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第三節(jié)分光光度測定方法一、普通分光光度法二、示差分光光度法三、雙波長分光光度法一、普通分光光度法1.單組分的測定通常采用A-C標準曲線法定量測定。2.多組分的同時測定⑴假設各組分的吸收曲線互不重疊，那么可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質(zhì)上與單組分測定沒有區(qū)別。⑵假設各組分的吸收曲線互有重疊，那么可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。Aλ1=εaλ1bCa＋εbλ1bCbAλ2=εaλ2bCa＋εbλ2bCb二、示差分光光度法普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分含量較高時，將產(chǎn)生較大的誤差，可需采用示差法，即提高入射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。

設：待測溶液濃度為cx，標準溶液濃度為cs(cs<cx)。那么：Ax=εbcxAs=εbcsΔＡ＝Ａx－Ａs=εb(cx－cs〕=εbΔc測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差ΔＡ。三、雙波長分光光度法

不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色光(λ1和λ2)；以參比波長λ1處的吸光度Aλ1作為參比，來消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復雜試樣時顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。

ΔA

＝Aλ2－Aλ1＝(ελ2－ελ1)bc

兩波長處測得的吸光度差值ΔA與待測組分濃度成正比。ελ1和ελ2分別表示待測組分在λ1和λ2處的摩爾吸光系數(shù)。

關(guān)鍵問題:測量波長λ2和參比波長λ1的選擇與組合以兩組分x和y的雙波長法測定為例：設：x為待測組分，y為干擾組分，二者的吸光度差分別為:ΔAx和ΔAy，那么該體系的總吸光度差ΔAx+y為：ΔAx+y=ΔAx+ΔAy如何選擇波長λ1、λ2有一定的要求。選擇波長組合λ1、λ2的根本要求⑴選定的波長λ1和λ2處干擾組分應具有相同吸光度，即：ΔAy=ΔAyλ2－ΔAyλ1=0故：ΔAx+y=ΔAx=(εxλ2－εxλ1)bcx此時：測得的吸光度差ΔA只與待測組分x的濃度呈線性關(guān)系，而與干擾組分y無關(guān)。假設x為干擾組分，那么也可用同樣的方法測定y組分。

可采用作圖法

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