沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)詳細(xì)流程演示文稿

沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)詳細(xì)流程演示文稿本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)菌概況沙門(mén)菌是1885年由Salmon氏等在豬霍亂流行時(shí)，分離出的豬霍亂沙門(mén)菌，由于Salmon氏對(duì)本屬細(xì)菌的發(fā)現(xiàn)貢獻(xiàn)卓越，故定名為沙門(mén)菌屬。沙門(mén)菌屬是腸桿菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原結(jié)構(gòu)、生化特性相似的革蘭氏陰性桿菌。血清型繁多，目前已發(fā)現(xiàn)的沙氏菌有2500多個(gè)血清型和變種。我國(guó)發(fā)現(xiàn)的有250多個(gè)血清型。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)菌的分類(lèi)根據(jù)生化反應(yīng)不同，分為2個(gè)種：腸道沙門(mén)菌（Samonellaenterica）： Ⅰ腸道亞種（subsp.enterica）Ⅱ薩拉姆亞種

（subsp.salamae）Ⅲ亞利桑那亞種（subsp.arizonae）

Ⅳ豪頓亞種（subsp.houtenae）Ⅵ因迪卡亞種（subsp.indica）邦戈?duì)柹抽T(mén)菌（Samonellabongori）Ⅴ

本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)菌種和亞種的鑒別項(xiàng)目腸道沙門(mén)菌邦戈?duì)柹抽T(mén)菌ⅠⅡⅢⅣⅥⅤ衛(wèi)矛醇＋＋－－－＋山梨醇＋＋＋＋－＋水楊苷－－－＋－－ONPG－－＋－－＋丙二酸鹽－＋＋－－－KCN－－－＋－＋注：+為陽(yáng)性-為陰性本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)氏菌的血清分型迄今為止沙門(mén)氏菌有57個(gè)O抗原116個(gè)H抗原Vi抗原

被分成2500多個(gè)血清型。Vi抗原O抗原H抗原本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)氏菌命名與書(shū)寫(xiě)方式目前的命名方法規(guī)定：腸道沙門(mén)菌腸道亞種（亞種Ⅰ）給予專(zhuān)用名，并采用標(biāo)本分離地址的地名。菌名的第一個(gè)字母需大寫(xiě)，且亞種Ⅰ的所用菌名不能用斜體。例如：腸道沙門(mén)菌鼠傷寒血清型應(yīng)書(shū)寫(xiě)為Salmonellaentericasubsp.entericaserotypeTyphimurium，但在實(shí)際工作中，可簡(jiǎn)寫(xiě)為S.Typhimurium。其他沙門(mén)氏菌均不給專(zhuān)用名，只在亞種數(shù)字名后直接書(shū)寫(xiě)抗原式，比如S.Ⅴ66:z35:-新的血清型名稱(chēng)的批準(zhǔn)必須有巴斯德研究所、德國(guó)漢堡衛(wèi)生研究所及美國(guó)CDC3個(gè)實(shí)驗(yàn)室的一致同意。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)程序本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分目的：修復(fù)損傷的細(xì)菌細(xì)胞；方法：25g（mL）樣品＋225mLBPW的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或置于盛有225mLBPW的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)。于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。前增菌本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分無(wú)菌均質(zhì)袋本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物，移取1mL,轉(zhuǎn)種于10mLTTB內(nèi),于42±1℃培養(yǎng)18～24h。同時(shí),另取1mL,轉(zhuǎn)種于10mLSC內(nèi),于36±1℃培養(yǎng)18～24h。分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán),劃線(xiàn)接種于一個(gè)BS瓊脂平板和一個(gè)XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或顯色培養(yǎng)基平板）。于36±1℃分別培養(yǎng)18～24h(XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、顯色培養(yǎng)基平板)或40h～48h(BS瓊脂平板)，觀(guān)察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落。為了最大可能的檢出沙門(mén)氏菌，原則上必須使用兩種以上選擇性分離培養(yǎng)基。選擇性增菌與分離本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分分離培養(yǎng)基回收率測(cè)定（%）進(jìn)口-SS65.3進(jìn)口-SS81.0國(guó)產(chǎn)-SS52.0進(jìn)口-HE83.2國(guó)產(chǎn)-HE80.0進(jìn)口-XLD83.0國(guó)產(chǎn)-XLD86.2進(jìn)口-BS106.6國(guó)產(chǎn)-BS77.7CHRO顯色68.4國(guó)產(chǎn)-DHL98.4國(guó)產(chǎn)-WS71.6TSA（對(duì)照）100.0本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分典型菌落--BS

菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色,菌落周?chē)囵B(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落,周?chē)囵B(yǎng)基不變。國(guó)產(chǎn)BS進(jìn)口BS本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分典型菌落--HE國(guó)產(chǎn)HE進(jìn)口HE藍(lán)綠色或藍(lán)色,多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色,中心黑色或幾乎全黑色。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分典型菌落--XLD進(jìn)口XLD國(guó)產(chǎn)XLD菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分初篩微生物菌落顏色特異性靈敏度沙門(mén)氏菌紫色(直徑約1mm)89％100%檸檬酸桿菌屬藍(lán)色(直徑約1mm)---變形桿菌無(wú)色或被抑制---(銅綠假單胞菌也呈紫紅色，可以通過(guò)前增菌排除。所以推薦在檢測(cè)中的前增菌用TTB。粉紅色、深紅色、干燥菌落、邊緣鋸齒狀等均非沙門(mén)氏菌菌落。）本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分生化試驗(yàn)

自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，分別接種三糖鐵（TSI）瓊脂、賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板；取菌落一部分于斜面劃線(xiàn)后穿刺底層。接種針在接種TSI后不要滅菌，直接接種賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，于36℃培養(yǎng)18～24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分穿刺TSI方法本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分接種三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí)，可直接接種蛋白胨水(供做靛基質(zhì)試驗(yàn))、尿素瓊脂(pH7.2)、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基，也可在初步判斷結(jié)果后從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h,必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于2℃～5℃或室溫至少保留24h，以備必要時(shí)復(fù)查。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)氏菌屬的三糖鐵和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)結(jié)果

三糖鐵瓊脂

賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基

初步判斷

斜面

底層

產(chǎn)氣

硫化氫

-+＋（－）

＋（－）

＋可疑沙門(mén)氏菌屬

-+＋（－）

＋（－）

－可疑沙門(mén)氏菌屬

++＋（－）

＋（－）

＋可疑沙門(mén)氏菌屬

++＋/－

＋/－

－非沙門(mén)氏菌

注：＋陽(yáng)性，－陰性；＋（－）多數(shù)陽(yáng)性,少數(shù)陰性；＋/－陽(yáng)性或陰性。

該表顯示：只有在三糖鐵斜面產(chǎn)酸、底層產(chǎn)酸；同時(shí)賴(lài)氨酸陰性的菌株可排除。其他反應(yīng)結(jié)果均有沙門(mén)菌屬的可能，同時(shí)也均有不是沙門(mén)菌的可能。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分TSI的反應(yīng)賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表

反應(yīng)序號(hào)

硫化氫

（H2S）

靛基質(zhì)

pH7.2尿素

氰化鉀

（KCN）

賴(lài)氨酸脫羧酶

A1＋

－

－

－

＋

A2＋

＋

－

－

＋

A3－

－

－

－

＋/－

注：＋陽(yáng)性；－陰性；＋/－陽(yáng)性或陰性。

反應(yīng)序號(hào)A1：為典型反應(yīng)判定為沙門(mén)氏菌屬。如尿素、KCN和賴(lài)氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常,按下表可判定為沙門(mén)氏菌。如有2項(xiàng)異常為非沙門(mén)氏菌。

本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表

pH7.2尿素

氰化鉀(KCN)賴(lài)氨酸脫羧酶

判

定

結(jié)

果

－

－

－

甲型副傷寒沙門(mén)氏菌(要求血清學(xué)鑒定結(jié)果)－＋＋沙門(mén)氏菌Ⅳ或Ⅴ(要求符合本群生化特性)＋－＋沙門(mén)氏菌個(gè)別變體(要求血清學(xué)鑒定結(jié)果)注：＋表示陽(yáng)性；＋表示陰性。

反應(yīng)序號(hào)2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門(mén)菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項(xiàng)結(jié)果均為陽(yáng)性；反應(yīng)序號(hào)3：補(bǔ)做ONPG，ONPG陰性，同時(shí)賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性為沙門(mén)菌；但甲型副傷寒沙門(mén)菌賴(lài)氨酸脫羧酶為陰性。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)氏菌屬各生化群的鑒別

必要時(shí)按此表進(jìn)行沙門(mén)菌生化群鑒定

項(xiàng)

目

ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ衛(wèi)矛醇

＋

＋

－

－

＋

－

山梨醇＋＋＋＋＋－水楊苷－－－＋－－ONPG－－＋－＋－丙二酸鹽－＋＋－－－KCN－－－＋＋－注：＋表示陽(yáng)性;－表示陰性。

本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)菌的其他鑒定API20EVITEK32GNI＋卡片本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分沙門(mén)菌的血清學(xué)鑒定培養(yǎng)基：一般使用新鮮營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面作純培養(yǎng)，取斜面上部培養(yǎng)物作O抗原玻片凝集試驗(yàn)，下部凝結(jié)水里的培養(yǎng)物作H抗原。H抗原的位相誘導(dǎo)試驗(yàn)制備半固體瓊脂，融化完全分裝10ml/管，121℃滅菌15分鐘，冷至50℃?zhèn)溆?。取誘導(dǎo)用血清1滴加到小平皿中，傾入冷至50℃的10ml半固體瓊脂，輕輕搖勻，凝固。將培養(yǎng)物接種到平板的中央，放入濕盒中培養(yǎng)過(guò)夜。取邊緣的菌進(jìn)行H抗原的檢測(cè)。本文檔共26頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期日\(chéng)17點(diǎn)23分血清學(xué)鑒定時(shí)的注意要點(diǎn)：做血清凝集時(shí)，同時(shí)