原發(fā)性血小板增多癥血小板更新率與血栓形成的關(guān)系

原發(fā)性血小板增多癥血小板更新率與血栓形成的關(guān)系【摘要】為了對原發(fā)性血小板增多癥血小板更新率變化與血栓形成的關(guān)系進行分析，根據(jù)有無血栓癥狀將26例原發(fā)性血小板增多癥患者分成兩組，應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測網(wǎng)織血小板，選擇26名健康獻血者作為對照。應(yīng)用羥基脲加α-干擾素對血栓病例進行治療。結(jié)果表明：有血栓ET病例的RP百分數(shù)比無癥狀病例的和健康對照的顯著增高；RP百分數(shù)在無血栓病例和健康對照中無差異。有血栓病例的RP絕對值比無血栓病例顯著升高〖×109/Lvs×109/L］。有血栓ET病例接受羥基脲加α-干擾素治療后，RP百分數(shù)和絕對數(shù)均明顯降低。結(jié)論：ET病例形成血栓時，與無血栓病例和健康對照相比，其RP百分數(shù)和絕對數(shù)均顯著升高，有血栓的ET患者用羥基脲加α-干擾素治療療效良好。

【關(guān)鍵詞】原發(fā)性血小板增多癥

CorrelationofThrombosiswithIncreasedPlateletTurnoverinEssentialThrombocythemia

AbstractThisstudywasaimedtoinvestigatethecorrelationofthrombosiswithincreasedplateletturnoverinessentialthrombocythemia.Accordingtopresenceorabscenceofthrombosis，26patientswithETweredividedintotwogroups.Reticulatedplatelets(RP)weremeasuredbyflowcytometryand26healthyvolunteerswereselectedashealthycontrols.TheETpatientswiththrombosisweretreatedwithhydroxyureaandinterferon-α.TheresultsdemonstratedthattheETpatientswiththromboticeventshadasignificantlyhigherRPpercentage(%±%)thanthatinbothasymptomaticETpatients(%±%)andnormalcontrol(%±%)，(P＜)；theRPpercentageinasymptomaticETpatientsdidnotdiffersignificantlyfromcontrols.ETpatientswiththrombosisalsohadasignificantlyhigherabsoluteRP(ARP)countthanthoseinETpatientswithoutthrombosis〖×109/Lvs×109/L］.TheETpatientswiththrombosisweresuccessfullytreatedwithhydroxyureaplusINF-α，theRPpercentageandARPcountsobviouslyreduced.Inconclusion，whentheETpatientshadthromboticevents，thosepatientshadasignificantlyhigherRPpercentageandARPcomparedwithpatientswithoutthrombosisandhealthycontrols.TheETpatientswiththrombosisweresuccessfullytreatedwithhydroxyureaplusINF-α.

Keywordsessentialthrombocythemia；thrombosis；plateletturnover；reticulatedplatelet

原發(fā)性血小板增多癥屬于骨髓增殖性疾病，血小板持續(xù)升高，有反復(fù)自發(fā)性出血和血栓并發(fā)癥，被認為與異常的血小板功能和(或)升高的循環(huán)血小板數(shù)有關(guān)。然而，在外周血血小板計數(shù)升高情形下，針對血栓和出血并發(fā)癥的特殊危險因素相對地說人們并不明確。目前還沒有簡單可行的檢測血小板在體內(nèi)活性的方法。檢測網(wǎng)織血小板是一種快速而簡單的計算血小板更換率的途徑。血小板更換率為ET患者發(fā)生血栓時提供了有價值的臨床信息。為此，我們探討了RP百分值升高是否與ET患者血栓形成相關(guān)。

材料和方法

研究對象

原發(fā)性血小板增多癥患者的診斷均符合診斷標準［1］，共26例，女17，男9，試驗前均未接受過化療、生長因子或阿斯匹林等藥物治療。所采用的血栓形成確認方式有：紅斑性肢痛病的基本癥狀、血管造影術(shù)、超聲波及核磁共振檢查等。選擇26例健康獻血者作健康對照。

血樣的準備

所有樣本均在采取治療措施前采集。26例ET中9例血樣是在血栓發(fā)生時或其后24小時內(nèi)采集的；17例血樣是在血栓癥狀出現(xiàn)前采集的，其中7例在接下來的16天內(nèi)出現(xiàn)了血栓并發(fā)癥。對16例發(fā)生血栓的ET患者進行了進一步的研究。采集3ml靜脈血，用EDTA-Na2抗凝。用MEK-6318血細胞自動分析儀進行血小板計數(shù)。血小板樣本的制備：血樣離心得富含血小板血漿，用緩沖液洗滌后，1%多聚甲醛4℃固定2小時，然后再洗滌配成200×109/L懸液。

標記及測定［2］

將50μl稀釋到100×109/L血小板懸液與450μl噻唑橙混勻，22℃避光孵育1小時；PBS作空白對照，流式細胞術(shù)測定熒光強度，吸收波488nm，激發(fā)波530nm，測得直方圖，按空白對照設(shè)定標尺，陽性率設(shè)為1%，同一標尺用于TO染色的病例標本，結(jié)果即為RP百分數(shù)。取50μl200×109/L血小板懸液與10μlCD41-FITC單克隆抗體混勻，4℃避光孵育25分鐘，用FACScalibur流式細胞儀測定陽性細胞率。RP的絕對數(shù)是由RP百分數(shù)×BPC得出的。

統(tǒng)計分析

所測數(shù)據(jù)以x±SD表示，用軟件SPSS進行統(tǒng)計學(xué)計算。

結(jié)果

網(wǎng)織血小板對比檢測

檢測的結(jié)果詳見表1。形成血栓的病例有16例，占615%，平均年齡55±16歲；無血栓病例10例，占%，平均年齡為51±23歲。有無血栓病例間的年齡和性別均無顯著性差異。有血栓癥狀ET病例的RP百分數(shù)比無癥狀病例者和健康對照者顯著增高；無血栓病例和健康對照中RP百分數(shù)無差異。而且血栓病例的ARP比無血栓病例顯著升高〖×109/L］。16例血栓病例RP百分數(shù)均超過了6%。經(jīng)治療后16例血栓病例中3例RP百分數(shù)超過6%，隨后又有血栓癥狀出現(xiàn)，剩余13例RP百分數(shù)均低于6%，血栓癥狀逐漸緩解；而無血栓癥狀10例都沒有超過6%。Table1.Comparisonofreticulatedplaleletsbetweendiffe-rentgroups(略)

治療效果

結(jié)果見表2。16例血栓ET在隨后的6-52周內(nèi)，均接受了溶栓及羥基脲加α-干擾素治療［3，4］，取得了明顯的效果，RP百分數(shù)從%降到%，ARP從×109/L降到×109/L，BPC從×109/L降到×109/L(P＜），Rtc從%降到%。經(jīng)過治療后，其中13例患者的RP百分數(shù)范圍是%-%，低于6%的危險水平，他們的紅斑性肢痛癥逐漸得到緩解，并且在隨后的一段時期內(nèi)沒有形成血栓。另外，3例患者的RP百分數(shù)是65%，%，%，均高于6%的危險水平，在隨后又有血栓形成，但他們的紅斑性肢痛癥較之前有所緩解。Table2.ChangesofBPC，RP，ARPandRtcbeforeandaftertreatment

討論

原發(fā)性血小板增多癥是發(fā)病率最低的MPD，起病緩慢，在臨床上不易與真性紅細胞增多癥和慢性粒細胞白血病相鑒別，由于血小板計數(shù)過高且功能異常，易發(fā)生栓塞和出血以致危及生命。RP是骨髓釋放出的新生血小板，其胞漿中含有RNA，可以被TO熒光染色?；谶@一點，應(yīng)用流式細胞術(shù)對ET患者的RP進行檢測。所有有形成血栓的ET病例的RP百分數(shù)和ARP比相應(yīng)無血栓病例顯著升高，揭示了RP百分數(shù)和ARP的升高與ET血栓形成密切相關(guān)。并且，在RP百分數(shù)＞6%時ET病例全部出現(xiàn)血栓并發(fā)癥；而在RP百分數(shù)＜6時，即使ARP比健康對照顯著增加，但也沒有ET病例發(fā)生血栓癥狀。這進一步揭示出RP百分數(shù)的變化對ET發(fā)生血栓危險性會產(chǎn)生更直接的影響。

本研究還發(fā)現(xiàn)無癥狀ET病例RP百分數(shù)在正常范圍內(nèi)，這與先前報道一致［5］。這些數(shù)據(jù)顯示BPC升高時血小板更新率是受網(wǎng)織血小板影響的，而在原發(fā)性血小板減少性紫癜患者中RP百分數(shù)升高同樣影響了血小板更新率的升高［6］。有學(xué)者認為，血栓病例RP值升高使得血小板更新率升高是由于血小板進入大動脈或較小但更廣泛的小動脈形成血凝塊造成了丟失所致［7］。也可能是，RP升高引起血小板生理功能異常，從而導(dǎo)致血小板黏附到內(nèi)皮細胞、白細胞或其他血小板上，沒有形成真正的血凝塊，這些血小板就從外周血循環(huán)中被移除［7］。此外，在有癥狀深部靜脈血栓或動脈血栓病例BPC正常時并未發(fā)現(xiàn)RP百分數(shù)的升高［7］。雖然如此，但是對于RP百分數(shù)升高與血栓形成相關(guān)的另一種可能解釋是：動脈血小板沉積物分布相當廣泛，導(dǎo)致血小板更換率升高。從病理生理學(xué)角度看，血栓形成傾向的ET病例有潛在的、與較高血小板更新率相關(guān)的血小板病理改變，而血小板更新率升高的ET病例有潛在的形成血栓的危險。

對于合并血栓的ET病例，在使用溶栓藥物及羥基脲誘導(dǎo)后，應(yīng)用α-干擾素進行了維持治療，取得了良好效果，所有病例的RP百分數(shù)和ARP均降低了，伴有紅斑性肢痛癥癥狀的改善，近期也未形成血栓。由此看來，RP百分數(shù)和ARP的這種改變能夠得到適當抗血小板治療的糾正。RP檢測可以提供一種非侵入性、簡單可行的評測血小板動力學(xué)的手段，從而監(jiān)視ET的治療反應(yīng)。

總之，當ET患者沒有血栓并發(fā)癥時，RP百分數(shù)會是正常的；無癥狀病例血栓形成前期和后來發(fā)展形成血栓時，RP百分數(shù)和ARP都是升高的，這與血小板更換率的升高一致。不過，還需要更大標本量的前瞻性研究，對無癥狀病例進行連續(xù)RP檢測，以確定是否能夠在RP百分數(shù)升高和血栓癥狀產(chǎn)生之間獲得足夠的時間，以便于采取較早的、可能更成功的醫(yī)療干涉。

【參考文獻】

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2RichardsEM，BaglinTP.Quantitationofreticulatedplatelets:methodologyandclinicalapplication.BrJHaematol，1995；91:445-451

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4楊崇禮，盧學(xué)春，李孝義.原發(fā)性血小板增多癥的治療.中華血液學(xué)雜志.2001；22:502-503

5van-GenderenPJ，MichielsJJ，van-StrikR，etal.Plateletconsumptioninthrombocythemiacomplicatedbyerythromelalgia:reversalbyaspirin.ThrombHaemost，1995；73:210-214

6RompKG，PetersWP，HofmannM.Reticulatedplateletcountsi