電泳技術(shù)和常用電泳儀

電泳技術(shù)和常用電泳儀第一頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一

本章教學(xué)要求

了解常用的電泳儀了解電泳儀臨床應(yīng)用熟悉常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)、電泳方法熟悉毛細(xì)管電泳儀基本原理、基本結(jié)構(gòu)掌握電泳基本原理掌握毛細(xì)管電泳的特點、分離模式掌握電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除第二頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一內(nèi)容提要

第一節(jié)電泳原理

第二節(jié)常用電泳方法第三節(jié)常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)第四節(jié)常用電泳儀簡介第五節(jié)毛細(xì)管電泳第六節(jié)電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除第七節(jié)電泳儀的臨床應(yīng)用第三頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一電泳（electrophoresis）是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)（electrophoresistechnique）?？梢詫崿F(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器稱之為電泳儀（electrophoresister）。概述第四頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一

臨床常用的電泳分析方法主要有醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳和毛細(xì)管電泳等。目前，電泳技術(shù)已廣泛用于蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核苷酸、無機(jī)離子等成份的分離和鑒定，甚至還用于細(xì)胞與病毒的研究。

概述第五頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)電泳原理

一、電泳的基本原理物質(zhì)分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負(fù)電荷量相等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學(xué)反應(yīng)條件下，某些物質(zhì)分子會成為帶電的離子（或粒子），不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒形狀和大小不同，因而在一定的電場中它們的移動方向和移動速度也不同，因此可使它們分離。

電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象第六頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)電泳原理

若將帶凈電荷Q的粒子放入電場，則該粒子所受到的電荷引力為：F引=EQ（16-1）在溶液中,運(yùn)動粒子與溶液之間存在阻力F阻

F阻=6πrηV（16-2）當(dāng)F引=F阻時EQ=6πrηVV=EQ/6πrη（16-3）由上式可以看出,粒子的移動速度(泳動速度V)與電場強(qiáng)度(E)和粒子所帶電荷量(Q)成正比,而與粒子的半徑(r)及溶液的粘度(η)成反比。第七頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)電泳原理

二、影響電泳的外界因素（一）電場強(qiáng)度（二）溶液的pH值（三）溶液的離子強(qiáng)度（四）電滲作用（五）粒子的遷移率（六）吸附作用V=EQ/6πrη第八頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法一、紙電泳指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。

將濾紙條水平地架設(shè)在兩個裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進(jìn)行電泳。

平臥式電泳槽裝置示意圖第九頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法二、醋酸纖維素薄膜電泳電泳時經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。

血清蛋白的電泳圖譜第十頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法三、凝膠電泳由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式。凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳是普通電泳中應(yīng)用最多的兩種形式。目前，這種辦法被廣泛用來分析蛋白質(zhì)和核酸。

凝膠電泳圖第十一頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法四、等電聚焦電泳

1．等電聚焦電泳過程一種利用有pH值梯度的介質(zhì)，分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。在一個穩(wěn)定連續(xù)的線性pH梯度的溶液（兩性載體電解質(zhì)）中進(jìn)行分離，每一種被分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等電點相一致的pH位置，在那里不再移動（稱為聚焦）。

凈電荷與PH的關(guān)系曲線第十二頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法2．等電聚焦電泳的特點①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度；②由于“聚焦效應(yīng)”，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；③電泳速度快;④分辨率高;⑤加入樣品的位置可任意選擇；⑥可用于測定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點;⑦適用于中、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等）生物組分的分離分析。第十三頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法五、等速電泳采用兩種不同濃度的電解質(zhì)，一種為前導(dǎo)電解質(zhì)，充滿整個毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì)，置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分，尾隨電解質(zhì)則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強(qiáng)電場的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動，實現(xiàn)分離。

等速電泳示意圖

第十四頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法六、雙向凝膠電泳（二維電泳）第一向采用等電聚焦根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個蛋白質(zhì)的PI的不同，將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點狀。等電聚焦儀第十五頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一

雙向凝膠電泳示意圖第二節(jié)常用電泳方法第一向IEF第二向SDS18cm玻璃板MarkerIPG膠條等電聚焦電泳槽六、雙向凝膠電泳（二維電泳）第十六頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法六、雙向凝膠電泳儀器結(jié)構(gòu)制膠板、電泳槽、電源、計算機(jī)、掃描儀等第十七頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)常用電泳方法七、免疫電泳免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開；然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇，在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤?，形成肉眼可見的沉淀弧。第十八頁，共四十八頁，編輯?023年，星期一

第三節(jié)常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)一、常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)（一）電源（二）電泳槽（三）附加裝置

垂直電泳儀器裝置示意圖第十九頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一實驗室常用電泳槽和電泳

第三節(jié)常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)垂直板電泳槽和電源水平電泳槽、電泳儀凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上，將凝膠直接浸入緩沖液中。常用于瓊脂糖電泳分離核酸。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板，在玻璃平板中間制備電泳凝膠。垂直板式電泳常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。第二十頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一

第三節(jié)常用電泳儀的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)二、電泳儀的主要技術(shù)指標(biāo)

1．輸出電壓6．功率穩(wěn)定度

2．輸出電流7．連續(xù)工作時間

3．輸出功率8．顯示方式

4．電壓穩(wěn)定度9．定時方式

5．電流穩(wěn)定度

第二十一頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第四節(jié)常用電泳儀簡介一、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是目前國內(nèi)中、低壓電泳實驗中應(yīng)用最廣泛的電泳儀之一。其輸出電壓的調(diào)節(jié)范圍為0V～600V、輸出電流為0mA～100mA。這種電泳儀工作穩(wěn)定性好、調(diào)節(jié)范圍寬，并設(shè)有完善的短路保護(hù)電路和過流保護(hù)電路。

穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀第二十二頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第四節(jié)常用電泳儀簡介二、全自動醋纖膜電泳儀全自動醋纖膜電泳儀為全自動電泳儀，有可見光單系統(tǒng)，使用醋酸纖維薄膜電泳片，優(yōu)點為自動化程度高。只需將樣品、試劑、電泳片放好，人員可離機(jī)完成實驗并得到結(jié)果。第二十三頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第四節(jié)常用電泳儀簡介三、全自動熒光/可見光雙系統(tǒng)電泳儀全自動熒光/可見光雙系統(tǒng)電泳儀只需將樣品、試劑和瓊脂糖凝膠電泳膠片放好后，其最大優(yōu)點是熒光系統(tǒng)全自動，只需要20min即可完成電泳分析，速度非?？臁２僮魅藛T可離機(jī)完成實驗并得到結(jié)果。

第二十四頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第四節(jié)常用電泳儀簡介四、全自動瓊脂糖電泳儀全自動瓊脂糖電泳儀，有可見光單系統(tǒng)，使用瓊脂糖凝膠電泳膠片。靈敏度高，可適用于低濃度蛋白檢驗，如尿蛋白、腦脊液蛋白、同工酶的分離。但其自動化程度較差。由于這類電泳儀所能做的項目較多，且靈敏度較高，仍為許多實驗室所接受。第二十五頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第四節(jié)常用電泳儀簡介五、全自動電泳分析系統(tǒng)全自動電泳分析系統(tǒng)，將上述儀器的優(yōu)點集于一身，儀器自動點樣、電泳、呈色（或染色、脫色）、烘干，自動化程度非常高。可用各種電泳片，包括瓊脂片、醋酸片、聚丙烯酰胺等，采用可見光及熒光呈色雙系統(tǒng)，是一種較理想的電泳儀。

全自動電泳儀第二十六頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳一、毛細(xì)管電泳的基本工作原理溶液中的帶電粒子以高壓電場為驅(qū)動力，沿毛細(xì)管通道，以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向遷移，并依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離。

高效毛細(xì)管電泳儀第二十七頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管電泳儀裝置示意圖第二十八頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳三、毛細(xì)管電泳的特點

1.高靈敏度2.高速度3.高分辨率

4.樣品少5.自動化程度高

6.應(yīng)用范圍廣

TriSepTM-2010GVpCECSystem第二十九頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳三、毛細(xì)管電泳的分離模式（一）毛細(xì)管區(qū)帶電泳它是通過在充滿電解質(zhì)溶液的毛細(xì)管中，不同質(zhì)荷比大小的組分，在電場的作用下，依遷移速度的不同而進(jìn)行分離。根據(jù)組分的遷移時間進(jìn)行定性，根據(jù)電泳峰的峰面積或峰高進(jìn)行定量分析。

毛細(xì)血管區(qū)帶電泳原理圖第三十頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳（二）毛細(xì)管凝膠電泳毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)常用聚丙烯酰胺在毛細(xì)管內(nèi)交聯(lián)制成凝膠柱，依據(jù)分離支撐物的分離作用不同，CGE又分為非變性CGE和變性CGE，前者以分子篩、電荷／質(zhì)量比的作用進(jìn)行分離；后者則以質(zhì)量、分子篩的作用進(jìn)行分離。適用于分離、測定肽類、蛋白質(zhì)、DNA類物質(zhì)的分離。

第三十一頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳（三）毛細(xì)管膠束電動色譜(MECC)MECC系統(tǒng)中存在兩個相：流動的水相和起到固定相作用的膠束相。在含有膠束的流動相中，溶質(zhì)在“水相”和“膠束相”(準(zhǔn)固定相)之間進(jìn)行分配，即使是中性溶質(zhì)，因其本身疏水性不同，在二者之間的分配也會有差異，疏水性強(qiáng)的溶質(zhì)在“膠束相”中停留時間長，遷移速度就慢。反之，親水性強(qiáng)的溶質(zhì)遷移速度就快，最終中性溶質(zhì)將依其疏水性不同而得以分離。第三十二頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管膠束電動色譜原理圖第三十三頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳（四）毛細(xì)管等電聚焦電泳不同等電點的分子分別聚集在不同的位置上，不作遷移而彼此分離，這就是等電聚焦分離過程。毛細(xì)管的等電聚焦是在毛細(xì)管內(nèi)實現(xiàn)的等電聚焦過程，具有極高的分辨率，通常可以分離等電點差異小于0.01pH單位的兩種蛋白質(zhì)，例如肽類、蛋白質(zhì)的分離。第三十四頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳（五）毛細(xì)管等速電泳毛細(xì)管內(nèi)首先導(dǎo)入具有比被分離各組分高電泳淌度的前導(dǎo)電解質(zhì)，然后進(jìn)樣，隨后再導(dǎo)入比各分離組份低電泳淌度的尾隨電解質(zhì)，在強(qiáng)電場的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中發(fā)生分離。

第三十五頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳

（六）毛細(xì)管電色譜它包含了電泳和色譜兩種機(jī)制，是在毛細(xì)管中填充或在毛細(xì)管壁上鍵合（或涂壁）固定相，從而構(gòu)成毛細(xì)管色譜柱，依靠電滲流推動流動相，攜帶樣品遷移，根據(jù)樣品分子的質(zhì)荷比、分子尺寸及分配系數(shù)的差別而分離。

CEC-加壓毛細(xì)管電色譜儀第三十六頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳（七）毛細(xì)管電泳芯片毛細(xì)管電泳芯片是在常規(guī)毛細(xì)管電泳的原理和技術(shù)基礎(chǔ)上，利用微加工技術(shù)在平方厘米級大小的芯片上加工出各種微細(xì)結(jié)構(gòu)，如通道和其它功能單元，通過不同的通道、反應(yīng)器、檢測單元等的設(shè)計和布局，實現(xiàn)樣品的進(jìn)樣、反應(yīng)、分離和檢測，是一種多功能化的快速、高效和低耗的微型實驗裝置。第三十七頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第五節(jié)毛細(xì)管電泳四、毛細(xì)管電泳儀的基本結(jié)構(gòu)毛細(xì)管電泳儀的結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜，主要有高壓毛細(xì)管柱、檢測器，以及兩個供毛細(xì)管兩端插入而又可和電源相連的緩沖液槽。（一）毛細(xì)管柱（二）檢測器（三）毛細(xì)管電泳法的進(jìn)樣技術(shù)

毛細(xì)管電泳儀第三十八頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一

第六節(jié)電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除

一、電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)（一）每日維護(hù)（二）每周維護(hù)（三）每月維護(hù)（四）按需進(jìn)行的維護(hù)

TriSep毛細(xì)管電泳儀

第三十九頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一

第六節(jié)電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除二、電泳儀的故障排除電泳儀是精密儀器，在操作過程中要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，但不可避免會出現(xiàn)各種各樣的故障，當(dāng)儀器提示有故障時，應(yīng)立即處理。

BECKMANCOULTER毛細(xì)管電泳儀第四十頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一

第六節(jié)電泳儀的維護(hù)保養(yǎng)及故障排除故障信息引起故障可能原因解決方法轉(zhuǎn)盤識別錯誤細(xì)微灰塵吸附在燈上儀器關(guān)機(jī)，用潔凈棉簽輕輕拭去燈上面的灰塵。儀器開機(jī)后再進(jìn)行測定。

樣品識別錯誤血清分離不好或者有灰塵吸附關(guān)機(jī)狀態(tài)，拆開儀器內(nèi)透明有機(jī)玻璃，用無水乙醇擦拭加樣針外壁，然后安裝好，再用儀器內(nèi)程序進(jìn)行加樣針清洗，洗完1～2次后，進(jìn)行加樣針加樣感應(yīng)定位。儀器報警出現(xiàn)缺少稀釋杯或稀釋杯感應(yīng)錯誤儀器稀釋杯位置錯誤觀察稀釋杯位置，如果沒有處于正常位置，可手動將其移動到其原來位置，然后進(jìn)行稀釋杯感應(yīng)定標(biāo)。曲線不理想，顯示不穩(wěn)定毛細(xì)管的長期使用出現(xiàn)不清潔毛細(xì)管清洗程序進(jìn)行清洗，然后按激活程序進(jìn)行激活既可電泳時出現(xiàn)峰丟失未接入檢測器，或檢測器不起作用，進(jìn)樣溫度太低，柱箱溫度太低，無載氣流檢查設(shè)定值。檢查溫度，并根據(jù)需要調(diào)整。

檢查溫度，并根據(jù)需要調(diào)整。

檢查壓力調(diào)節(jié)器，并檢查泄漏，驗證柱進(jìn)品流速。運(yùn)行過程中突然斷電電流量不穩(wěn)定或儀器內(nèi)有短路現(xiàn)象采用穩(wěn)壓措施，咨詢工程師更換保險毛細(xì)管電泳儀常見故障及故障排除方法

第四十一頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第七節(jié)電泳儀的臨床應(yīng)用一、血清蛋白電泳

新鮮血清經(jīng)醋酸纖維薄膜或瓊脂糖電泳、染色后，通?？梢?條帶，即清蛋白、1、2、和球蛋白。許多疾病總血清蛋白濃度和各蛋白組分的比例有所改變，通過血清蛋白電泳圖譜能幫助我們對某些疾病進(jìn)行診斷及鑒別診斷。

血清蛋白電泳圖譜第四十二頁，共四十八頁，編輯于2023年，星期一第七節(jié)電泳儀的臨床應(yīng)用二、尿蛋白電泳臨床進(jìn)行尿蛋白電泳的主要目的是：①