分光光度測(cè)定方法-4

第三節(jié)分光光度測(cè)定方法一、普通分光光度法二、示差分光光度法三、雙波長(zhǎng)分光光度法一、普通分光光度法1.單組分的測(cè)定通常采用A-C標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定。2.多組分的同時(shí)測(cè)定⑴假設(shè)各組分的吸收曲線互不重疊，那么可在各自最大吸收波長(zhǎng)處分別進(jìn)行測(cè)定。這本質(zhì)上與單組分測(cè)定沒(méi)有區(qū)別。⑵假設(shè)各組分的吸收曲線互有重疊，那么可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。Aλ1=εaλ1bCa＋εbλ1bCbAλ2=εaλ2bCa＋εbλ2bCb二、示差分光光度法普通分光光度法一般只適于測(cè)定微量組分，當(dāng)待測(cè)組分含量較高時(shí)，將產(chǎn)生較大的誤差，可需采用示差法，即提高入射光強(qiáng)度，并采用濃度稍低于待測(cè)溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液。

設(shè)：待測(cè)溶液濃度為cx，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs(cs<cx)。那么：Ax=εbcxAs=εbcsΔＡ＝Ａx－Ａs=εb(cx－cs〕=εbΔc測(cè)得的吸光度相當(dāng)于普通法中待測(cè)溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度之差ΔＡ。三、雙波長(zhǎng)分光光度法

不需空白溶液作參比；但需要兩個(gè)單色器獲得兩束單色光(λ1和λ2)；以參比波長(zhǎng)λ1處的吸光度Aλ1作為參比，來(lái)消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復(fù)雜試樣時(shí)顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測(cè)量精密度等方面都比單波長(zhǎng)法有所提高。

ΔA

＝Aλ2－Aλ1＝(ελ2－ελ1)bc

兩波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度差值ΔA與待測(cè)組分濃度成正比。ελ1和ελ2分別表示待測(cè)組分在λ1和λ2處的摩爾吸光系數(shù)。

關(guān)鍵問(wèn)題:測(cè)量波長(zhǎng)λ2和參比波長(zhǎng)λ1的選擇與組合以兩組分x和y的雙波長(zhǎng)法測(cè)定為例：設(shè)：x為待測(cè)組分，y為干擾組分，二者的吸光度差分別為:ΔAx和ΔAy，那么該體系的總吸光度差ΔAx+y為：ΔAx+y=ΔAx+ΔAy如何選擇波長(zhǎng)λ1、λ2有一定的要求。選擇波長(zhǎng)組合λ1、λ2的根本要求⑴選定的波長(zhǎng)λ1和λ2處干擾組分應(yīng)具有相同吸光度，即：ΔAy=ΔAyλ2－ΔAyλ1=0故：ΔAx+y=ΔAx=(εxλ2－εxλ1)bcx此時(shí)：測(cè)得的吸光度差ΔA只與待測(cè)組分x的濃度呈線性關(guān)系，而與干擾組分y無(wú)關(guān)。假設(shè)x為干擾組分，那么也可用同樣的方法測(cè)定y組分。

可采用作圖法