleorotuseryngiiwerestudiedaccordingtoindexofmyceliabiomass.TheresultsindicatedthattheoptimummediumforliquidcultureofPleorotuseryngiicontainedcornstarchascarbonsource,wheatbranasnitrogensource,KH2PO4asinorganicsaltandcomplexvitaminB.Theoptimummediumshouldbepreparedasfollows:cornstarch3%,wheatbran2%,KH2PO40.1%,complexvitaminB70μg/mlandinitialPH6～7.Underaboveconditions,2.945gdrymyceliumofPleorotuseryngiiwasobtainedin100mlbroth.Keywords：Pleurotuseryngii;Submergedfermentation;Medium;Optimization引言杏鮑菇學(xué)名：Pleurotuseryngii。別名：剌芹側(cè)耳，在生物分類上屬于擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬[1]。杏鮑菇原產(chǎn)于歐洲南部，非洲北部，印度，巴基斯坦和中國新疆，四川西部等區(qū)域[2]。杏鮑菇菌肉肥厚，質(zhì)地脆嫩，特別是菌柄組織致密、結(jié)實、乳白，可全部食用，且菌柄比菌蓋更脆滑、爽口，被稱為“平菇王”、“干貝菇”，具有愉快的杏仁香味和如鮑魚的口感，適合保鮮、加工，深得人們的喜愛。杏鮑菇營養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及鈣、鎂、銅、鋅等礦物質(zhì)，可以提高人體免疫功能，對人體具有抗癌、降血脂、潤腸胃以及美容等作用。每100g杏鮑菇含有：熱量31.00千卡，碳水化合物8.30g，脂肪0.10g，蛋白質(zhì)1.30g，在蛋白質(zhì)中含有18種氨基酸，其中人體必需的8種氨基酸齊全，具有天然、營養(yǎng)、保健等多種特性與一體的珍稀食用菌，極受消費(fèi)者歡迎[3,4]。杏鮑菇的子實體單生或群生，菌蓋寬2～12cm，初呈拱圓形，后逐漸平展，成熟時中央淺凹至漏斗形，表面有絲狀光澤，平滑、干燥、細(xì)纖維狀，幼時蓋緣內(nèi)卷，成熟后呈波浪狀或深裂；菌肉白色，具有杏仁味，無乳汁分泌；菌褶延生，密集，略寬，乳白色，邊緣及兩側(cè)平，有小菌褶；菌柄2～8cm至0.5～3cm，偏心生或側(cè)生。杏鮑菇屬于中低溫結(jié)實性菌類。子實體發(fā)育適宜溫度圍10～15℃，通常采取室內(nèi)菌袋層架栽培。目前，杏鮑菇栽培普遍用的是固體菌種，固體菌種生產(chǎn)要經(jīng)過較為繁瑣的母種、原種、栽培種三級培育，存在勞動強(qiáng)度大、工藝繁瑣、雜菌污染率高、生長周期長、菌齡不一致、規(guī)模化程度低等一系列問題，大大制約了杏鮑菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[5,6]。利用深層發(fā)酵生產(chǎn)的液體菌種具有菌齡整齊，生產(chǎn)周期短，菌種成本低等優(yōu)點(diǎn)，且便于使用接種搶和自動接種機(jī)進(jìn)行接種，簡便快捷，利于管理，適宜規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)[7～9]。為此，對杏鮑菇液體發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行再次研究，以確定其適宜的營養(yǎng)液配方，為液體菌種在食用菌生產(chǎn)中發(fā)揮更大作用，為擴(kuò)大化生產(chǎn)提供科學(xué)的理論依據(jù)。本試驗著重研究的是不同配比的主要營養(yǎng)因子對杏鮑菇菌絲體產(chǎn)量的影響來確定最佳的培養(yǎng)基，因不同配比對菌絲體產(chǎn)量的影響很大，因此需要利用單因素試驗首先篩選出最適合杏鮑菇菌絲體生長的主要營養(yǎng)因子：碳源、氮源、無機(jī)鹽和維生素。然后，對液體培養(yǎng)杏鮑菇的這些最佳營養(yǎng)因子碳源、氮源、無機(jī)鹽和維生素按不同配比進(jìn)行正交試驗，得出液體培養(yǎng)杏鮑菇的最佳培養(yǎng)基配方。在此基礎(chǔ)上確定培養(yǎng)基的最適起始pH,從而為杏鮑菇的擴(kuò)大化生產(chǎn)做好基礎(chǔ)準(zhǔn)備。第一章緒論1.1食用菌生產(chǎn)狀況隨著社會的進(jìn)步，人們對營養(yǎng)價值的需求在不斷的提高，因此，需要生產(chǎn)出大量的高品質(zhì)，高營養(yǎng)的菇類來滿足人們的需求，但是傳統(tǒng)的固體培養(yǎng)杏鮑菇菌種的生產(chǎn)工藝比較繁瑣，且費(fèi)時費(fèi)力，據(jù)統(tǒng)計，我國現(xiàn)有可食用的真菌有850多種,幾乎包括目前世界上所報道的主要種類。它以其特有的鮮香風(fēng)味、豐富的營養(yǎng)和較高的藥用價值得到世人的喜愛。中國加入WTO，在充滿機(jī)遇的同時意味著激烈的競爭。近10年來，我國食用菌生產(chǎn)一直保持較高的增長速度，從1990年的100萬t到1998年400萬t[10],現(xiàn)在的產(chǎn)量約占世界總產(chǎn)量的2/3左右。隨著食用菌生產(chǎn)的迅猛發(fā)展，傳統(tǒng)的食用菌生產(chǎn)模式已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足食用菌日益發(fā)展的要求。因此，運(yùn)用工業(yè)微生物的純種培養(yǎng)技術(shù)來進(jìn)行食用菌的工業(yè)化制種生產(chǎn)方法的研究，已經(jīng)迫在眉睫。1.2食用菌液體菌種的研究現(xiàn)狀食用菌的液體發(fā)酵在抗生素發(fā)酵技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。1947年美國的漢姆菲特首次提出了液體菌種法生產(chǎn)蘑菇菌絲體。1958年，美國液體深層發(fā)酵專家J.Szuecs利用發(fā)酵罐成功培養(yǎng)出多種食用菌菌絲體。1960年在日本，固體食用菌菌種稱之為“第一時代菌種”一直被廣泛使用。直至1999年，日本一家大型菇廠首次采用了在可動發(fā)酵罐里培養(yǎng)食用菌菌種的韓國模式液體菌種系統(tǒng)，并稱之為“第二時代菌種”。國內(nèi)從1960年上海植物生理研究所的陳聿美等對蘑菇的深層培養(yǎng)進(jìn)行研究以來，已經(jīng)有許多單位和個人對數(shù)十種食用菌進(jìn)行了液體培養(yǎng)的研究[11]。在中國第四屆蘑菇節(jié)，日本起源生物技術(shù)株式會社的小林恭久先生著重介紹了還原型液體食用菌菌種，稱之為“第三時代菌種”，它是把人工生產(chǎn)的還原型固體食用菌菌種塊粉碎后用無菌水稀釋而成的液體食用菌菌種，還原型固體菌種具有活力強(qiáng)，接種量大的特點(diǎn)，每1200ml菌種可擴(kuò)接10000瓶。目前，日本一些大型杏鮑菇食用菌菌種中心開始大規(guī)模地引進(jìn)這一技術(shù)，并已經(jīng)實用在杏鮑菇的生產(chǎn)上。在國內(nèi)，1962年中國科學(xué)院植物生理研究所的陳聿美等對香菇、杏鮑菇、平菇、草菇等15種食用菌的深層培養(yǎng)進(jìn)行研究。直至1987年，上海師范大學(xué)的楊慶堯等首次報道以液體食用菌菌種作為原種，合成顆粒或谷粒菌種作栽培種的蘑菇制種新工藝，整個制種工序歷時僅23～27d，比舊工藝快3～4倍。目前能用液體培養(yǎng)制種的食用菌有雙孢蘑菇、金針菇、杏鮑菇、香菇、猴頭菇、黑木耳、平菇等。但由于液體食用菌菌種對生產(chǎn)工藝及技術(shù)條件要求高，多數(shù)試驗停留在搖瓶培養(yǎng)階段，并受資金和技術(shù)的限制，我國仍有相當(dāng)多食用菌生產(chǎn)企業(yè)和個人采用傳統(tǒng)固體菌種栽培模式。2009年，黃愛榮等利用全自動發(fā)酵罐對雙孢蘑菇As2796液體食用菌菌種的發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究，并對不同擴(kuò)增倍數(shù)的液體食用菌菌種的活力進(jìn)行了比較。2010年，沈敏等對杏鮑菇液體食用菌菌種進(jìn)行研發(fā)工作，并將液體食用菌菌種成功應(yīng)用在工廠化栽培中，實現(xiàn)了杏鮑菇工廠化栽培的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效的目標(biāo)。隨著工業(yè)化生產(chǎn)和經(jīng)營管理方式組織食用菌生產(chǎn)的進(jìn)程不斷推進(jìn)，越來越多食用菌生產(chǎn)企業(yè)將液體食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)與工廠化栽培技術(shù)有機(jī)結(jié)合，來實現(xiàn)食用菌規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化、現(xiàn)代化的工廠化生產(chǎn)。1.3應(yīng)用前景及方向1.3.1食品工業(yè)上的應(yīng)用液體發(fā)酵食用菌菌絲體的營養(yǎng)成分，無論蛋白質(zhì)、氨基酸，還是維生素的含量，都類似于子實體。用工業(yè)化液體發(fā)酵生產(chǎn)食用菌蛋白質(zhì)，比飼養(yǎng)家畜或家禽來獲取蛋白質(zhì)的時間短、效率高、成本低。因此，食用菌的深層發(fā)酵在食品工業(yè)方面將有很大的發(fā)展前途。1.3.2生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)上的應(yīng)用食用菌在深層培養(yǎng)過程中會產(chǎn)生多糖、生物堿、萜類化合物、酶、核酸、具抗生素作用的多種化合物以及植物激素等多種生理活性物質(zhì)，這些物質(zhì)分別具有對心血管、肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)等人體器官的防病治病作用，以及抗癌、消炎和提高機(jī)體免疫力等功效。1.3.3其它行業(yè)上的應(yīng)用液體發(fā)酵形成的菌絲體以及含有多種代謝產(chǎn)物的發(fā)酵液，是上等的飼料，一般作為蛋白質(zhì)原料加入到飼料中，具有易吸收、轉(zhuǎn)化效率高、經(jīng)濟(jì)效益好等特點(diǎn)，將是動物飼料中蛋白質(zhì)的重要來源。1.4杏鮑菇的研究狀況杏鮑菇含有豐富的鉀、鈣、鈉、鎂、鋅、銅、鐵、鉬、錫等10余種礦質(zhì)元素,18種氨基酸,其中含人體必需的8種氨基酸，入藥有降血壓、降血脂、降低膽固醇和增強(qiáng)肌體免疫力之功效。其寡糖含量豐富,與雙岐桿菌結(jié)合有改善腸胃功能和美容的效果,寡糖還有抗癌的活性作用[12]。該菇肉質(zhì)肥厚脆嫩,味道鮮美,有清淡的杏仁香味,風(fēng)味獨(dú)特,被譽(yù)為“菇中之王”。但杏鮑菇屬于低溫型菌球,溫度高于20℃以上,菇柄萎縮易發(fā)黃,甚至腐爛,易受細(xì)菌感染,商業(yè)性栽培規(guī)模尚小,生物轉(zhuǎn)化率較低[13～15]。采用液體深層發(fā)酵技術(shù)比傳統(tǒng)的食用菌生產(chǎn)方式有明顯的優(yōu)越性,在短時間內(nèi)能產(chǎn)生大量的菌絲體,菌種可進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，具有生產(chǎn)周期短,菌齡整齊等優(yōu)點(diǎn)[16,17]。目前,國內(nèi)外對真菌的研究主要集中于香菇、靈芝及蟲草屬等常見的名貴菌種,研究內(nèi)容主要為多糖,利用其抗癌活性制備新藥,或利用其子實體的提取制備保健飲料、口服液等。法國、意大利和印度先后進(jìn)行杏鮑菇人工栽培研究,泰國、日本和美國已進(jìn)行小規(guī)模栽培試驗。我國20世紀(jì)90年代開始引種栽培。目前國內(nèi)外對杏鮑菇的研究僅限于固體培養(yǎng)[13,18],對液體深層發(fā)酵的研究卻少見報道。作者對杏鮑菇液體深層發(fā)酵工藝進(jìn)行初步研究,旨在為杏鮑菇進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。液體深層發(fā)酵技術(shù)的概念是20世紀(jì)40年代提出的。相比傳統(tǒng)固體發(fā)酵方法,液體深層發(fā)酵技術(shù)有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)率高、生產(chǎn)過程容易控制、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定且提取分離容易的特點(diǎn),因此在工業(yè)微生物和生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用范圍和規(guī)模在不斷擴(kuò)大,對液體深層發(fā)酵技術(shù)條件的研究也越來越廣泛和深入。目前許多大型藥用真菌的產(chǎn)品,如云芝糖肽(PSP)、PSK，灰樹花多糖等，都已經(jīng)運(yùn)用該法進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)[19～22]。目前,國內(nèi)外對杏鮑菇的研究主要集中在其栽培技術(shù)上[23,24]。從其生物學(xué)特性、子實體形成條件及培養(yǎng)料上進(jìn)行探討[25～27]。傳統(tǒng)上,人們多從人工栽培的子實體中開發(fā)活性物質(zhì),但由于人工栽培子實體生產(chǎn)周期長,勞動強(qiáng)度大,受季節(jié)與氣候影響大,從而限制了杏鮑菇工業(yè)化生產(chǎn)。且因水、空氣、培養(yǎng)基質(zhì)以及土壤等原因,造成重金屬富集,致使提取后的生物活性物質(zhì)缺乏安全保障。而液體發(fā)酵可以進(jìn)行工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn),具有接種方便、菌齡較一致、發(fā)酵周期短、規(guī)模大、產(chǎn)量高、生產(chǎn)效益高等優(yōu)點(diǎn)。用液體發(fā)酵培養(yǎng)獲得的杏鮑菇菌絲體,其營養(yǎng)價值和有效成分完全與子實體相當(dāng),因此,液體深層發(fā)酵是開發(fā)杏鮑菇活性成分的有效手段[28]。杏鮑菇產(chǎn)品的應(yīng)用日益廣泛，其需求量也不斷增加，但是對生產(chǎn)條件的研究深度不足，對產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化研究尚不足夠,因此將限制杏鮑菇生產(chǎn)的進(jìn)一步發(fā)展和完善，目前多數(shù)杏鮑菇生產(chǎn)還是僅限于固體培養(yǎng)培養(yǎng)菌絲體和子實體，液體深層發(fā)酵只是用于試驗階段，還沒有進(jìn)行大規(guī)模應(yīng)用。有待進(jìn)一步優(yōu)化生產(chǎn)條件，找出最優(yōu)組合用于進(jìn)行杏鮑菇菌絲體的培養(yǎng)，縮短生產(chǎn)周期，提高杏鮑菇菌絲體的產(chǎn)量。第二章材料與方法2.1試驗材料2.1.1杏鮑菇菌種由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌研究所提供。2.1.2培養(yǎng)基(1)斜面菌種培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g瓊脂20g，水1000ml,PH值自然。(2)液體菌種培養(yǎng)基：玉米面30g，蔗糖20g，麥麩30g,酵母粉3g，MgSO40.5g，KH2PO41g,水1000ml,PH值自然。2.1.3試驗原材料碳源：甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、可溶性淀粉、玉米淀粉。氮源：硝酸鈉、尿素、麥麩、蛋白胨、黃豆粉。無機(jī)鹽：MgSO4，Ca2Cl，KH2PO4，KCL,FeSO4。維生素：VB1、VB2、VB6等各種原料。2.1.4儀器設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱、旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、電子分析天平等。2.2試驗方法2.2.1母種活化將保存的菌種轉(zhuǎn)接到無菌的斜面培養(yǎng)基上，放入25℃2.2.2一級搖瓶菌種將活化的斜面母種分割成1cm2大小的快，接種到液體搖瓶培養(yǎng)基中，每瓶3塊，置于培養(yǎng)箱內(nèi)，25℃靜置培養(yǎng)24h后，置于25℃的搖床上震蕩培養(yǎng)6d，獲得一級搖瓶菌種。2.2.3搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)按照各處理要求，制作液體培養(yǎng)基，然后接入一級菌種，用250ml的三角瓶，裝液量為100ml每瓶，在搖床上振蕩培養(yǎng)6d。2.2.4試驗設(shè)計碳源單因素試驗基本培養(yǎng)基為：3%麥麩，HK2PO40.15%，60μg/mlVB1，60μg/mlVB2，60μg/mlVB6。分別添加甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、可溶性淀粉、玉米淀粉作為碳源，濃度均為3%，每個因素重復(fù)3次[29]。氮源單因素試驗基本培養(yǎng)基為：2%玉米淀粉，HK2PO40.15%，60μg/mlVB1，60μg/mlVB2，60μg/mlVB6。分別添加硝酸鈉、尿素、麥麩、蛋白胨、黃豆粉作為氮源，濃度均為3%，每個因素重復(fù)3次[29]。無機(jī)鹽單因素試驗基本培養(yǎng)基為：2%玉米淀粉，3%麥麩，60μg/mlVB1，60μg/mlVB2，60μg/mlVB6，分別添加MgSO4，Ca2Cl，KH2PO4，KCL，F(xiàn)eSO4作為無機(jī)鹽，濃度均為0.15%，每個因素重復(fù)3次[29]。生長因子單因素試驗基本培養(yǎng)基為：2%玉米淀粉，3%麥麩，KH2PO40.15%，分別添加60μg/mlVB1、60μg/mlVB2、60μg/mlVB6、60μg/mlVB1+60μg/mlVB2、60μg/mlVB1+60μg/mlVB6、60μg/mlVB2+60μg/mlVB6、60μg/mlVB1+60μg/mlVB2+60μg/mlVB6作為生長因子，設(shè)置三個重復(fù)[29]。2.2.5不同配比的營養(yǎng)因子對杏鮑菇菌絲體生長的影響設(shè)計L9(34)的正交試驗，通過測定菌絲體干重來確定影響杏鮑菇生長的最佳碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子的配比。試驗前采用PDA培養(yǎng)基將供試的杏鮑菇復(fù)壯,擴(kuò)大培養(yǎng)。將斜面菌種接種到液體培養(yǎng)基中，250ml錐形瓶裝液量100ml置轉(zhuǎn)速120r.min，溫度25℃的往復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)7d，得到一級種，并按10%接種量進(jìn)行擴(kuò)培。然后按10%接種量將其接種到不同的供試培養(yǎng)基中,每個處理3次，于相同條件下培養(yǎng)7d,正交試驗因素水平見表2.1.表2.1培養(yǎng)基營養(yǎng)因子正交試驗因素與水平水平因素A玉米淀粉/%B麥麩/%CKH2PO4/%DVB1+VB2+VB6μg/ml1 110.1050+50+502220.1560+60+603330.2070+70+702.2.6液體培養(yǎng)基最適pH試驗采用上述試驗確定的最適培養(yǎng)基配方，用1mol/LHCL或1mol/LNaOH將培養(yǎng)基pH分別調(diào)整為4、5、6、7、8、9，接種后，利用上述試驗確定的最佳培養(yǎng)條件進(jìn)行震蕩培養(yǎng)6d。測定在不同起始pH條件下pH的變化情況，通過測定菌絲體的含量來確定培養(yǎng)杏鮑菇液體培養(yǎng)基的最適起始pH[30]。2.2.7稱量菌絲體的干重將培養(yǎng)好的菌絲體用離心機(jī)先進(jìn)行離心沉淀，再用濾紙過濾，然后用蒸餾水沖洗幾遍，放在已烘干與稱重的培養(yǎng)皿上，放入干燥箱中105℃烘干，再稱重，直至2次稱重的重量差不超過2mg即為恒重。第三章試驗結(jié)果與分析3.1碳源單因素試驗結(jié)果由表3.1知，當(dāng)玉米淀粉作為碳源時，菌絲生長量最大，每100ml培養(yǎng)液最高可產(chǎn)干菌絲2.670g(平均為2.518g），其次為可溶性淀粉，菌絲量最少的是甘露醇，每100ml培養(yǎng)液最高可產(chǎn)干菌絲0.414g(平均為0.436g）；從整體角度來看，混合物碳源要比化合物碳源的產(chǎn)量高，從表中可看出，可溶性淀粉和玉米淀粉的菌絲產(chǎn)量明顯的比甘露醇、麥芽糖和葡萄糖的產(chǎn)量高。這是因為混合物碳源里面含有多種營養(yǎng)物質(zhì)供菌絲體生長利用，如玉米淀粉中含有糖類、蛋白質(zhì)、胡蘿卜素、黃體素、天然維生素E，玉米黃質(zhì)、磷、鎂、鉀、鋅等。其中天然維生素E，有促進(jìn)細(xì)胞分裂，延緩細(xì)胞衰老的功能。因此，玉米淀粉是最佳碳源。碳源既是構(gòu)成菌體細(xì)胞和代謝產(chǎn)物的主要元素，也是提供菌體生命活動所需的能源，對發(fā)酵有著重要影響[31]。淀粉類多糖一般需經(jīng)過菌體產(chǎn)生的胞外酶水解成單糖后再被利用，可克服葡萄糖等單糖代謝過快的弊端。對于杏鮑菇之類的大型真菌，培養(yǎng)周期較長，多糖類的碳源應(yīng)優(yōu)于單糖，但是濃度不能太高或太低，如淀粉濃度過高，造成發(fā)酵液黏度過大，溶氧降低，會影響菌絲生長；濃度過低，會造成營養(yǎng)不足，使菌絲衰老甚至自溶。表3.1碳源單因素試驗結(jié)果（g/100ml)項目甘露醇麥芽糖葡萄糖可溶性淀粉玉米淀粉0.4200.5301.4382.2052.560菌絲干重0.4750.4711.3422.0102.3240.4140.5131.2721.9652.670平均值0.4360.5051.3512.0602.5183.2氮源單因素試驗結(jié)果由表3.2可知，當(dāng)麥麩作為氮源時，杏鮑菇菌絲生長量最大，每100ml培養(yǎng)液最高可產(chǎn)干菌絲2.830g(平均為2.615g），其次為蛋白胨，較差的為尿素和硝酸鈉。從整體角度來看，有機(jī)氮源比無機(jī)氮源的菌絲產(chǎn)量要高。氮源作為培養(yǎng)基的重要營養(yǎng)成分，主要功能是構(gòu)成微生物細(xì)胞和含氮代謝物[32]。由于蛋白胨、麩皮、黃豆粉里既有碳元素又有氮元素，也含有其它的營養(yǎng)物質(zhì)，有利于杏鮑菇菌絲體生長發(fā)育，營養(yǎng)物質(zhì)較豐富，菌絲生長較快。而杏鮑菇在無機(jī)氮源上基本生長很慢，證明杏鮑菇利用無機(jī)氮源的能力較差，這是因為有些氨基酸杏鮑菇自身不能合成，無機(jī)氮源是不能提供的，只能吸收有機(jī)氮源內(nèi)的游離氨基酸。表3.2氮源單因素試驗結(jié)果（g/100ml）項目硝酸鈉尿素麥麩蛋白胨黃豆粉0.0620.0402.5602.0501.806菌絲干重0.0800.0352.8302.4542.0300.0730.0542.4552.3672.255平均值0.0720.0432.6152.2902.0303.3無機(jī)鹽單因素試驗結(jié)果由表3.3可知，當(dāng)KH2PO4作為無機(jī)鹽材料時，KH2PO4最好，杏鮑菇的菌絲生長量最多，每100ml培養(yǎng)液最高可產(chǎn)干菌絲2.860g(平均為2.733g）其次為CaCL2最差的是FeSO4。鉀離子不僅能調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓和通透性，還能激活許多酶，并促進(jìn)糖代謝。表3.3無機(jī)鹽單因素試驗結(jié)果（g/100ml）項目MgSO4Ca2ClKH2PO4KCLFeSO41.5202.3202.8602.3401.560菌絲干重2.1542.3872.5432.2001.6792.2342.5642.7961.9981.898平均值1.9692.4242.7332.1791.7123.4生長因子單因素試驗結(jié)果由表3.4可知，把生長因子結(jié)合起來使用要比生長因子單獨(dú)使用時產(chǎn)量高，復(fù)合生長因子VB1+VB2+VB6作為培養(yǎng)液原料時，菌絲量達(dá)到最大，每100ml培養(yǎng)液最高可產(chǎn)干菌絲2.890g(平均為2.775）這說明當(dāng)三種生長因子復(fù)合使用效果最佳。因不同的維生素對菌絲體所產(chǎn)生的影響不同，且發(fā)揮作用的時間點(diǎn)也不盡相同，因此，三者結(jié)合起來使用，效果最佳。表3.4生長因子單因素試驗結(jié)果（g/100ml）項目VB1VB2VB6VB1+VB2VB1+VB6VB2+VB6VB1+VB2+VB61.3561.3601.5621.7061.4232.3562.680菌絲干重1.6201.5282.1031.8921.9202.1102.8901.8981.7501.8952.3031.6862.0642.756平均值1.6251.5461.8531.9671.6762.1772.7753.5營養(yǎng)因子不同配比對杏鮑菇菌絲生長的正交試驗結(jié)果表3.5杏鮑菇營養(yǎng)因子的正交試驗結(jié)果編號因素菌絲體生物量/(g/100ml)ABCDⅠⅡⅢ平均值111112.1202.3862.5342.347212222.3682.2232.6452.412313332.5842.3202.4902.465421232.5072.8452.7642.705522312.6142.5872.8132.671623122.9042.5002.4352.613731322.4792.5983.0562.711832132.8353.0562.9442.945933212.4762.6132.9142.668K17.2247.7637.9057.686K27.9898.0287.7857.736K38.3247.7467.8478.115R1.1000.2820.1200.429注：表中A、B、C、D分別代表玉米淀粉、麥麩、KH2PO4、VB1+VB2+VB6杏鮑菇各營養(yǎng)因子的正交試驗結(jié)果見表3.5，試驗最佳組合為A3B2C1D3，即最佳培養(yǎng)基為玉米淀粉3%，麥麩2%，KH2PO40.1%，70μg/mlVB1，70μg/mlVB2，70μg/mlVB6；極差分析結(jié)果表明，各營養(yǎng)因子對杏鮑菇的菌絲體生長的影響大小為：A>D>B>C，即玉米淀粉>VB1+VB2+VB6>麥麩>KH2PO43.6不同起始pH對杏鮑菇菌絲生物量的影響從表3.6可以看出，杏鮑菇在pH為4～9之間菌絲均能生長，但不同的pH對菌絲生物量有較大影響。試驗顯示，配置營養(yǎng)液時，起始環(huán)境PH越高，菌絲體在表3.6起始PH對杏鮑菇菌絲體生物量的影響滅菌前pH培養(yǎng)終點(diǎn)pH培養(yǎng)前后pH變化菌絲體生物量/（g/100ml）4.003.46-0.541.5285.004.65-0.351.9806.005.37-0.632.4507.006.21-0.792.5228.006.12-1.882.1429.006.26-2.741.754生長過程中分泌的有機(jī)酸越多，最終培養(yǎng)液pH值下降越多。杏鮑菇菌絲體適宜在偏酸性的環(huán)境中生長，由于培養(yǎng)基高溫滅菌后，發(fā)酵液的pH會有所降低，菌絲體在生長過程中由于自身的一些代謝作用會分泌一些有機(jī)酸，這些有機(jī)酸的積累會使發(fā)酵液的pH進(jìn)一步降低。本試驗液體菌種發(fā)酵的起始pH時中性偏酸較好，即pH為6～7為最適發(fā)酵pH。結(jié)論利用單因素試驗選出利于杏鮑菇菌絲體生長的最佳碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子等營養(yǎng)因子，從試驗結(jié)果中可以看出，最佳碳源為玉米淀粉，復(fù)合碳源要比純碳源所產(chǎn)生的菌絲量多，在所選的5種碳源中，可溶性淀粉和玉米淀粉的菌絲產(chǎn)量明顯的比甘露醇、麥芽糖和葡萄糖的產(chǎn)量高；最佳氮源為麥麩，同樣有機(jī)氮優(yōu)于無機(jī)氮源；最佳的無機(jī)鹽和生長因子分別為KH2PO4、VB1+VB2+VB6。通過正交試驗，對不同營養(yǎng)因子進(jìn)行最佳組合的研究表明，杏鮑菇深層發(fā)酵的最適培養(yǎng)基配方為：玉米淀粉3%，麥麩2%，KH2PO40.1%，70μg/mlVB1，70μg/mlVB2，70μg/mlVB6。培養(yǎng)杏鮑菇的最適起始pH為6～7。本研究結(jié)果只適宜搖瓶培養(yǎng)杏鮑菇液體菌種，在發(fā)酵罐中大規(guī)模生產(chǎn)需要的適宜培養(yǎng)條件，有待進(jìn)一步的研究。本試驗只對影響杏鮑菇深層發(fā)酵主要的幾種因素進(jìn)行了研究，影響杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)其它的因素還有很多，如溫度、裝液量、搖床轉(zhuǎn)速、接種量、培養(yǎng)時間等多種因素。由于試驗條件有限，可能其它未被發(fā)現(xiàn)的營養(yǎng)因子對菌絲量的影響很大。另外，對于碳源、氮源、無機(jī)鹽和維生素的選擇可以多種結(jié)合起來，效果可能會更佳。對培養(yǎng)杏鮑菇菌絲體起著至關(guān)重要作用的多種因素仍需要進(jìn)一步的探討。參考文獻(xiàn)[1]劉振祥,張勝.食用菌栽培學(xué)[M].北京:化學(xué)工藝出版社,2007.[2]嚴(yán)鴻,張竹青,嚴(yán)奉偉.球蓋菇杏鮑菇鮑魚菇[M].北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2002.[3]陳明娟,江枝和,蔡順香.杏鮑菇營養(yǎng)成分的分析[J].食用菌,2002,24(2):11-12.[4]陳福祿,謝寶貴,鄭金貴,等.藥用菌多糖的藥用功能與展望[J].中國藥學(xué)雜志,2005,40(4):244-248.[5]阮曉東,張曉黎,張慧文,等.食用菌液體菌種的發(fā)展與與應(yīng)用[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué),2008，(1):32-35.[6]王維云,朱金華.食用菌液體深層發(fā)酵技術(shù)研究進(jìn)展與展望[J].中國食用菌,1997,17(2):11-12.[7]胡權(quán)貴.食用菌液體菌種的制作及應(yīng)用[J].食用菌,1998,20(1):17-18.[8]陳娟,朱忠貴,李萍萍.食用菌液體發(fā)酵技術(shù)的研究進(jìn)展與發(fā)展前景[J].食用菌(增刊)，2006,(5):8-9.[9]呂莉.應(yīng)用液體菌種生產(chǎn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由于我的寫作水平有限，所寫論文難免有不足之處，懇請各位老師和學(xué)友批評和指正。目錄第一章總則 11.1項目概況 11.2項目建設(shè)的背景與意義 4第二章市場分析 82.1包裝業(yè)前景分析 82.2項目產(chǎn)品目標(biāo)市場及營銷策略 8第三章行業(yè)發(fā)展趨勢及市場預(yù)測 103.1國內(nèi)印刷包裝業(yè)的發(fā)展情況 103.2印刷包裝業(yè)發(fā)展方向 103.3國內(nèi)包裝業(yè)市場需求分析 113.4市場前景 11第四章項目建設(shè)條件分析 124.1項目實施地域概況 124.2項目建設(shè)資源 124.3場址選擇 13第五章節(jié)能方案分析 145.1用能標(biāo)準(zhǔn)和節(jié)能規(guī)范 145.2節(jié)能方案的技術(shù)要求 14第六章技術(shù)方案、設(shè)備方案和工程 176.1總體布局 176.2工藝技術(shù)方案 176.3設(shè)備方案 176.4產(chǎn)品方案 196.5工程技術(shù)方案 19第七章環(huán)境保護(hù)與安全生產(chǎn) 227.1環(huán)境保護(hù) 227.2勞動衛(wèi)生與安全生產(chǎn) 257.3其它 26第八章組織機(jī)構(gòu)與人力資源配置 278.1組織機(jī)構(gòu) 278..2人力資源配置 278.3員工來源和培訓(xùn) 27第九章項目管理與實施進(jìn)度 289.1項目管理 289.2項目建設(shè)工期和實施進(jìn)度 28HYPERLINK"file:///F: