動物實驗研究方法及其在中醫(yī)研究中的應用

大家上過“實驗動物學”沒有？動物實驗是近代生命科學實驗發(fā)展起來的重要手段，生命科學的許多重大發(fā)現(xiàn)和突破均建立在動物實驗之上。

本文檔共63頁；當前第1頁；編輯于星期一\13點11分美國心理學會動物研究指導總則“動物行為研究者應努力促進對基本行為原理的理解和/或為提高人類的健康和幸福作貢獻。為達到這些目標，研究者要保證動物的權利和人道地對待它們。雖然有法律和規(guī)定，但一只動物的即時保護則有賴于科學家的個人良知?！保˙.H.坎特威茨等.實驗心理學,116）美國心理學會還提供了學生研究者的指導原則。總體上，“當采用動物被試時，應精心照料并盡可能減少它們的痛苦和不適?！保˙.H.坎特威茨等.實驗心理學,124）本文檔共63頁；當前第2頁；編輯于星期一\13點11分中醫(yī)能不能采用實驗動物？突出的問題是四診困難、情志難以把握，大家有什么看法。有利的因素、不利的因素分別有哪些？有人懷疑心理學研究的價值，責問政府何以資助小白鼠走迷津。這是他們對于心理學研究的期望不恰當，而不在于心理學研究的本身。（B.H.坎特威茨等.實驗心理學,24）有人通過幾年的研究發(fā)現(xiàn)，盡管不同地區(qū)山雀的“方言”不同，但在同一地區(qū)生活的山雀所發(fā)出的入侵警報模式確可以穩(wěn)定地延續(xù)幾代。（B.H.坎特威茨等.實驗心理學,35）雄獅實驗。本文檔共63頁；當前第3頁；編輯于星期一\13點11分動物實驗的重要性（教材第二段）：動物實驗是實驗中醫(yī)學的重要組成部分和重要的研究方法和手段，無論對中醫(yī)學數(shù)千年來所積累的疾病認識、防治豐富經(jīng)驗進行驗證和總結(jié)，對歷代醫(yī)家理法方藥的研究，對中醫(yī)學理論的研究和發(fā)展，還是對當前中醫(yī)藥學各個學科的教學、科研，對新的治療方法（包括應用藥物和非藥物療法）的發(fā)展，乃至對新的中醫(yī)藥學理論體系的創(chuàng)立，等等，都是不可缺少的。本文檔共63頁；當前第4頁；編輯于星期一\13點11分近幾十年來，實驗動物學已經(jīng)作為一門獨立的學科迅速地發(fā)展起來。實驗動物學對實驗動物的飼養(yǎng)、繁殖、馴化、監(jiān)測和開發(fā)應用，以及動物實驗的規(guī)范和要求形成了一整套完整的理論和方法，這些同樣適用于中醫(yī)動物實驗。同時，中醫(yī)的動物實驗又有其自身特點，其研究、發(fā)展還將豐富實驗動物學的內(nèi)容。第一節(jié)動物實驗的主要要求和特點本文檔共63頁；當前第5頁；編輯于星期一\13點11分一、實驗動物的選擇實驗動物的定義：實驗動物是指以實驗研究為目的，在一定的環(huán)境條件控制下，經(jīng)過培養(yǎng)馴化，具有明確的生物學特性和清楚的遺傳和微生物背景的動物。本文檔共63頁；當前第6頁；編輯于星期一\13點11分圖1小鼠圖2裸小鼠圖4裸大鼠圖5大鼠圖6白兔圖7兔的飼養(yǎng)圖8比格犬及其飼養(yǎng)圖9馬及其飼養(yǎng)常用實驗動物本文檔共63頁；當前第7頁；編輯于星期一\13點11分實驗動物種類繁多，在進行實驗時，應根據(jù)課題的需要和動物的特性加以選擇，使研究目的與動物的種屬、特性和個體差異相吻合，才能保證研究工作的順利進行。不同的科學實驗要求選擇和開發(fā)最適宜的實驗動物。正確選擇實驗動物，實驗設計周密詳盡，可以節(jié)省人力、動物和時間，以最小的代價，最大限度地獲得可靠的研究結(jié)果。否則，不僅會造成不必要的浪費，嚴重的還會影響到實驗結(jié)果的判斷，甚至導致實驗的失敗。因此，選擇和開發(fā)實驗動物是動物實驗的首要環(huán)節(jié)，至關重要，應予以足夠的重視。在醫(yī)學研究中首先要從研究目的和實驗要求來選擇實驗動物，其次要考慮是否容易獲得、是否經(jīng)濟及容易飼養(yǎng)等因素。本文檔共63頁；當前第8頁；編輯于星期一\13點11分三個基本要求：實驗動物通常應該具備個體間的均一性、遺傳性能的穩(wěn)定性和比較容易獲得這三個基本要求。具體要求如下：1．盡量選用機能、代謝、結(jié)構(gòu)及其它方面機能與人相似的實驗動物一般來說，動物的進化階段愈高，機能、代謝、結(jié)構(gòu)愈復雜，也就愈接近人類。2．選用標準化的實驗動物標準化實驗動物指遺傳背景明確、飼養(yǎng)環(huán)境與動物體內(nèi)的微生物得到控制、符合一定標準的實驗動物。本文檔共63頁；當前第9頁；編輯于星期一\13點11分只有選用標準化實驗動物，而且實驗過程也在標準環(huán)境中飼養(yǎng)的動物，在實驗中才能排除因動物雜交、遺傳上的不均質(zhì)及環(huán)境條件的變化，所引起的個體反應不一致，排除因動物攜帶細菌、病毒、寄生蟲和潛在疾病的影響，才能便于分析實驗結(jié)果，減少實驗誤差，提高科學性，準確性，把所獲得的結(jié)果與同類研究進行比較、交流，并得到承認。在實驗研究中應避免使用隨意交配繁殖的動物，而應根據(jù)研究目的選擇用遺傳學控制的方法培育出來的近交系、突變系、系統(tǒng)雜交或封閉群動物。同時應對實驗動物進行微生物控制，發(fā)展使用無菌動物、已知菌動物或無特定病原體（SPF）動物。本文檔共63頁；當前第10頁；編輯于星期一\13點11分

實驗動物的分類按遺傳控制分類：（1）近交系，即純系動物：其動物遺傳的均質(zhì)性保證了實驗反應的穩(wěn)定性。（2）封閉群動物：能較好地代表自然群體的遺傳特性。（3）雜交一代動物（F1）：在一定程度上，兼有近交系和封閉群的特點。（4）突變動物：往往具有鮮明的人類疾病模型特征。本文檔共63頁；當前第11頁；編輯于星期一\13點11分

按微生物控制的程度，我國將實驗動物分為四個等級：（1）普通級動物：一般為教學示范用。（2）清潔級動物：國內(nèi)科研工作要求的標準動物，適合于大多數(shù)科研課題。（3）無特定病原體動物（SPF動物）：國際標準實驗動物。（4）無菌動物（CF動物）和悉生動物：僅在特殊課題需要時使用。本文檔共63頁；當前第12頁；編輯于星期一\13點11分圖10動物實驗中心圖11清潔級準備室圖12清潔級走廊圖13小鼠飼養(yǎng)室本文檔共63頁；當前第13頁；編輯于星期一\13點11分3．選用解剖、生理特點符合實驗目的要求的實驗動物催吐實驗——適宜選用猴、貓，不選用大小鼠，因為小/大鼠無嘔吐反應。膽囊功能實驗——不選用大鼠，因為大鼠無膽囊。發(fā)汗中藥的研究——不能選用小鼠（無汗腺）。慢性支氣管炎的實驗——不能選用大小鼠，因為小/大鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達。計劃生育研究——常選用小鼠和大鼠。因繁殖力強，性周期和妊娠期短，生長快。如常用小鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等實驗應用上的首選動物。本文檔共63頁；當前第14頁；編輯于星期一\13點11分心血管病研究——豬(辛克萊小型豬/廣西巴馬小型豬/歐米尼豬)。豬冠狀動脈，在解剖學、血液動力學上與人類相似。對高膽固醇食物的反應與人一樣，很容易出現(xiàn)動脈粥樣硬化的典型病灶。實驗外科學研究——犬(比格犬/華北犬/西北犬/狼犬)。內(nèi)臟與人相似，比例近似。臨床醫(yī)生在研究新的手術或麻醉方法時往往選用犬來做動物實驗，取得經(jīng)驗和技巧后用于臨床。如心血管外科，腦外科，斷肢再植，器官和組織移植等。行為學和精神病及神經(jīng)生物學研究——獼猴。制造和鑒定脊髓灰質(zhì)炎疫苗——獼猴是唯一的實驗動物。本文檔共63頁；當前第15頁；編輯于星期一\13點11分4．選用不同種屬品系實驗動物某些特殊反應，使適合于不同研究目的的需要腫瘤研究——常選用近交系小鼠，如AKR小鼠白血病發(fā)生率可達90％；C3H小鼠乳腺癌發(fā)病率達97％，而不選用C57BL等小鼠，因其乳腺癌發(fā)病率極低(＜5％)。發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實驗——適宜選用兔做實驗，因?qū)俸銣貏游?，對致熱物質(zhì)反應敏感。高血壓病研究——選用SHR大鼠，因自發(fā)性高血壓，心血管疾病發(fā)病率高，對降壓藥物有反應。耳科學研究——豚鼠聽神經(jīng)對聲波特別是700～2000Hz的純音最敏感，常用于聽覺和內(nèi)耳疾病的研究。免疫學研究——豚鼠易引起變態(tài)反應，產(chǎn)生大量補體，是過敏性休克和變態(tài)反應研究的首選動物。本文檔共63頁；當前第16頁；編輯于星期一\13點11分5．實驗動物種屬、品系的選擇如果實驗結(jié)論只針對某一品系則使用一個品系。如果實驗結(jié)論針對整個物種在內(nèi)的一般性研究則使用多個不同來源的品種、品系。一般對多物種進行實驗時，應先選小型動物，再推廣到大型物種；要求只能建立在對多個物種進行實驗的基礎上，才能推廣到人類，也稱動物實驗外推。常用順序時小鼠、大鼠、兔、犬、猴。本文檔共63頁；當前第17頁；編輯于星期一\13點11分6．遵守動物實驗的一般規(guī)則

（1）年齡、體重應根據(jù)實驗目的來選擇適齡動物。一般實驗均用成年動物進行；幼齡動物一般較成年動物敏感；老年動物的代謝活動及各種機能低下，反應遲鈍，除了作老年醫(yī)學研究外，其它專業(yè)很少應用。同一實驗所選動物年齡應一致，體重大致相近，一般不應相差10%。本文檔共63頁；當前第18頁；編輯于星期一\13點11分（2）性別不同性別動物對同一實驗處理（如藥物、刺激等）的感受性常有差異，在實驗研究中如無特殊要求，一般宜選用雌雄各半做實驗。（3）生理狀態(tài)與健康情況動物的不同生理狀態(tài)如懷孕、授乳時對外界刺激的反應常有所改變，在一般研究中應從實驗組中刪除；必須選用健康動物進行實驗。（4）實驗季節(jié)和晝夜過程不同季節(jié)和不同晝夜，動物機體反應性會有一定改變，在實驗動物選擇中也應予以注意。本文檔共63頁；當前第19頁；編輯于星期一\13點11分（5）實驗的重復與肯定由于不同種動物有不同的功能和代謝特點，所以在肯定一個實驗結(jié)果時，往往采用兩種以上動物進行比較觀察，尤其將動物實驗結(jié)果推斷到人的實驗時應該慎重。例如，所選的實驗動物如一種為嚙齒類動物，另一種應該為非嚙齒類動物。常用的序列是小鼠、大鼠、狗或猴。二、中醫(yī)動物實驗研究的注意點實驗動物在中醫(yī)實驗的應用和發(fā)展中，建議注意以下幾個方面。1．中醫(yī)動物實驗研究應以中醫(yī)理論為指導2．中醫(yī)動物實驗研究應從中醫(yī)臨床出發(fā)3．中醫(yī)動物實驗研究應突出中醫(yī)治療原則本文檔共63頁；當前第20頁；編輯于星期一\13點11分一、證動物模型的開創(chuàng)和發(fā)展自本世紀60年代以來，在中醫(yī)證的動物模型制作與研究方面做了大量的研究工作。迄今證的動物模型逾150多種。其中包括各種虛證（陰虛、陽虛、氣虛、血虛、各臟腑虛）、血瘀證、肝郁證、寒證、熱證、溫病衛(wèi)氣營血諸證、里實證等模型，等等。實驗動物疾病模型應用于中醫(yī)臨床研究，為中醫(yī)診療方法研究提供了大量的實驗模型，為臨床理論的深化與新理論的形成提供了便利。教材上的事例很好。第二節(jié)中醫(yī)動物實驗研究的主要內(nèi)容本文檔共63頁；當前第21頁；編輯于星期一\13點11分二、以動物實驗驗證臨床治療方法，探求其作用機理臨床治療方法的動物實驗研究主要包括以下幾方面（以下的例子很好，可以選擇性介紹）：1．研究經(jīng)方的作用機理（如姜廷良的桂枝湯研究）2．研究名老中醫(yī)經(jīng)驗療法的作用機理（如二仙湯的研究）3．應用于新藥開發(fā)（如譚日強肝達康片的研制）本文檔共63頁；當前第22頁；編輯于星期一\13點11分三、中醫(yī)基礎理論的研究及其在教學上的應用四、其它研究與應用動物實驗在中醫(yī)研究中已滲入到各個領域。除以上所介紹的外，較多的應用領域有中藥藥理（包括性味歸經(jīng)）的實驗研究、中草藥毒理的動物實驗、各類常用中草藥有效成份的藥理、毒理和代謝，中草藥原料開發(fā)、保健品和化妝品等開發(fā)，以及對其安全性評價等等。本文檔共63頁；當前第23頁；編輯于星期一\13點11分從生物學觀點看，人與動物既有特殊性也有其共同，正因為人與動物存在著共同性，所以動物實驗結(jié)果對人是有參考意義的，而且實驗動物可以根據(jù)研究目的需要進行各種實驗，容許嚴格控制實驗條件，可以重復實驗，進行多指標觀察與損害性觀察。因此利用動物實驗，結(jié)合臨床觀察，已成為中醫(yī)藥研究必要手段。由于辨證為中醫(yī)的特點之一，因此動物證的研究被列為研究中醫(yī)的突破口，用動物模擬“證”的實驗研究。然而，復制中醫(yī)“證”的動物模型工作復雜、難度大、任務艱巨。盡管如此，近年來在廣大中、西醫(yī)和中西醫(yī)結(jié)合科研工作者的努力下，研制出了大量的動物模型。其復制方法主要有3類：第三節(jié)證動物模型研究范例本文檔共63頁；當前第24頁；編輯于星期一\13點11分1．依據(jù)中醫(yī)基礎理論。2．依據(jù)西醫(yī)臨床、藥學知識。3．根據(jù)科研成果。教材介紹了三個范例。一、寒涼藥、溫熱藥所致寒證、熱證動物模型二、乙酰苯肼致血虛證動物模型三、風寒濕邪家兔痹證模型問題是，常用實驗動物，大鼠、小鼠能不能實現(xiàn)四診，能不能實現(xiàn)基于四診的辨證，以及辨證論治？本文檔共63頁；當前第25頁；編輯于星期一\13點11分小鼠辨證論治方法的由來和進展方肇勤潘志強陳曉盧文麗付曉伶李海燕陳德溯侯俐廖明娟湯偉昌管冬元吳中華許敏闞衛(wèi)兵許家佗上海中醫(yī)藥大學

本文檔共63頁；當前第26頁；編輯于星期一\13點11分

引言

辨證論治是中醫(yī)學的優(yōu)勢。在新形式下，如何深入揭示辨證論治的機制、提高辨證論治的療效，是中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合基礎學科的重要研究方向。辨證論治的基礎研究主要借助于小鼠等實驗動物。為了滿足研究的需要，國內(nèi)學術界業(yè)已發(fā)展出200余種證候的動物模型，集中在常見的氣、血、陰、陽虛證和實熱、血瘀等實證。在很大程度上彌補了辨證論治研究動物模型的欠缺，促進了辨證論治基礎研究與發(fā)展。但是迄今為止，尚缺乏小鼠四診和基于四診的辨證論治方法和技術，這成為新時期中醫(yī)藥基礎研究的瓶頸。本文檔共63頁；當前第27頁；編輯于星期一\13點11分

那么，為什么要實現(xiàn)基于四診的小鼠辨證？這是因為一些學術問題已凸現(xiàn)出來：（1）證候是體內(nèi)多系統(tǒng)、組織、細胞、分子等不同層次生物學變化外在的綜合反映。由于缺少小鼠四診方法，以往有關小鼠證候判斷，主要依據(jù)實驗室檢測數(shù)據(jù)，或治療反證，一直未能建立起證候與實驗室指標一一對應的聯(lián)系。而大量的研究表明，目前一些常用實驗室指標還不能代表證候。（2）實驗室檢測，大多要求損傷、處死動物，如此難以動態(tài)觀察證候的自然演變和辨證論治療效。（3）實驗室檢測，大多成本高、檢測周期長，不利于辨證論治基礎研究和發(fā)展的高效、批量要求。

本文檔共63頁；當前第28頁；編輯于星期一\13點11分

（4）大量的證候動物模型、實驗室檢測和方證論治一再證明，實驗用大鼠、小鼠是存在證候的。（5）我們長期的動物實驗，一再觀察到實驗動物大鼠、小鼠存在體質(zhì)差異，以及同病異證、異病同證的現(xiàn)象，不加辨證的單方治療，療效往往受到限制，甚至會產(chǎn)生副作用。因此，我們提出，實現(xiàn)小鼠基于四診的辨證是學術發(fā)展的必然趨勢和要求。那么，如何實現(xiàn)小鼠的四診呢？比如問診如何問？中醫(yī)四診重視面色和舌診，小鼠頭面布滿被毛，舌又不會配合地伸出來，如何望診？小鼠如何把脈？一些學者還一直對中醫(yī)四診有顧慮，不能量化，小鼠四診能否量化？對此我們開展了長期的探索和研究，結(jié)果如下：本文檔共63頁；當前第29頁；編輯于星期一\13點11分

圖1正常與晚期荷瘤小鼠面容圖2正常小鼠圖3腫瘤壓迫張口呼吸小鼠

一、疾病小鼠存在證侯及其演變本文檔共63頁；當前第30頁；編輯于星期一\13點11分

圖4早期荷瘤昆明種小鼠圖5中期荷瘤氣虛小鼠

圖6中晚期荷瘤氣虛小鼠圖7中晚期荷瘤陰虛小鼠圖8晚期荷瘤陰陽兩虛小鼠本文檔共63頁；當前第31頁；編輯于星期一\13點11分以下為不同組別荷瘤小鼠爪：

圖11爪消瘦而略紅圖12爪淡掌略胖圖9正常小鼠爪圖10爪淡伸展無力本文檔共63頁；當前第32頁；編輯于星期一\13點11分以下為編號為H9荷瘤小鼠不同日期拍攝的爪：

圖15腫瘤接種第2周圖16腫瘤接種第2.5周圖13腫瘤接種第1周圖14腫瘤接種第1.5周本文檔共63頁；當前第33頁；編輯于星期一\13點11分二、正常小鼠存在體質(zhì)差異/證候差異

圖17正常昆明種小鼠后爪圖18偏虛證的正常昆明種小鼠后爪

圖19正常昆明種小鼠后爪R值的正態(tài)分布圖20正常昆明種小鼠體重的正態(tài)分布本文檔共63頁；當前第34頁；編輯于星期一\13點11分

三、小鼠如何問診

人、鼠對話是困難的，但是問診所期望采集的信息卻大多是可以獲得的，而且部分信息的完整性、可靠性還優(yōu)于普通臨床上的問診。為什么呢？眾所周知，問診歸納起來是十問：一問寒熱二問汗，三問頭身四問便，五問飲食六胸腹，七聾八渴俱當辨，九問舊病十問因，還要參考服藥。臨床上，患者的一般情況也是問診的重要內(nèi)容。對此，小鼠可以通過以下途徑實現(xiàn)：本文檔共63頁；當前第35頁；編輯于星期一\13點11分1.問寒熱。小鼠畏寒，往往表現(xiàn)為扎堆，飼養(yǎng)中可以觀察到；畏寒的另一特點是畏寒的局部體表溫度下降，通過體表紅外成像數(shù)碼拍攝和圖像處理，可以精確定量；而體內(nèi)和體表溫度的改變，可以分別通過肛溫、腋溫、尾溫、爪溫檢測獲得。因此，以上檢測可以很好地達到問寒熱的主要目的，而且部分實現(xiàn)了量化。

2.問汗。有報道嘗試通過特殊染色技術，檢測爪面出汗點和數(shù)量多寡；有的實驗觀察了皮毛潮濕的程度，部分彌補了問汗的困難。本文檔共63頁；當前第36頁；編輯于星期一\13點11分

3.問頭身。頭身的感受可以綜合兩個方面的信息獲得：1）造模方法，如果這些方法在臨床上可能造成頭身證候的，比如頭顱手術、高血壓、感冒等，可以參考；2）小鼠曠場自主探究和活動、抖攏檢測，如果頭身痛楚，則小鼠活動和探究頻率和幅度會減少。

4.問便。飼養(yǎng)可以直接觀察大便的數(shù)量和質(zhì)量，小便可以通過代謝籠完整回收，觀測其數(shù)量和性狀。

5.問飲食。攝食量和飲水量可以精確測量，嚙齒頻率（通過聲音采集與分析）可以部分反映其脾胃健康與否。本文檔共63頁；當前第37頁；編輯于星期一\13點11分

6.胸腹。方法類似于問頭身。

7.聾。生理學有聽覺反應檢測，可以采用；小鼠曠場、抖攏檢測可以觀察小鼠反應的靈敏與遲鈍，間接反映其聽覺。

8.渴。飲水量的精確測量，以及結(jié)合代謝籠尿液收集數(shù)量、顏色，判斷其可能水分通過呼吸、汗液、尿液代謝的途徑：陽熱盛往往表現(xiàn)為飲多而尿少且赤；下消則飲一溲一，等等。

9.問舊病。實驗動物的疾病遺傳，以及疾病或證候造模方法是明確的，而臨床卻往往做不到。本文檔共63頁；當前第38頁；編輯于星期一\13點11分

10.問病因。同上，而且造模藥物干預過程也是明確的。

11.參服藥。治療干預記錄是十分明確的。

12.一般情況。包括動物購入和實驗日期、品系、月齡、性別，飼養(yǎng)、繁殖背景等均是明確的。因此，小鼠雖然難以實現(xiàn)傳統(tǒng)意義上的問診，比如疼痛的性質(zhì)或持續(xù)時間，但問診許多重要內(nèi)容，卻是可以詳細、準確獲得的。而且，大多可以精確地定量，因而其可靠性、準確性往往還要優(yōu)于通常意義上的臨床問診。本文檔共63頁；當前第39頁；編輯于星期一\13點11分

四、小鼠如何望診

1.望面色

以下圖右是正常小鼠，腫瘤虛證小鼠在左側(cè)。從圖中可以看到，正常小鼠頭部上抬，直視相機鏡頭，很關注；眼裂寬，眼色紅潤、有神；吻部飽滿、紅潤；腫瘤虛證小鼠則相反，頭低垂、目光呆滯，失去了好奇；雙目色暗；吻部瘦削、色暗滯。21正常與腫瘤小鼠面容與體態(tài)

本文檔共63頁；當前第40頁；編輯于星期一\13點11分

2.望舌

清醒狀態(tài)下，小鼠舌不易自主伸出，如果強迫其伸出，必然嚴重干擾氣血運行，不符合中醫(yī)四診原則。當小鼠麻醉后，可以方便地輕輕撐開小鼠嘴，使其舌自然伸出口腔之外，采用顯微放大（8-15×），是可以清晰觀察到的。其表現(xiàn)與人類舌象十分相似。血虛舌淡，陰虛陽盛舌偏紅。但是，麻醉會干擾小鼠氣血運行；不同模型小鼠對麻醉的耐受度還不同，甚至難以接受；麻醉過深會導致小鼠死亡，過淺則小鼠會出現(xiàn)掙扎、不配合等等。因此，常規(guī)地開展舌診，有一定的限制。有沒有部分可以替代的方法？本文檔共63頁；當前第41頁；編輯于星期一\13點11分

圖22正常小鼠舌圖23環(huán)磷酰胺模型圖24乙酰苯肼模型圖25甲狀腺素模型圖26丙基硫氧嘧啶模型

圖27正常小鼠爪圖28環(huán)磷酰胺模型圖29乙酰苯肼模型圖30甲狀腺素模型圖31丙基硫氧嘧啶模型

圖32正常小鼠尾圖33環(huán)磷酰胺模型圖34乙酰苯肼模型圖35甲狀腺素模型圖36丙基硫氧嘧啶模型小鼠舌象與爪尾的比較本文檔共63頁；當前第42頁；編輯于星期一\13點11分

3.望爪和尾

與人類不同，小鼠爪、尾的角化質(zhì)比較薄，可以較好地反映氣血充盈和陰陽盛衰的表現(xiàn)。以上不同模型小鼠爪、尾（8×）各取自以上舌象的同一小鼠。就紅色的程度而言，各模型舌、爪、尾是一致的，爪、尾色可以部分替代舌色和面色。將以上標準拍攝的顯微數(shù)碼照片輸入電腦，采用計算機和Photoshop7.0圖像軟件，可以對所規(guī)定的區(qū)域提取色素，圖像挖掘。所獲得的國際標準色R、G、B數(shù)值（R代表紅色，G代表綠色，B代表藍色），可以換算出紅色程度的分量值r。r=R/（R+G+B）。將以上不同模型舌、爪、尾小鼠r提取并作圖如下：本文檔共63頁；當前第43頁；編輯于星期一\13點11分

以上結(jié)果說明：（1）舌、爪、尾顏色的變化趨勢是一致的，r值的變化趨勢也一致。（2）反映紅色的程度，舌優(yōu)于爪、爪優(yōu)于尾。因此，要觀察氣血寒熱，優(yōu)先觀察舌、其次是爪。

（3）通過標準顯微攝影和經(jīng)計算機圖像處理，可以實現(xiàn)部分小鼠望診的標準化、客觀化和計量化。圖37計算機圖像處理后各組小鼠爪、尾、舌r值本文檔共63頁；當前第44頁；編輯于星期一\13點11分

4.望診其他采集內(nèi)容

包括：稱重、望形體虛實、望形體神、望形體寒熱、望運動步態(tài)、望精力、望毛色虛實、望呼吸狀況、望眼神、望耳、望鼻、望唇、望腹、望二陰、望大便、望小便、望爪、望尾、望睡眠、爪和尾顯微拍照（顏色、胖瘦、光澤、爪舒展、爪伸展、爪老嫩、爪潔凈、爪潰爛）。5.不同品系小鼠爪等的證候表現(xiàn)非常一致

以上望診方法，是否適用于常見不同品系小鼠？黑色與白色小鼠是否一致？我們比較了常用不同品系小鼠C57小鼠（黑色）、BALBc、ICR、昆明小鼠（均為白色）的四診表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)具有很高的一致性。這一結(jié)果提示，我們所建立的望診方法是適用于常用不同品系小鼠的。本文檔共63頁；當前第45頁；編輯于星期一\13點11分以下是不同品系小鼠的爪：

圖38C57小鼠爪圖39BALBc小鼠爪圖40ICR小鼠爪圖41昆明小鼠爪本文檔共63頁；當前第46頁；編輯于星期一\13點11分五、小鼠如何切診1.小鼠如何把脈

我們沒有開展小鼠把脈的研究，主要是擔心會干擾其氣血運行。然而，我們建立了小鼠自然狀態(tài)下心電的快速采集。該設計思路和采集裝置已經(jīng)獲得中華人民共和國專利，專利號為：ZL03116816.7。可以類似于檢測脈的至數(shù)與節(jié)律，如促、結(jié)、代、數(shù)、疾、緩、遲等脈象。2.切診的其他項目與內(nèi)容

包括體溫和膚之溫涼、腫塊的大小與質(zhì)地、肌力的強弱等，不同疾病和證候動物還會有一些特殊的檢測內(nèi)容。本文檔共63頁；當前第47頁；編輯于星期一\13點11分六、小鼠如何聞診

小鼠聞診內(nèi)容目前主要為嗅氣味，聲音的標準采集和分析將有助于判斷小鼠的虛實。七、小鼠四診的標準化、客觀化、計量化采集與分析

為實現(xiàn)小鼠非創(chuàng)傷性的標準化、客觀化、計量化四診檢測，我們提出并初步建立了小鼠四診工作站。本文檔共63頁；當前第48頁；編輯于星期一\13點11分

1.思路和原則

繼承中醫(yī)四診和辨證論治的理論與方法，模擬中醫(yī)臨床四診信息的采集方式，實現(xiàn)小鼠的非創(chuàng)傷性四診檢測，同時部分實現(xiàn)四診檢測的標準化、量化，提高四診檢測速度，以適應大樣本的檢測之需。即：（1）非創(chuàng)傷性檢測；（2）標準化、客觀化、計量化；（3）可操作原則，即操作容易和方便，便于掌握和普及；（4）低成本原則，利于普及；（5）流水作業(yè)原則，以提高檢測速率。本文檔共63頁；當前第49頁；編輯于星期一\13點11分

2.小鼠四診工作站內(nèi)容

（1）小鼠行為學曠場實驗檢測單元（2）小鼠爪、尾顯微放大拍攝單元（3）小鼠舌顯微放大拍攝單元

圖42小鼠曠場檢測圖42-1小鼠爪尾顯微放大拍攝單元本文檔共63頁；當前第50頁；編輯于星期一\13點11分（4）小鼠自然狀態(tài)下心電快速采集單元

圖43小鼠清醒狀態(tài)下前后肢引導出的心電圖42－3小鼠爪持法圖42－3小鼠尾持法本文檔共63頁；當前第51頁；編輯于星期一\13點11分（5）小鼠腋溫采集單元（6）小鼠體重采集單元（7）小鼠整體外觀攝影單元（8）小鼠抖攏自主活動狀況采集單元（9）小鼠攝食量稱量單元（10）小鼠飲水量測量單元（11）荷瘤小鼠瘤徑的測量（12）信息綜合處理單元3.小鼠四診檢測操作流程和原則（1）操作流程（2）操作原則本文檔共63頁；當前第52頁；編輯于星期一\13點11分八、小鼠常見證候辨證標準1．四診信息的標準采集2．建立各四診信息的正常參考值（1）建立實驗前各四診信息的正常參考值（2）建立正常對照組動態(tài)的正常參考值（3）部分檢測數(shù)據(jù)基數(shù)校正3．癥狀歸類預處理表1形質(zhì)、遲動、淡、紅、青紫、瘀、寒熱癥狀類類別癥狀形質(zhì)減少如消瘦、體重減輕/偏輕、爪和尾瘦癟，等形質(zhì)增加如胖、體重偏重/重、爪和尾胖/腫，等動心率偏數(shù)/數(shù)、吻和軀體移動增加，等遲心率緩/遲、吻和軀體移動減弱，等淡唇、耳、爪、尾淡/偏淡等紅唇、耳、爪、尾紅/偏紅等熱腋溫偏高/高等寒腋溫低/偏低、蜷縮、扎堆、發(fā)抖等青紫、瘀唇、耳、爪、尾暗、偏暗/青紫、腫塊，等本文檔共63頁；當前第53頁；編輯于星期一\13點11分表2虛實、濕、毒、病因病邪、病態(tài)癥狀歸類類別癥狀實如：病邪造模、腫瘤，等虛如：老年、發(fā)育不良，食量減少、體重減輕等濕大便偏濕、粘液便、皮毛濕，等毒如癌腫等病因病邪如接種腫瘤、血管結(jié)扎、失血，等病態(tài)如爪不潔、污物附著，等表3五臟定位癥狀歸類類別癥狀心神志異常、眼中無神、嗜臥、心臟病變等肝筋脈拘攣、目疾、多怒撕咬、或肝臟病變等脾飲食減少、腹脹滿、肌體羸瘦、瀉利等肺皮膚病變、喘急、鼻孔見有出血和撓鼻等腎老年、羸瘦、發(fā)育不良、生殖及生殖器異常等本文檔共63頁；當前第54頁；編輯于星期一\13點11分

4．常見的寒熱、虛實、氣血、陰陽、病邪、五臟證候辨證標準

（1）寒、熱、虛、實等的辨證標準

表4寒、熱、虛、實等的辨證標準證辨證標準寒證寒表現(xiàn)1項或以上偏寒證寒表現(xiàn)1項或以上，權重分值低熱證紅、熱表現(xiàn)1項或以上偏熱證紅、熱表現(xiàn)1項或以上，權重分值低虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項或以上，項目多，程度重偏虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項或以上，權重分值低實證實、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項或以上，愈重愈實偏實證實、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項或以上，權重分值低本文檔共63頁；當前第55頁；編輯于星期一\13點11分（2）陰虛證、陰虛火旺、陽虛證、陰陽兩虛、氣虛證、血虛證等的辨證標準

表5陰虛證、陰虛火旺、陽虛證、陰陽兩虛、氣虛證、血虛證等的辨證標準證辨證標準陰虛證形質(zhì)減少1項，或虛證+紅、熱、動1項或以上偏陰虛證形質(zhì)減少1項，或虛證+紅、熱、動1項或以上，權重分值低陰虛火旺證陰虛證+火征，紅、熱、動分值高陽虛證虛證+（寒1項或以上，或+遲、淡2項或以上）偏陽虛證虛證+（寒1項或以上，或+遲、淡2項或以上，權重分值低）陰陽兩虛證虛證分值高（有別于氣虛），或陽虛證+陰虛證1項或以上氣虛證遲、虛證權重分值低氣偏虛證遲、虛證權重分值更低血虛證淡+可能的失血現(xiàn)象血偏虛證淡+可能的失血現(xiàn)象，權重分值低氣血兩虛證氣虛+血虛證本文檔共63頁；當前第56頁；編輯于星期一\13點11分（3）部分病邪的辨證標準（4）五臟證候的辨證標準

表6部分病邪的辨證標準病邪辨證標準濕證濕類證候1項或以上濕熱證濕證+熱證，或肛門紅腫充血，1項或以上毒（熱毒）毒類證候1項或以上血瘀證青紫、瘀1項或以上表7五臟證候的辨證標準五臟辨證標準心表4-6證候+心定位表現(xiàn)1項或以上肝表4-6證候+肝定位表現(xiàn)1項或以上脾表4-6證候+脾定位表現(xiàn)1項或以上肺表4-6證候+肺定位表現(xiàn)1項或以上腎表4-6證候+腎定位表現(xiàn)1項或以上本文檔共63頁；當前第57頁；編輯于星期一\13點11分目前，我們已經(jīng)編寫出方法學專著：《辨證論治實驗方法學——實驗小鼠診法與辨證》本文檔共63頁；當前第58頁；編輯于星期一\13點11分九、發(fā)表的學術論文1.方法學學術論文

[1]方肇勤,潘自強,付曉伶,等.小鼠四診采集項目標準的建議.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,2005,11(9):692-694[2]方肇勤.昆明種小鼠辨證標準的建議.全國辨證論治研討會(上海)2004,3.[3]方肇勤,潘志強,湯偉昌,等.小鼠四診工作站構(gòu)建與操作標準.上海中醫(yī)藥大學學報,2006,20(1)[4]潘自強,方肇勤,闞衛(wèi)兵,