質譜分析法定性與定量詳解

質譜分析法定性與定量詳解演示文稿本文檔共63頁；當前第1頁；編輯于星期一\3點56分（優(yōu)選）質譜分析法定性與定量本文檔共63頁；當前第2頁；編輯于星期一\3點56分TheArnolfiniWedding阿爾諾菲尼的婚禮揚.凡.艾克1434本文檔共63頁；當前第3頁；編輯于星期一\3點56分主要內容一、質譜基礎及相關術語二、定性（確證）方法三、定量方法本文檔共63頁；當前第4頁；編輯于星期一\3點56分真空系統(tǒng)進樣系統(tǒng)檢測器數(shù)據(jù)系統(tǒng)質量分析器離子源大氣壓質譜儀的基本結構GCLCICCEEI、CIESIAPCI、APPIMALDIDART-四級桿離子阱飛行時間磁質譜FT-ICR一、質譜基礎及相關術語本文檔共63頁；當前第5頁；編輯于星期一\3點56分各種離子化方法的使用范圍

選擇的依據(jù)揮發(fā)性熱穩(wěn)定性極性Neutral101102103104105MolecularWeightIonicAnalytePolarityESIorMALDIAPCI/APPIGC/MS本文檔共63頁；當前第6頁；編輯于星期一\3點56分質量范圍質譜儀所能測定的離子質荷比的范圍不同儀器不同應用質譜儀主要性能指標掃描速度分辨率色譜峰的數(shù)據(jù)點數(shù)目和峰寬、掃描時間有關本文檔共63頁；當前第7頁；編輯于星期一\3點56分質譜儀主要性能指標本文檔共63頁；當前第8頁；編輯于星期一\3點56分質譜儀主要性能指標磁質譜的分辨率定義最為嚴格：對兩個相等強度的相鄰峰，當兩峰間的峰谷不大于其峰高10%時，則認為兩峰已經分開，其分辨率：磁質譜中，R不隨m/z變化，在測定小分子時有優(yōu)勢eg.R=5000，500與500.15000與5001分辨率本文檔共63頁；當前第9頁；編輯于星期一\3點56分有機質譜僅要求50％峰谷剛剛分開就算分開（這時稱為有機質譜的單位質量分辨）簡化為用單峰法表示，即測定一個峰半峰高處的全峰寬FullwidthhalfMaximum（簡寫為FWHM）分辨率eg.FWHM=0.25m/z=100，R=400m/z=1000，R=4000本文檔共63頁；當前第10頁；編輯于星期一\3點56分分辨率例如：要區(qū)分以下離子，分辨率要達到CO+ 27.9949 N2+ 28.0061ArCl+ 74.9312As+ 74.9216本文檔共63頁；當前第11頁；編輯于星期一\3點56分atto摩爾級的靈敏度；優(yōu)于2ppm的MS質量準確度優(yōu)于5ppm的MS/MS質量準確度線性動態(tài)范圍可以達到五個數(shù)量級；質量分辨率至20,000高速數(shù)據(jù)采集能力（每秒獲得10張MS/MS譜圖），更好地兼容超快速液相色譜寬質量范圍：m/z范圍從25～20,000u舉例：本文檔共63頁；當前第12頁；編輯于星期一\3點56分質譜峰類型分子離子必須是化合物譜圖中質量最高的離子必須是奇電子離子、符合氮規(guī)則必須能通過丟失合理的中性離子，產生譜圖中高質量區(qū)的重要離子準分子離子碎片離子同位素離子由于天然同位素的存在，因此在質譜圖上出現(xiàn)M+1，M+2等峰，由這些同位素所形成的峰稱之為同位素峰一、質譜基礎及相關術語術語本文檔共63頁；當前第13頁；編輯于星期一\3點56分1-Cl2-Cl本文檔共63頁；當前第14頁；編輯于星期一\3點56分1-Br2-Br本文檔共63頁；當前第15頁；編輯于星期一\3點56分3-Br4-Br本文檔共63頁；當前第16頁；編輯于星期一\3點56分Beynon表例如：M=150化合物M+1M+2 化合物M+1M+2C6H14NOCl8.150.49 C7H11N49.250.38C6H14O46.861.0 C8H6O38.360.95C7H2O47.751.06 C8H8NO29.230.78C7H4NO38.131.06 C8H11N2O9.610.61C7H6N2O28.500.72 C8H12N39.980.45C7H8N3O8.880.55 C9H10O29.960.84本文檔共63頁；當前第17頁；編輯于星期一\3點56分二、定性（確證）方法質譜法只有在與色譜分離在線或脫機聯(lián)用時才能作為確證方法在分析儀器上的進樣順序是：空白溶劑、陰性控制樣品、要確證的樣品、陽性控制樣品再進樣，最后是陰性控制樣品

1.基本原則本文檔共63頁；當前第18頁；編輯于星期一\3點56分保留時間實驗室條件下分析物的最小可接受保留時間，>2t0氣相色譜（GC）或液相色譜（LC）時，半峰寬應在原來峰寬的90-110%以內，保留時間的變化應在5%以內二、定性（確證）方法

2.

色譜分離本文檔共63頁；當前第19頁；編輯于星期一\3點56分保留時間測試部分中分析物的保留時間（或相對保留時間），應在一個特定的保留時間窗口范圍內與校正標準的保留時間相符。保留時間窗口與該色譜系統(tǒng)的分辨能力相當。分析物和內標的保留時間之比，應與校正溶液的相對保留時間一致，GC偏差為±0.5%，LC偏差為±2.5%

二、定性（確證）方法

2.

色譜分離本文檔共63頁；當前第20頁；編輯于星期一\3點56分GBT16631-2008高效液相色譜法通則：同樣條件下重復試驗的保留數(shù)據(jù)的分散性，RSD≤3%JJG705-2002液相色譜儀檢定規(guī)程：定性測量重復性（6次測量）RSD≤1.5%JJF（閩）1032－2010液相色譜-質譜聯(lián)用儀校準規(guī)范：定性重復性RSD≤2%JY/T021—1996分析型氣相色譜方法通則：整機重復性保留時間RSD≤5％二、定性（確證）方法關于保留時間的討論本文檔共63頁；當前第21頁；編輯于星期一\3點56分GB/T22260-2008飼料中甲基睪丸酮的測定高效液相色譜串聯(lián)質譜法試樣保留時間與標準品的相對偏差不大于15%GB/T22147-2008飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測定液相色譜質譜聯(lián)用法樣品與標準品保留時間的相對偏差不大于0.5%二、定性（確證）方法關于保留時間的討論本文檔共63頁；當前第22頁；編輯于星期一\3點56分全掃描scan選擇離子監(jiān)測SIMMS-MSn技術，如多反應監(jiān)測MRM二、定性（確證）方法

3.質譜檢測本文檔共63頁；當前第23頁；編輯于星期一\3點56分全掃描scan用記錄全掃描質譜圖進行質譜測定時，在標準品參考圖譜中所有相對豐度>10%（分子離子、分子離子的特征加成物、特征碎片離子、同位素離子等）的特征離子都必須檢測選擇離子監(jiān)測SIM用碎片離子色譜圖進行質譜測定時，分子離子最好是一個選擇的檢測離子。選擇的檢測離子并不一定要源于分子的同一部分。每個檢測離子的信噪比應≥3︰1二、定性（確證）方法

3.質譜檢測本文檔共63頁；當前第24頁；編輯于星期一\3點56分相對豐度（%基峰）EI-GC-MS（相對）CI-GC-MS、GC-MSn、LC-MS、LC-MSn（相對）>50%±10%±20%>20%to50%±15%±25%>10%to20%±20%±30%≤10%±50%±50%相對離子豐度最大容許偏差二、定性（確證）方法本文檔共63頁；當前第25頁；編輯于星期一\3點56分二、定性（確證）方法2002/657/EC規(guī)定：要確證指令96/23/EC附錄I-A組所列的物質，最少需要4個識別點，包括具有促合成作用和其他未允許的化合物，如二苯乙烯類化合物及其衍生物、鹽、酯等、抗甲狀腺劑、甾醇、二羥基苯甲酸內酯如玉米赤霉醇、β-受體激動劑等要確證指令96/23/EC附錄I-B組所列的物質，最少需要3個識別點，包括獸藥和污染物，獸藥如抗菌藥、驅蟲藥、抗球蟲藥、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類、鎮(zhèn)靜藥、非甾體抗炎藥等；其他環(huán)境污染物如有機氯、有機磷、真菌毒素、染料等本文檔共63頁；當前第26頁；編輯于星期一\3點56分MS技術每種離子的識別點數(shù)低分辨質譜（LR）1.0LR-MSn母離子1.0LR-MSn子離子1.5高分辨質譜（HR）2.0HR-MSn母離子2.0HR-MSn子離子2.5質量碎片類型和識別點的關系每個離子計算一次

EI-GC-MS、CI-GC-MS作為不同的技術計算用不同反應得到的衍生物，可增加識別點數(shù)包括二級離子和多級離子可最多結合三種不同的技術確定最小識別點數(shù)二、定性（確證）方法本文檔共63頁；當前第27頁；編輯于星期一\3點56分本文檔共63頁；當前第28頁；編輯于星期一\3點56分m/z+202→122m/z-179→79.9ESI-ESI+甜蜜素SN/T1948-2007進出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測方法本文檔共63頁；當前第29頁；編輯于星期一\3點56分應研究樣品基質和檢測器性能引起的圖譜改變本文檔共63頁；當前第30頁；編輯于星期一\3點56分化合物保留時間（min）定性離子對定量離子對Fragmentor（V）CE（V）麻黃堿6.9166/148166/1488010166/13320偽麻黃堿8.0166/148166/1488010166/13320本文檔共63頁；當前第31頁；編輯于星期一\3點56分外標法內標法標準加入法基質效應三、定量方法本文檔共63頁；當前第32頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法

1.外標法單點校正法外標標準曲線法本文檔共63頁；當前第33頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法

單點校正法實際上是利用原點作為標準曲線上的另一個點，當方法存在系統(tǒng)誤差時（即標準工作曲線不通過原點），單點校正法的誤差較大單點校正法本文檔共63頁；當前第34頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法以純溶劑配制標準工作溶液GB/T21317-2007動物源性食品中四環(huán)素類獸藥殘留量檢測方法“根據(jù)樣液中被測四環(huán)素類獸藥殘留的含量情況，選定峰高相近的標準工作溶液”，“對標準工作溶液和樣液等體積參插進樣測定”GB/T22147-2008飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測定“采用M+1的準分子離子的色譜峰面積做單點校正定量”單點校正法本文檔共63頁；當前第35頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法以空白樣品提取液配制標準工作溶液GB/T21320-2007動物源食品中阿維菌素類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法“分別取適量試樣溶液和相近濃度的基質添加標準工作溶液，做單點校正”，“對標準工作液和樣品溶液等體積參插進樣進行測定”單點校正法本文檔共63頁；當前第36頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法以純溶劑配制標準工作溶液GB/T22260-2008

飼料中甲基睪丸酮的測定高效液相色譜串聯(lián)質譜法GB/T22955-2008河豚魚、鰻魚和烤鰻中苯并咪唑類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法GB/T21324-2007食用動物肌肉和肝臟中苯并咪唑類藥物殘留量檢測方法外標標準曲線法本文檔共63頁；當前第37頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法以空白樣品提取液配制標準工作溶液GB/T23409-2009蜂王漿中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法GB/T23408-2009蜂蜜中大環(huán)內酯類藥物殘留量測定液相色譜-質譜/質譜法GB/T22986-2008牛奶和奶粉中氫化潑尼松殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法GB/T22978-2008牛奶和奶粉中地塞米松殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法外標標準曲線法本文檔共63頁；當前第38頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法

空白樣品加入系列濃度的標準工作液，提取后得到系列基質標準工作液GB/T21312-2007動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法液相色譜-質譜/質譜法GB/T22969-2008奶粉和牛奶中鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那霉素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法GB/T

水果、蔬菜中啶蟲脒殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法GB/T21313-2007動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測方法液相色譜-質譜/質譜法外標標準曲線法本文檔共63頁；當前第39頁；編輯于星期一\3點56分a:以純溶劑配制標準溶液，測定的峰面積Aab:以空白樣品的提取液配制標準溶液，測定的峰面積Abc:在空白樣品加入標準溶液，提取后得到基質標準溶液，測定的峰面積Ac絕對回收率Ac/Aa，包含提取效率和基質效應提取回收率Ac/Ab，不包含基質效應絕對回收率=提取回收率*絕對基質效應GB/T27404-2008實驗室質量控制規(guī)范食品理化檢測“如果檢測結果用回收率進行校準，應在原始記錄的結果中明確說明并描述校準公式”三、定量方法本文檔共63頁；當前第40頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法

2.內標法單點校正法內標標準曲線法本文檔共63頁；當前第41頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法

2.內標法內標物要滿足以下要求：（a）試樣中不含有該物質；（b）與被測組分性質比較接近；（c）不與試樣發(fā)生化學反應；（d）出峰位置應位于被測組分附近。本文檔共63頁；當前第42頁；編輯于星期一\3點56分內標法計算式準確稱取一定量的試樣m，加入一定量內標物ms，試樣中待測物的含量wi為：本文檔共63頁；當前第43頁；編輯于星期一\3點56分內標法特點(a)內標法的準確性較高，操作條件和進樣量的稍許變動對定量結果的影響不大(b)內標物和被測組分處在同一基體中，因此可以消除基體帶來的干擾(c)若將內標法中的試樣取樣量和內標物加入量固定，則：內標標準曲線法本文檔共63頁；當前第44頁；編輯于星期一\3點56分內標標準曲線定量方法

配制系列標準溶液，分別加入等量的內標物,混合后進行色譜分析。以待測組分的濃度為橫坐標，待測組分與內標物峰面積（或峰高）的比率為縱坐標建立標準曲線（或線性方程）

在分析未知樣品時，分別加入與繪制標準曲線時等量的內標物，用樣品與內標物峰面積（或峰高）的比值，在標準曲線上查出被測組分的濃度或用線形方程計算本文檔共63頁；當前第45頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法內標標準曲線法以純溶劑配制系列標準工作溶液GB/T23406-2009腸衣中硝基咪唑類藥物及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法GB/T23407-2009蜂王漿中硝基咪唑類藥物及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法GB/T23411-2009蜂王漿中17種喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法GB/T23412-2009蜂蜜中19種喹諾酮類藥物殘留量的測定方法液相色譜-質譜/質譜法本文檔共63頁；當前第46頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法內標標準曲線法以空白樣品的提取液配制系列標準工作溶液GB/T22992-2008牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法GB/T22959-2008河豚魚、鰻魚和烤鰻中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法GB/T20756-2006可食動物肌肉、肝臟和水產品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法本文檔共63頁；當前第47頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法內標標準曲線法空白樣品加入系列濃度的標準工作液，提取后得到基質標準工作液GB/T21311-2007動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜串聯(lián)質譜法GB/T21310-2007動物源性食品中甲狀腺拮抗劑殘留量檢測方法高效液相色譜-串聯(lián)質譜法本文檔共63頁；當前第48頁；編輯于星期一\3點56分沙丁胺醇-D36.10克倫特羅-D915.6沙丁胺醇6.16塞曼特羅7.01特布他林6.24塞布特羅11.07萊克多巴胺14.65克倫特羅15.66溴代克倫特羅16.52溴布特羅17.47苯氧丙酚胺18.72馬布特羅18.77馬賁特羅23.11內標的選擇

GB/T22286-2008保留時間minSN/T1924-2007本文檔共63頁；當前第49頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法3.標準加入法先測定出未知樣品的大概值，然后根據(jù)這個測定值去設定標準加入法標準加入法中第一點加入標準溶液為“0”，第二點加入的量約與待測組分的含量大致相等，共3~5個點，以加入的標準溶液的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制工作曲線工作曲線在橫坐標延長線上的交點到坐標原點的距離即為樣品中待測組分的濃度本文檔共63頁；當前第50頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法3.標準加入法標準加入法可以看作是內標法和外標法的結合由于待測組分以及加入的標準溶液處在相同的樣品基體中，因此，這種方法可以消除基質干擾但是，由于對每一個樣品都要配制三個以上的、含樣品溶液和標準溶液的混合溶液，因此，這種方法不適于大批樣品的分析本文檔共63頁；當前第51頁；編輯于星期一\3點56分前提具有線性關系，并且標準曲線通過坐標原點盡可能減小系統(tǒng)誤差試樣的基質效應不得隨被測組分含量對干擾組分含量比值改變而改變必須扣除背景和空白值

3.標準加入法三、定量方法本文檔共63頁；當前第52頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法概念產生機制來源如何評價如何消除4.基質效應本文檔共63頁；當前第53頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法基質效應是指在樣品測試過程中，由于待測物以外的其他物質的存在，直接或間接影響待測物響應的現(xiàn)象由于質譜檢測的高選擇性，基質效應的影響在色譜圖上往往觀察不到，即空白基質色譜圖表現(xiàn)為一條直線，但這些共流出組分會改變待測物的離子化效率，引起對待測物檢測信號的抑制或提高4.基質效應本文檔共63頁；當前第54頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法待測物與基質成分的電荷競爭形成氣態(tài)離子的競爭改變表面張力，形成大液滴，不充分的去溶劑化基質效應的產生機制本文檔共63頁；當前第55頁；編輯于星期一\3點56分三、定量方法內源性的：來源于待測樣品，如蛋白、脂質、多糖、目標組分的類似物，其他色譜共流出物