藥物分子學(xué) 緒論-1

藥學(xué)分子生物學(xué)PHARMACEUTICALMOLECULARBIOLOGY2023/6/142藥學(xué)分子生物學(xué)

PharmaceuticalMolecularBiology

第一章緒論

Chapter1Introduction

金晶中山大學(xué)藥學(xué)院

jinjing@2023/6/1432023/6/1442.分子生物學(xué)的研究內(nèi)容1.分子生物學(xué)的定義3.分子生物學(xué)與生物技術(shù)4.分子生物學(xué)與醫(yī)學(xué)內(nèi)容概要2023/6/145

一、分子生物學(xué)的定義2023/6/146從整體水平到分子水平示意圖分子水平細(xì)胞水平整體水平

生命科學(xué)的發(fā)展過程：2023/6/147

生命科學(xué)的研究內(nèi)容：

生命物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能，生物與生物之間及生物與環(huán)境之間相互關(guān)系。

生命科學(xué)的前沿領(lǐng)域：分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)，而分子生物學(xué)是生命科學(xué)的核心前沿。生命科學(xué)是研究生命現(xiàn)象和生命活動規(guī)律的一門綜合性學(xué)科。2023/6/148

分子生物學(xué)——從分子水平研究生命現(xiàn)象及其規(guī)律的一門新興學(xué)科。它是生命科學(xué)中發(fā)展最快并且與其他學(xué)科廣泛交叉和滲透的前沿領(lǐng)域。2023/6/149分子生物學(xué):更加微觀的角度研究生命現(xiàn)象

探討了有關(guān)基因表達(dá)和細(xì)胞發(fā)育和分化的調(diào)控的分子機(jī)制,以及闡明生物分子間相互識別、相互作用和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本化學(xué)原理等一系列問題。2023/6/1410

1950年，Astbury在一次講演中首先使用“分子生物學(xué)”這一術(shù)語,用以說明它是研究生物大分子的化學(xué)和物理學(xué)結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)代分子生物學(xué)的建立2023/6/1411DNA的X光衍射照片1952年5月拍攝羅沙琳德·弗蘭克林（RosalindFranklin，1920－1958）英國

DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的建立2023/6/1412DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的建立諾貝爾醫(yī)學(xué)與生理學(xué)獎1962年2023/6/1413WatsonJD和CrickFHC的“雙螺旋結(jié)構(gòu)模型”啟動了分子生物學(xué)及重組DNA技術(shù)的發(fā)展。確立了核酸作為信息分子的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)；提出了堿基配對是核酸復(fù)制、遺傳信息傳遞的基本方式，最終確定了核酸是遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)。2023/6/1414

分子生物學(xué)技術(shù)：

例如：DNA及RNA的印跡轉(zhuǎn)移、核酸分子雜交、基因克隆、基因體外擴(kuò)增、DNA測序等，形成了獨(dú)特的重組DNA技術(shù)及其相關(guān)技術(shù)。

由生物化學(xué)、生物物理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、應(yīng)用微生物學(xué)及免疫學(xué)等各專業(yè)技術(shù)的滲透、綜合而成，并在此基礎(chǔ)上發(fā)明和創(chuàng)造了一系列新的技術(shù)。2023/6/1415分子克隆(molecularcloning)

重組DNA(recombinantDNA)技術(shù)是近代分子生物學(xué)技術(shù)的核心。

基因操作(genemanipulation)

基因克隆(genecloning)基因工程(geneengineering)2023/6/1416分子醫(yī)學(xué)（molecularmedicine）：由于分子生物學(xué)滲透進(jìn)入生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的每一分支領(lǐng)域，全面推動了生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個方面的發(fā)展，如疾病的發(fā)病機(jī)理研究、疾病的診斷和治療，使醫(yī)學(xué)進(jìn)入了一個嶄新的時代。

2023/6/1417?遺傳性狀改變或治療疾病可能從某一生物體的基因組中分離出某一特定功能基因，導(dǎo)入到另一種生物的基因組。

?基因工程和蛋白質(zhì)工程

外源DNA與載體在體外進(jìn)行連接，或在基因水平上進(jìn)行有目的的定向誘變。生物技術(shù)進(jìn)入了分子水平，基因（或DNA）也進(jìn)入了社會生產(chǎn)和人們生活的方方面面。2023/6/1418二、分子生物學(xué)的研究內(nèi)容2023/6/1419分子生物學(xué)的主要研究內(nèi)容：生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能，生物大分子之間的相互作用及其與疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。2023/6/1420

核酸的分子生物學(xué)主要研究核酸的結(jié)構(gòu)及其功能。核酸的主要作用是攜帶和傳遞遺傳信息，因此形成了分子遺傳學(xué)。（一）核酸分子生物學(xué)：

分子遺傳學(xué)：形成了比較完整的理論體系和研究技術(shù)，它是目前分子生物學(xué)中內(nèi)容最豐富、研究最活躍的一個領(lǐng)域。2023/6/14211.核酸的發(fā)現(xiàn)

早在1868年，Miescher從膿細(xì)胞中分離出細(xì)胞核，用稀堿抽提再加入酸，得到了一種含氮和磷特別豐富的物質(zhì)，當(dāng)時稱其為核素（nuclein）。

1872年，他又在鮭魚精子細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)了大量的這類物質(zhì)。由于這類物質(zhì)都是從細(xì)胞核中提取出來的，而且又是酸性，故稱其為核酸（nucleicacid）。FriedeichMiescher2023/6/1422

自核酸被發(fā)現(xiàn)以來的相當(dāng)長時期內(nèi)，對它的生物學(xué)功能幾乎毫無所知。

1928年(FrederickGriffith)以后，核酸功能研究取得了重大進(jìn)展。2023/6/1423In1928,anexperimentofFrederickGriffithusingpneumoniabacteriaandmice2023/6/1424

1952年，HersheyAD和ChaseM用35S和32p分別標(biāo)記T2噬菌體的蛋白質(zhì)和核酸，感染大腸桿菌。在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)增殖的噬菌體中都只含有32P而不含35S,這表明噬菌體的增殖直接取決于DNA而不是蛋白質(zhì)。2.核酸功能研究的重大進(jìn)展

1944年，AveryOT等首次證明肺炎雙球菌的DNA與其轉(zhuǎn)化和遺傳有關(guān)。2023/6/1425In1952,AlfredHersheyandMarthaChasedidanexperimentwhichissosignificant,ithasbeennicknamedthe“Hershey-ChaseExperiment”.2023/6/1426In1952,AlfredHersheyandMarthaChasedidanexperimentwhichissosignificant,ithasbeennicknamedthe“Hershey-ChaseExperiment”.2023/6/1427TheMeselson-Stahlexperiment（1958）showedthatDNAisreplicatedsemi-conservativelyDNAsemi-conservativeduplication

3.DNA復(fù)制模型2023/6/1428DNA復(fù)制模型2023/6/1429

1961年，Nirenberg、Ochoa以及Khorana等幾組科學(xué)家的共同努力，破譯了RNA上編碼合成蛋白質(zhì)的遺傳密碼，證明DNA分子中的遺傳信息是以三聯(lián)密碼的形式貯存。

遺傳密碼在生物界具有通用性。2023/6/14302023/6/14312023/6/14324.

中心法則的建立

1958年，Crick提出了分子生物學(xué)的中心法則（centraldogma）。

中心法則是分子遺傳學(xué)基本理論體系。2023/6/14332023/6/1434

1970年，Temin和Baltimore從雞Rous肉瘤病毒(Roussarcomavirus，RSV)顆粒中發(fā)現(xiàn)了以RNA為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄酶，進(jìn)一步補(bǔ)充了遺傳信息傳遞的中心法則。

2023/6/14355.DNA序列分析技術(shù)：

雙脫氧末端終止法:1977年，劍橋大學(xué)SangerF等發(fā)明。

化學(xué)裂解法:

美國MaxamI和GilbertW發(fā)明。2023/6/14362023/6/1437對DNA片段的一級結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，導(dǎo)致一系列重大發(fā)現(xiàn)：4.從cDNA序列推導(dǎo)出蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)；

1.斷裂基因(splitgene)的發(fā)現(xiàn)，證明真核細(xì)胞的基因不是連續(xù)的DNA片段；2.前體mRNA分子的拼接，去除內(nèi)含子序列，連接成成熟mRNA；3.發(fā)現(xiàn)單基因遺傳病的基因結(jié)構(gòu)的變異；5.根據(jù)DNA序列合成基因，并與載體連接，使之在細(xì)菌中表達(dá)，合成活性蛋白質(zhì)，開創(chuàng)了基因工程。2023/6/14386.基因的人工合成

1978年體外首次成功地人工合成第一個完整基因。

直接證實(shí)了MendelG在1865年發(fā)現(xiàn)的遺傳因子(基因)的化學(xué)本質(zhì)，就是DNA分子。

DNA分子是多種多樣生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)。2023/6/14397.基因組研究的進(jìn)展

基因組（genome）:一個物種遺傳信息的總和?；蚪Y(jié)構(gòu)與功能研究已經(jīng)從單個基因發(fā)展到生物體整個基因組?；蚪M研究已從簡單的低等生物到真核生物，從多細(xì)胞生物到人類。2023/6/1440

1977年:Sanger測定了ΦX174DNA全部5375bp核苷酸序列；

1978年:Fiers等測出環(huán)狀SV40DNA全部5243bp核苷酸序列；1980年代:λ噬菌體DNA全部48502堿基對的序列被測出；一些小的病毒包括乙型肝炎病毒、艾滋病毒等基因組的全序列也陸續(xù)被測定;1996年底:大腸桿菌基因組DNA的全部序列長4×106堿基對；

1996年底:完成了真核生物酵母（Saccharomyceserevisiae）的基因組全序列測定；1998年底:長達(dá)100Mb的線蟲的基因組序列測定也已全部完成。這是第一個完成的多細(xì)胞生物體的全基因組序列測定。2023/6/1441

人類基因組計劃（humangenomeproject,HGP）

美國科學(xué)家、諾貝爾獎獲得者DulbeccoR于1986年在美國《Science》雜志上發(fā)表的短文中率先提出，并認(rèn)為這是加快癌癥研究進(jìn)程的一條有效途徑。主要的目標(biāo)是繪制遺傳連鎖圖、物理圖、轉(zhuǎn)錄圖，并完成人類基因組全部核苷酸序列測定。測出人體細(xì)胞中24條染色體上全部30億對核苷酸的序列，把所有人類基因都明確定位在染色體上，破譯人類的全部遺傳信息。

HGP是人類自然科學(xué)史上與曼哈頓原子彈計劃和阿波羅登月計劃相媲美的偉大科學(xué)工程。2023/6/1442

研究結(jié)果表明，人類基因數(shù)量僅有3萬個左右，比此前估計的要少得多。通過研究還發(fā)現(xiàn)男女可能存在巨大遺傳差異，男性染色體減數(shù)分裂的突變率是女性的兩倍。在已經(jīng)分析的序列中，找到很多與遺傳病有關(guān)的基因，包括乳腺癌、遺傳性耳聾、中風(fēng)、癲癇癥、糖尿病和各種骨骼異常的基因。2023/6/14438.基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究

1961年，Jacob和Monod提出操縱子學(xué)說，認(rèn)識了原核生物基因表達(dá)調(diào)控的一些規(guī)律。

80年代開始，人們逐步認(rèn)識到真核基因組結(jié)構(gòu)和調(diào)控的復(fù)雜性。真核基因的順式調(diào)控元件與反式作用因子、核酸與蛋白質(zhì)間的分子識別與相互作用。小分子反義RNA、核酶、siRNA等。2023/6/1444（二）蛋白質(zhì)分子生物學(xué)：

DNA→儲存生命活動的各種信息。

蛋白質(zhì)→生命活動的執(zhí)行者。蛋白質(zhì)的分子生物學(xué)主要研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能。2023/6/1445

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的研究進(jìn)展

1956年，Anfinsen和White根據(jù)對酶蛋白的變性和復(fù)性實(shí)驗(yàn)，提出蛋白質(zhì)的三維空間結(jié)構(gòu)是由其氨基酸序列來確定的。1958年，Ingram證明正常的血紅蛋白與鐮狀細(xì)胞溶血癥病人的血紅蛋白之間，在其亞基的肽鏈上僅有一個氨基酸殘基的差別。1969年，Weber開始應(yīng)用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量；20世紀(jì)60年代先后分析了血紅蛋白、核糖核酸酶A等一批蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。

中國科學(xué)家在1965年人工合成了牛胰島素；1973年又用1.8AX射線衍射分析法測定了牛胰島素的空間結(jié)構(gòu)。2023/6/1446

構(gòu)成生物體的每一個細(xì)胞的分裂與分化及其他各種生物學(xué)功能，均依賴于外界環(huán)境所產(chǎn)生的各種信號。在這些外源信號的刺激下，細(xì)胞可以將這些信號通過第二信使轉(zhuǎn)變成一系列的生物化學(xué)變化。

主要研究內(nèi)容：研究細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞間信息傳遞的分子基礎(chǔ)。闡明這些變化的分子機(jī)制，明確每一條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及參與該途徑的所有分子間的相互作用和調(diào)節(jié)方式。（三）細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究2023/6/1447

1965年又提出第二信使學(xué)說。

1977年，Ross等用重組實(shí)驗(yàn)證實(shí)G蛋白的存在和功能，將G蛋白與腺苷環(huán)化酶的作用聯(lián)系起來。

癌基因、抑癌基因和酪氨酸蛋白激酶的發(fā)現(xiàn)及其結(jié)構(gòu)與功能的深入研究，使得細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究有了很大的進(jìn)展。

1957年，Sutherland發(fā)現(xiàn)了cAMP。2023/6/14482023/6/1449三、分子生物學(xué)與生物技術(shù)2023/6/1450生物技術(shù)的定義：

按照美國生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)組織下的定義，生物技術(shù)(biotechnology)是指“利用細(xì)胞和分子過程來解決問題或制造產(chǎn)品的技術(shù)”。2023/6/1451古代生物技術(shù)

釀酒、制醋、制酪、面包發(fā)酵；人畜排泄物循環(huán)利用；動、植物雜交育種，嫁接等。2023/6/1452

20世紀(jì)以來，分子生物學(xué)的發(fā)展，產(chǎn)生了重組DNA技術(shù)，推動生物技術(shù)深入發(fā)展，而導(dǎo)致現(xiàn)代生物技術(shù)作為一門交叉學(xué)科的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)基因細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因動物和基因剔除動物的出現(xiàn)，是現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在生物技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用與發(fā)展。2023/6/1453現(xiàn)代生物技術(shù)主要包括兩個方面：基因工程和蛋白質(zhì)（酶）工程應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)和生物加工等學(xué)科的理論和技術(shù)，并相互交叉和滲透?，F(xiàn)代生物技術(shù)是分子生物學(xué)技術(shù)在生物加工過程中的應(yīng)用。2023/6/14541972年，SV40病毒DNA片段轉(zhuǎn)化大腸桿菌，使本來在真核細(xì)胞中合成的蛋白質(zhì)能在細(xì)菌中合成，打破了種屬界限，開創(chuàng)了利用基因工程技術(shù)在原核細(xì)胞中表達(dá)真核基因產(chǎn)物的時代。人工合成的生長激素釋放抑制因子14肽的DNA片段與質(zhì)粒重組，在大腸桿菌中合成得到這種14肽。

1978年，人生長激素191肽在大腸桿菌中表達(dá)成功。

1979年，人工合成的人胰島素基因經(jīng)過重組后導(dǎo)入大腸桿菌，在大腸桿菌中合成了人胰島素。運(yùn)用基因定向誘變技術(shù)和重組DNA技術(shù)改造酶或蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，使其具有更高的效能和更好的穩(wěn)定性，以滿足人類社會的需求。生物技術(shù)進(jìn)展2023/6/1455

用轉(zhuǎn)基因動物獲取治療人類疾病的重要蛋白質(zhì)。如，導(dǎo)入了凝血因子Ⅸ基因的轉(zhuǎn)基因綿羊分泌的乳汁中含有豐富的凝血因子Ⅸ，能有效地用于血友病的治療。

轉(zhuǎn)基因動物和基因剔除動物2023/6/1456

在轉(zhuǎn)基因植物方面取得重大進(jìn)展，比普通西紅柿保鮮時間更長的轉(zhuǎn)基因西紅柿投放市場。轉(zhuǎn)基因玉米、轉(zhuǎn)基因大豆相繼投入商品生產(chǎn)。我國科學(xué)家將蛋白酶抑制劑基因轉(zhuǎn)入棉花，獲得抗棉鈴蟲的棉花株。

轉(zhuǎn)基因植物和轉(zhuǎn)基因食品2023/6/1457四、分子生物學(xué)與醫(yī)藥學(xué)2023/6/1458

1.從機(jī)體表型來認(rèn)識疾病,即根據(jù)現(xiàn)象和檢查所獲知的癥狀與體征。

2.從組織細(xì)胞的病理、生理變化來分析和診斷疾病。使人類積累了十分豐富的醫(yī)學(xué)資料。但都不能從本質(zhì)上真正認(rèn)識疾病發(fā)生的根本原因，更不能從根本上治愈疾病和闡明疾病的發(fā)病機(jī)制。人類對疾病的認(rèn)識：2023/6/1459

現(xiàn)代分子生物學(xué)已經(jīng)對醫(yī)學(xué)的各個領(lǐng)域產(chǎn)生了全面而深刻的影響，并逐步形成了一系列以分子冠名的交叉學(xué)科。

如分子遺傳學(xué)、分子免疫學(xué)、分子病理學(xué)、分子血液學(xué)、分子腫瘤學(xué)、分子病毒學(xué)、分子流行病學(xué)等。

由于生命本質(zhì)的高度一致性，使得這些學(xué)科可以使用同一套理論、同一套技術(shù)，來解釋和研究不同的病理、生理現(xiàn)象，甚至治療不同的疾病。2023/6/1460

由于分子生物學(xué)的發(fā)展和滲透，各種生理和病理現(xiàn)象都可能從基因水平找到答案。

腫瘤發(fā)生與癌基因和腫瘤抑制基因。

表明生物機(jī)體各種各樣的生命現(xiàn)象及生理和病理表現(xiàn)，幾乎無一不與基因有關(guān)。

藥物的耐藥性與抗藥基因。2023/6/1461（一）分子生物學(xué)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)是整個醫(yī)學(xué)科學(xué)的基石，分子生物學(xué)不僅是生命科學(xué)的前沿，也是整個基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的前沿。今后總的發(fā)展趨勢仍然是分子生物學(xué)向醫(yī)學(xué)，特別是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)廣泛交叉、滲透和影響。2023/6/1462

1.對人的生理功能和疾病機(jī)制的研究,已由整體水平、器官水平進(jìn)入到細(xì)胞和分子水平；對生命的了解，由表面現(xiàn)象觀察進(jìn)入了本質(zhì)的探討。2023/6/1463

2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)中不斷出現(xiàn)新的邊緣學(xué)科，如分子生理學(xué)、分子藥理學(xué)、分子病理學(xué)、分子遺傳學(xué)、分子免疫學(xué)、分子病毒學(xué)、分子腫瘤學(xué)、分子神經(jīng)生物學(xué)等等。

2023/6/14643.傳統(tǒng)上按“形態(tài)”和“機(jī)能”來進(jìn)行基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)各個學(xué)科劃分的界限已日益模糊,出現(xiàn)了各學(xué)科在分子水平上進(jìn)行整合的趨勢。2023/6/1465

4.開始改變傳統(tǒng)生物學(xué)的研究方法和策略，形成了直接從基因水平入手,研究基因型和表型的相互關(guān)系。2023/6/1466（二）分子生物學(xué)在病理學(xué)中的應(yīng)用

由于分子生物學(xué)向病理學(xué)的滲透,出現(xiàn)“分子病理學(xué)”這樣一個新學(xué)科。

分子生物學(xué)理論和技術(shù)徹底改變了病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的面貌,開始從基因水平來進(jìn)行疾病診斷。應(yīng)用于分子病理學(xué)的基因檢測技術(shù)，揭示了疾病發(fā)生的分子事件。2023/6/1467（三）基因診斷

由于重組DNA技術(shù)的問世,人們對于許多疾病的認(rèn)識,已經(jīng)深入到基因水平。一種從基因水平對疾病進(jìn)行診斷的新技術(shù)──基因診斷技術(shù)得以誕生和發(fā)展。

基因診斷：在DNA水平或RNA水平,應(yīng)用核酸分子雜交技術(shù)、限制性內(nèi)切酶長度多態(tài)性（RFLP）連鎖分析、PCR技術(shù)、DNA序列分析技術(shù)以及近年發(fā)展起來的DNA芯片技術(shù)等,對人類疾病進(jìn)行診斷。2023/6/1468

★基因診斷技術(shù)——核酸分子雜交：Southern印跡雜交技術(shù)：1975年，SouthernEM發(fā)明。從生物體的細(xì)胞中提取基因組DNA，并從中鑒別出某一特異的核苷酸序列。

Northern印跡雜交技術(shù)：1977年AlwineJC等發(fā)明。用于樣品中某種mRNA分子的定量，分子量大小的測定。原理：RNA分子在變性瓊脂糖凝膠中電泳，按分子量大小不同而相互分離，其原理與Southern轉(zhuǎn)移技術(shù)的方法類似。細(xì)胞原位雜交技術(shù)：1969年，Pardue等建立。2023/6/1469★基因診斷技術(shù)——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)：1985年，MullisK首創(chuàng)。體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過程，進(jìn)行體外基因擴(kuò)增。2023/6/1470★基因診斷技術(shù)——基因芯片（Genechips）：

基因芯片技術(shù):將大量探針固定于支持物上，與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交?？梢淮涡詫悠分写罅啃蛄羞M(jìn)行檢測和分析。解決了傳統(tǒng)核酸雜交技術(shù)操作繁雜、檢測效率低的問題。

通過設(shè)計不同的探針陣列和使用特定的分析方法，使該技術(shù)具有多種不同的應(yīng)用價值。如基因表達(dá)譜分析、基因突變檢測、多態(tài)性分析、基因診斷等。2023/6/1471疊加圖：綠色代表下調(diào)；紅色代表上調(diào)；黃色無差異。正常樣品Cy3標(biāo)記待測樣品Cy5標(biāo)記疊加石奕武，胡維新等：多發(fā)性骨髓瘤的基因表達(dá)譜分析，湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2003，28（3）：201－2052023/6/1472★基因診斷的其它技術(shù)：DNA序列分析技術(shù)（DNAsequencing）；限制性內(nèi)切酶長度多態(tài)性（RFLP）；PCR-SSCP